本文關(guān)鍵詞：人胎盤絨毛間充質(zhì)干細胞在大鼠急性心肌梗死修復中的作用的實驗研究

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【摘要】：目的：人胎盤絨毛膜間充質(zhì)干細胞(Chorionic Mesenchymal stem cells, CMSCs)在體外適宜的培養(yǎng)條件下，容易擴增、具有向多種細胞分化的能力，且易形成毛細血管樣結(jié)構(gòu)，，使之成為心肌修復組織工程理想的種子細胞。本實驗在建立大鼠心肌梗死模型兩周后，經(jīng)開胸在左心室壁梗死區(qū)及邊緣區(qū)注射人CMSCs，觀察其改善心功能的效果，進一步探討其作用機制。 方法：選取剖腹產(chǎn)足月胎兒的胎盤，分離培養(yǎng)CMSCs細胞，流式細胞儀檢測CMSCs細胞表型、特異性染色檢測CMSCs三系分化潛能、毛細血管形成實驗檢測CMSCs體外成血管能力；實驗采用結(jié)扎大鼠左冠狀動脈前降支的方法建立大鼠急性心肌梗死模型，建模成功兩周后，開胸在心室壁梗死區(qū)及邊緣區(qū)行細胞移植。實驗動物分為四組：A（Sham組），僅開胸經(jīng)冠狀動脈下帶線不予結(jié)扎；B組（Control組），手術(shù)結(jié)扎左冠狀動脈前降支；C組（BMSCs移植組），開胸在心臟梗死區(qū)及邊緣區(qū)注射人BMSCs細胞；D組（CMSCs移植組），開胸在心臟梗死區(qū)及邊緣區(qū)注射人CMSCs細胞。細胞移植四周后，超聲心動圖檢查觀察大鼠心臟功能的改善情況、免疫組化檢測移植GFP+的CMSCs細胞在大鼠局部心梗區(qū)分化為內(nèi)皮細胞及毛細血管的新生情況。 結(jié)果：1.流式細胞檢測表明，培養(yǎng)的P3代CMSCs高表達CD73、CD90、CD105以及VEGF受體1（KDR），不表達血系細胞標志CDl4、CD34、CD45、HLA-DR。2.三系分化潛能測定表明CMSCs具有和BMSCs相似的分化潛能，經(jīng)成骨誘導后vonKossa染色可見細胞呈集落生長并出現(xiàn)鈣結(jié)節(jié)；經(jīng)成脂肪誘導，細胞內(nèi)有明顯的脂滴出現(xiàn)，油紅O染色陽性；經(jīng)成軟骨誘導，甲苯胺藍染色可見細胞被染成藍色，同時CMSCs較BMSCs具有良好的成血管能力；3. Masson染色結(jié)果顯示：心梗區(qū)大量心肌細胞壞死，消失，被膠原纖維取代后而染成藍色， CMSCs細胞移植組梗死區(qū)膠原纖維和彈性纖維均明顯減少，僅在心外膜見到少量彈性纖維。4.免疫熒光顯微鏡觀察，細胞移植4周后，局部心梗區(qū)仍有GFP+的CMSCs細胞存活。5.免疫組化染色結(jié)果表明，CMSCs細胞在大鼠心梗區(qū)分化并表達CD31及Ⅷ因子；6.心超結(jié)果提示，各組相比GFP+的CMSCs細胞移植組心臟左室舒張末內(nèi)徑（LVEDd）、左室收縮末內(nèi)徑(LVEDs)明顯減小，而心室射血分數(shù)(EF)、縮短分數(shù)（FS%)則明顯升高，心功能明顯改善，實驗結(jié)果差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。 結(jié)論：（1）CMSCs具有和BMSCs相似的分化潛能，同時具有良好的體外成血管能力，以及較強的體內(nèi)毛細血管內(nèi)皮細胞分化能力；（2）經(jīng)開胸心臟梗死區(qū)及邊緣區(qū)行CMSCs直接移植對大鼠急性心梗死后心功能恢復效果顯著；（3）CMSCs細胞可在大鼠心臟梗死區(qū)分化為內(nèi)皮細胞，參與局部毛細血管新生，從而改善大鼠心功能，此為CMSCs細胞參與大鼠急性心梗修復的可能機制之一。
【學位授予單位】：蘇州大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：R542.22

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前5條

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本文編號：1170035