本文關(guān)鍵詞：骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植對大鼠急性肝衰竭保護(hù)作用的實驗研究

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【摘要】：研究目的：分離純化大鼠骨髓間充質(zhì)細(xì)胞(BMSCs),探討B(tài)MSCs移植對硫代乙酰胺(TAA)誘導(dǎo)的急性肝衰竭大鼠生存率、肝功能、肝臟病理及細(xì)胞因子的影響。 研究方法： 1.采用不同濃度TAA兩次灌胃造模,通過觀察大鼠死亡率及肝臟病檢,從而確定TAA建立大鼠急性肝衰竭模型的最適劑量。 2.采用全骨髓貼壁培養(yǎng)法分離并純化大鼠BMSCs,經(jīng)流式細(xì)胞儀檢測其表面抗原分子、細(xì)胞周期,經(jīng)成脂誘導(dǎo)培養(yǎng)基體外誘導(dǎo)分化,從而鑒定其是否為BMSCs。 3.將170只大鼠隨機分為空白對照組(20只)、BMSCs移植組(75只)、模型組(75只)。BMSCs移植組及模型組中各隨機抽取25只用以觀察并記錄大鼠兩次灌胃后96h內(nèi)的存活情況。制備大鼠ALF模型,BMSCs移植組經(jīng)尾靜脈注射BrdU標(biāo)記的BMSCs,模型組則注射PBS,空白對照組予以生理鹽水兩次灌胃,尾靜脈注射PBS。于兩次灌胃后24h、48h、72h及96h分別隨機在各組抽取5只大鼠腹腔麻醉,腹主動脈取血以檢測ALT、AST、TBil、AFP、TNF-a及IL-6水平,同時每只大鼠分別取相同部位肝組織,制作肝組織HE染色病理切片、冰凍切片以及行Western blot檢測肝組織中TNF-α和IL-6的表達(dá)水平。 結(jié)果： 1.兩次灌胃后96h400mg組大鼠死亡率明顯高于300mg組,300mg組死亡率明顯高于200mg組(P0.0083),200mg組與對照組死亡率無差異。肝臟炎癥程度隨著TAA劑量的加大,逐漸加重,300mg組即出現(xiàn)肝細(xì)胞大片狀壞死。 2.所培養(yǎng)的細(xì)胞呈均一梭型,漩渦狀排列,流式細(xì)胞儀檢測顯示P3代大鼠BMSCs強表達(dá)CD29,基本不表達(dá)造血細(xì)胞表面標(biāo)志CD34,體外誘導(dǎo)可分化為脂肪細(xì)胞。 3.兩次灌胃后48h及其以后在移植組大鼠肝臟內(nèi)發(fā)現(xiàn)大量定植的BMSCs。 4.兩次灌胃后96h模型組大鼠死亡率明顯高于移植組(P0.05)。 5.模型組和BMSCs移植組的肝功能指標(biāo)ALT、AST和TBil水平在各個時間點均明顯高于空白對照組(P0.001),同時在72h和96h時,模型組ALT、AST和TBil水平均明顯高于BMSCs移植組(P0.001)。 6.兩次灌胃后空白對照組和模型組的AFP水平在各個時間點沒有差異(P0.05)；而在96h時BMSCs移植組AFP水平明顯高于空白對照組和模型組(P0.001)。 7.兩次灌胃24h及其以后,BMSCs移植組和模型組的肝臟炎癥活動評分均較空白對照組高(P0.001)；同時在48h及其以后BMSCs移植組肝臟炎癥活動評分均明顯低于模型組(P0.05)。 8.兩次灌胃24h及其以后BMSCs移植組和模型組的血漿TNF-α及IL-6水平較空白對照組均明顯升高(P0.001)；同時BMSCs移植組的TNF-α及IL-6水平明顯低于模型組(P0.001)。肝組織中TNF-a及IL-6的表達(dá)水平在48h及96h移植組均低于模型組(P0.05)。 結(jié)論： 1.300mg/kg TAA兩次灌胃是造成大鼠ALF動物模型的最適劑量,可建立穩(wěn)定的大鼠ALF模型。 2.通過貼壁篩選培養(yǎng)法可分離獲得純度較高的大鼠BMSCs。 3.大鼠P3代BMSCs純度比較高,形態(tài)穩(wěn)定,活率高,具有強大的增殖能力,具有干細(xì)胞的一般生物學(xué)特性,故選取此代細(xì)胞用于后續(xù)實驗。 4. BMSCs通過尾靜脈移植可歸巢到大鼠受損的肝臟。 5.BMSCs早期移植可能通過分化為肝樣細(xì)胞和降低炎癥因子TNF-α、IL-6來顯著降低大鼠死亡率、改善大鼠肝功能、減輕肝臟炎癥程度,從而延緩大鼠ALF的進(jìn)程,對ALF具有一定的保護(hù)作用。
【學(xué)位授予單位】：昆明醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R575.3

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：1239161