本文關(guān)鍵詞：Necrostatin-1對創(chuàng)傷失血性休克大鼠肝臟保護(hù)作用的研究

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【摘要】：目的：探討Necrostatin-1(程序性壞死特異性抑制劑-1)對創(chuàng)傷失血性休克大鼠肝臟的保護(hù)作用。 方法：實(shí)驗(yàn)對象為清潔健康雄性SD大鼠,體重250-300g。實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)分為兩部分：第一部分為創(chuàng)傷失血性休克大鼠模型的建立。將40只雄性SD大鼠隨機(jī)分為假手術(shù)組(n=20)、模型組(n=20),模型組采用左下肢股骨、脛骨骨折及腹部軟組織損傷并失血的方法制備大鼠創(chuàng)傷失血性休克模型；假手術(shù)組僅麻醉和分離、結(jié)扎血管,不進(jìn)行創(chuàng)傷失血和再灌注。記錄各組大鼠24h死亡率；采用全自動生化儀檢測血清丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶(AST)的變化；蘇木素-伊紅(HE)染色觀察肝組織病理學(xué)改變。第二部分為應(yīng)用程序性壞死特異性抑制劑-1(Nec-1),觀察此抑制劑對創(chuàng)傷失血性休克大鼠肝臟的影響。將72只雄性SD大鼠隨機(jī)分為假手術(shù)組(n=24)、DMSO對照組(n=24)、Nec-1組(n=24),Nec-1組于再灌注前5min經(jīng)股靜脈給予1mg/kg Nec-1(1mg Nec-1溶于0.04mL DMSO中,加生理鹽水至0.5mL); DMSO對照組給予等體積溶劑。于再灌注后2h、4h、8h收集血清和肝組織,部分肝組織用石蠟包埋制作病理切片。采用全自動生化儀檢測ALT\AST的變化；采用蘇木素-伊紅(HE)染色觀察肝組織病理學(xué)改變；采用酶聯(lián)免疫法(ELISA)檢測血清腫瘤壞死因子-α(TNF-α)、白細(xì)胞介素-1β(IL-1β)的變化；采用逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)檢測肝組織TNF-α mRNA和IL-1β mRNA的表達(dá)；采用蛋白質(zhì)免疫印跡試驗(yàn)(Western blot)檢測肝組織受體相互作用蛋白酶1/3(RIP1和R1P3)的表達(dá)。 結(jié)果： 第一部分：建立創(chuàng)傷失血性休克大鼠模型,24h假手術(shù)組死亡率為0,而模型組死亡率為30.00%(P0.01)。模型組血清ALT、AST濃度較假手術(shù)組明顯升高(P0.01)。假手術(shù)組大鼠肝臟HE染色顯示肝細(xì)胞結(jié)構(gòu)正常,無明顯炎性細(xì)胞浸潤,未見變性、壞死；模型組大鼠肝臟HE染色顯示肝竇擴(kuò)張、淤血,大量炎性細(xì)胞浸潤,肝小葉結(jié)構(gòu)紊亂,部分肝細(xì)胞變性、壞死。 第二部分：(1)與假手術(shù)組相比較,DMSO組血清ALT、AST的濃度2h即開始升高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),8h達(dá)到高峰(P0.01)。而應(yīng)用Nec-1后,2h血清ALT、AST的濃度雖較DMSO組低,但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,而4h、8h血清ALT、AST的濃度均較DMSO組顯著降低(P0.01)。(2)HE染色光鏡下觀察假手術(shù)組各時(shí)間點(diǎn)肝組織結(jié)構(gòu)未見明顯異常。DMSO組：2h肝竇擴(kuò)張、淤血,肝小葉結(jié)構(gòu)紊亂,少量炎性細(xì)胞浸潤,4h-8h上述改變更加明顯,部分肝細(xì)胞變性、壞死。而應(yīng)用Nec-1后,各時(shí)間點(diǎn)肝損傷程度明顯減輕。(3)與假手術(shù)組相比較,DMSO組血清TNF-α、IL-1β的濃度2h即開始升高,8h達(dá)到高峰(P0.01)。而Nec-1組TNF-α、IL-1β的濃度各時(shí)間點(diǎn)均較DMSO組明顯降低(P0.05)。(4)RT-PCR檢測發(fā)現(xiàn),DMSO組肝組織TNF-α mRNA、 IL-1β mRNA的表達(dá)2h開始升高,8h達(dá)到高峰(P0.01),而應(yīng)用Nec-1后各時(shí)間點(diǎn)肝組織TNF-α mRNA、IL-1β mRNA的表達(dá)水平顯著低于DMSO組(P0.05)。(5)Western blot檢測發(fā)現(xiàn),與假手術(shù)組相比,DMSO組肝組織RIP1和RIP3的表達(dá)在2h即明顯增加,8h達(dá)到高峰(P0.01)。但Nec-1組與DMSO組相比,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)論： 1、本次實(shí)驗(yàn)證實(shí)創(chuàng)傷失血性休克時(shí)大鼠出現(xiàn)急性肝損害,可發(fā)現(xiàn)肝功能異常,肝組織及血清炎性因子的表達(dá)升高,肝臟病理學(xué)改變明顯；肝組織內(nèi)RIP1和RIP3的表達(dá)升高,說明程序性壞死在創(chuàng)傷失血性休克大鼠肝損傷機(jī)制中發(fā)揮重要作用； 2、應(yīng)用Nec-1后,可改善肝功能,減輕肝臟病理學(xué)變化,降低血清及肝組織炎性因子表達(dá),說明Nec-1對創(chuàng)傷失血性休克大鼠肝臟具有保護(hù)作用；但并不影響肝組織內(nèi)RIP1及RIP3的表達(dá),其具體機(jī)制尚需進(jìn)一步深入研究。
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R605.971

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6 吳，

本文編號：1155095