結(jié)球甘藍(lán)（Brassica oleracea L.var.capitata）是我國(guó)一種重要的蔬菜。目前,生產(chǎn)上為害甘藍(lán)生長(zhǎng)的主要是菜青蟲、小菜蛾、甘藍(lán)夜蛾和甜菜夜蛾等鱗翅目害蟲。甘藍(lán)類蔬菜中抗蟲種質(zhì)資源缺乏,因此利用傳統(tǒng)育種方法培育抗蟲品種比較困難。通過(guò)基因工程將外源抗蟲基因整合到植物基因組中,可為甘藍(lán)抗蟲育種提供有效的種質(zhì)資源。cry1Ia8基因是由中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院植物保護(hù)研究所分離克隆獲得的,其編碼的毒蛋白對(duì)小菜蛾等鱗翅目害蟲具有高毒力,與生產(chǎn)上常用的Cry1Ac抗蟲蛋白沒有交互抗性。cry1C基因是經(jīng)中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院植物保護(hù)研究所進(jìn)行密碼子優(yōu)化后由本課題組人工合成的基因,對(duì)鱗翅目夜蛾類害蟲有顯著的抗蟲效果。本研究構(gòu)建了cry1Ia8-cry1C雙價(jià)表達(dá)載體,利用根癌農(nóng)桿菌介導(dǎo)法將雙價(jià)基因?qū)虢Y(jié)球甘藍(lán),以期獲得兩種毒蛋白同時(shí)表達(dá)的轉(zhuǎn)基因植株,既可有效抑制小菜蛾、菜青蟲等害蟲,又可降低夜蛾類害蟲對(duì)甘藍(lán)的危害。同時(shí)對(duì)轉(zhuǎn)cry1Ia8基因甘藍(lán)和轉(zhuǎn)cry1Ia8-cry1Ba3基因甘藍(lán)后代的農(nóng)藝性狀、抗蟲性及對(duì)意大利蜜蜂的影響進(jìn)行了調(diào)查。主要研究結(jié)果如下:1.構(gòu)建cry1Ia8-cry1C雙價(jià)... 

【文章來(lái)源】：中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院北京市

【文章頁(yè)數(shù)】：56 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abatract
英文縮略表
第一章 引言
    1.1 植物轉(zhuǎn)基因研究進(jìn)展
        1.1.1 植物轉(zhuǎn)基因技術(shù)的原理和方法
        1.1.2 雙價(jià)及多價(jià)抗蟲基因的研究
        1.1.3 植物轉(zhuǎn)基因技術(shù)的應(yīng)用
    1.2 轉(zhuǎn)抗蟲基因在甘藍(lán)類蔬菜上的研究進(jìn)展
    1.3 轉(zhuǎn)基因植株的篩選與檢測(cè)技術(shù)
        1.3.1 轉(zhuǎn)基因植株的篩選
        1.3.2 轉(zhuǎn)基因植株的檢測(cè)
    1.4 轉(zhuǎn)基因植物花粉對(duì)非靶標(biāo)昆蟲意大利蜜蜂影響的研究進(jìn)展
    1.5 本研究的目的意義
        1.5.1 目的意義
        1.5.2 研究?jī)?nèi)容
第二章 雙價(jià)載體的構(gòu)建
    2.1 試驗(yàn)材料
        2.1.1 菌株及質(zhì)粒
        2.1.2 基因序列
    2.2 試驗(yàn)方法
        2.2.1 植物表達(dá)載體的構(gòu)建
        2.2.2 PCR檢測(cè)表達(dá)載體
        2.2.3 農(nóng)桿菌感受態(tài)細(xì)胞的制備
        2.2.4 根癌農(nóng)桿菌的轉(zhuǎn)化
        2.2.5 甘油農(nóng)桿菌制備
    2.3 結(jié)果與分析
        2.3.1 cry1Ia8-cry1C雙價(jià)載體結(jié)構(gòu)圖
        2.3.2 cry1Ia8-cry1C表達(dá)載體的PCR鑒定
        2.3.3 序列測(cè)定
    2.4 討論
第三章 根癌農(nóng)桿菌介導(dǎo)的雙價(jià)基因在甘藍(lán)上的遺傳轉(zhuǎn)化
    3.1 試驗(yàn)材料
        3.1.1 遺傳轉(zhuǎn)化材料
        3.1.2 質(zhì)粒載體
        3.1.3 培養(yǎng)基
        3.1.4 Cry1Ia8蛋白抗體
        3.1.5 試驗(yàn)所需試劑耗材
        3.1.6 主要儀器設(shè)備
    3.2 試驗(yàn)方法
        3.2.1 甘藍(lán)自交系F13J85轉(zhuǎn)化體系的優(yōu)化
        3.2.2 轉(zhuǎn)基因植株的獲得
        3.2.3 轉(zhuǎn)基因植株的檢測(cè)
    3.3 結(jié)果與分析
        3.3.1 再生及遺傳轉(zhuǎn)化體系的優(yōu)化
        3.3.2 轉(zhuǎn)基因植株的獲得
        3.3.3 轉(zhuǎn)基因植株的PCR檢測(cè)
        3.3.4 轉(zhuǎn)基因植株的Southern blot檢測(cè)
        3.3.5 轉(zhuǎn)基因植株的RT-PCR檢測(cè)
        3.3.6 轉(zhuǎn)基因植株的Western blot檢測(cè)
        3.3.7 轉(zhuǎn)基因植株Bt蛋白含量測(cè)定
    3.4 討論
第四章 轉(zhuǎn)基因甘藍(lán)田間性狀分析
    4.1 試驗(yàn)材料
    4.2 試驗(yàn)方法
        4.2.1 轉(zhuǎn)基因甘藍(lán)后代主要農(nóng)藝性狀調(diào)查
        4.2.2 轉(zhuǎn)基因甘藍(lán)T4代田間害蟲種類和數(shù)量調(diào)查
    4.3 結(jié)果與分析
        4.3.1 轉(zhuǎn)基因甘藍(lán)農(nóng)藝性狀調(diào)查分析
        4.3.2 轉(zhuǎn)基因甘藍(lán)田間抗蟲性研究
    4.4 討論
第五章 轉(zhuǎn)cry1Ia8基因甘藍(lán)花粉對(duì)意大利蜜蜂工蜂的影響
    5.1 試驗(yàn)材料
    5.2 試驗(yàn)方法
        5.2.1 供試蜜蜂及飼喂處理
        5.2.2 意大利蜜蜂工蜂存活率和體重的測(cè)定
        5.2.3 蜜蜂工蜂體內(nèi)代謝解毒酶活力的測(cè)定
        5.2.4 蜜蜂工蜂體內(nèi)中腸蛋白酶活力的測(cè)定
        5.2.5 實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)分析
    5.3 結(jié)果與分析
        5.3.1 轉(zhuǎn)cry1Ia8基因甘藍(lán)花粉對(duì)未成熟期蜜蜂存活率的影響
        5.3.2 取食Bt甘藍(lán)花粉和CK甘藍(lán)花粉后蜜蜂體重的變化
        5.3.3 取食Bt甘藍(lán)花粉和CK甘藍(lán)花粉后蜜蜂體內(nèi)主要代謝解毒酶活性的變化
        5.3.4 取食Bt甘藍(lán)花粉和CK甘藍(lán)花粉后蜜蜂體內(nèi)中腸蛋白酶活性的變化
    5.4 討論
第六章 全文結(jié)論
參考文獻(xiàn)
附錄
致謝
作者簡(jiǎn)介


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]轉(zhuǎn)Bt基因早熟春甘藍(lán)抗蟲材料的獲得[J]. 王麗,儀登霞,楊麗梅,劉建萍,方智遠(yuǎn),程斐,劉玉梅,莊木,張揚(yáng)勇,孫培田.  中國(guó)蔬菜. 2014(10)
[2]轉(zhuǎn)基因生物技術(shù)育種:機(jī)遇還是挑戰(zhàn)?[J]. 儲(chǔ)成才.  植物學(xué)報(bào). 2013(01)
[3]Transformation of Cabbage（Brassica oleracea L.var.capitata） with Bt cry1Ba3 Gene for Control of Diamondback Moth[J]. YI Deng-xia,CUI Lei,LIU Yu-mei,ZHUANG Mu,ZHANG Yang-yong,FANG Zhi-yuan and YANG Li-mei Key Laboratory of Horticultural Crops Genetic Improvement,Ministry of Agriculture/Institute of Vegetables and Flowers,Chinese Academy of Agricultural Sciences,Beijing 100081,P.R.China.  Agricultural Sciences in China. 2011(11)
[4]“十一五”我國(guó)甘藍(lán)遺傳育種研究進(jìn)展[J]. 楊麗梅,方智遠(yuǎn),劉玉梅,莊木,張揚(yáng)勇,孫培田.  中國(guó)蔬菜. 2011(02)
[5]白菜類蔬菜轉(zhuǎn)基因研究進(jìn)展[J]. 高麗,崔崇士,屈淑平.  中國(guó)蔬菜. 2010(12)
[6]轉(zhuǎn)Bt-cry1Ac基因棉花對(duì)意大利蜜蜂腸道細(xì)菌群落的影響*[J]. 姜瑋瑜,代平禮,張永軍,周婷,林毅,束長(zhǎng)龍,張杰.  應(yīng)用與環(huán)境生物學(xué)報(bào). 2010(02)
[7]棉鈴蟲對(duì)Bt殺蟲劑的抗性遺傳方式[J]. 郭芳,梁革梅,曹廣春,高希武,郭予元.  昆蟲學(xué)報(bào). 2010(04)
[8]Bt cry1Ia8抗蟲基因?qū)Y(jié)球甘藍(lán)的轉(zhuǎn)化及其表達(dá)[J]. 崔磊,楊麗梅,劉楠,郎志宏,劉玉梅,莊木,張揚(yáng)勇,張友軍,黃大昉,方智遠(yuǎn).  園藝學(xué)報(bào). 2009(08)
[9]雙價(jià)抗蟲植物表達(dá)載體p3300-bt-pta轉(zhuǎn)化苜蓿的初步研究[J]. 熊恒碩,康俊梅,楊青川,孫彥,唐克軒.  中國(guó)草地學(xué)報(bào). 2008(01)
[10]轉(zhuǎn)Bt-cry1Ab玉米花粉對(duì)意大利蜜蜂生長(zhǎng)發(fā)育及體內(nèi)酶活性的影響[J]. 田巖,張永軍,吳孔明,趙奎軍,彭于發(fā),郭予元.  農(nóng)業(yè)生物技術(shù)學(xué)報(bào). 2006(06)

博士論文
[1]轉(zhuǎn)Bt雙價(jià)基因甘藍(lán)的抗蟲性及遺傳穩(wěn)定性研究[D]. 儀登霞.中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué) 2014

碩士論文
[1]茄子高效再生和抗根結(jié)線蟲Bt cry6A基因轉(zhuǎn)化的研究[D]. 張明華.中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院 2014
[2]轉(zhuǎn)C4植物光合關(guān)鍵基因PEPC楊樹的初步分析[D]. 尹吳.南京林業(yè)大學(xué) 2009
[3]農(nóng)桿菌介導(dǎo)單、雙價(jià)抗蟲基因Bt、Bt-pinⅡ基因?qū)τ^賞羽衣甘藍(lán)的遺傳轉(zhuǎn)化研究[D]. 趙秀樞.西南大學(xué) 2009



本文編號(hào)：3491521