目的：本實(shí)驗(yàn)主要研究Ovo12基因?qū)Ψ蜗侔┘?xì)胞上皮一間充質(zhì)轉(zhuǎn)化(epithelial-mesenchymal transition,以下簡稱EMT)過程及其侵襲力、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移能力的影響,并進(jìn)一步探討其中可能存在的分子機(jī)制,以期為肺腺癌的靶向治療提供一定的理論基礎(chǔ)。方法：第一部分實(shí)驗(yàn)我們以臨床手術(shù)切除標(biāo)本為基礎(chǔ),通過免疫組化(Immunohistochemistry)實(shí)驗(yàn),我們檢測不同分期、不同分化程度及癌旁組織中Ovo12蛋白的表達(dá)水平,明確Ovo12的表達(dá)水平是否會有差異。第二部分細(xì)胞學(xué)實(shí)驗(yàn)均通過培養(yǎng)肺腺癌細(xì)于體外完成。培養(yǎng)肺腺癌細(xì)胞株A549,通過構(gòu)建并感染PLV-BSD-Ovol2(過表達(dá)Ovo12)及PLV-BSD-Control慢病毒形成實(shí)驗(yàn)組(過表達(dá)Ovol2)和對照組；首先,通過實(shí)時(shí)熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)(Quant it ative Real-time PCR,以下簡稱Real-time PCR)檢測實(shí)驗(yàn)組、對照組細(xì)胞中與EMT相關(guān)基因的mRNA表達(dá)水平變化,明確Ovo12過表達(dá)后是否能夠在mRNA水平抑制抑制與EMT相關(guān)基因的表達(dá)；進(jìn)一步,我們采用Western-Blot蛋白印記實(shí)驗(yàn)檢測上皮細(xì)胞與間充質(zhì)細(xì)胞的相關(guān)標(biāo)記蛋白,如E-鈣黏蛋白(E-cadherin)、 N-鈣黏蛋白(N-cadherin)及波形蛋白(Vimentin)等的蛋白表達(dá)水平,從而進(jìn)一步明確是否被Ovol2所抑制；更進(jìn)一步,我們通過染色質(zhì)免疫共沉淀實(shí)驗(yàn)(Chromatin immunoprecipitation,以下簡稱ChIP)、熒光素酶實(shí)驗(yàn)(Luciferase Reporter Gene Assays,以下簡稱LUC實(shí)驗(yàn))及拯救實(shí)驗(yàn)(rescue實(shí)驗(yàn))來進(jìn)一步探究其可能的分子機(jī)制。最后,我們通過劃痕實(shí)驗(yàn)(Wound Healing)及侵襲實(shí)驗(yàn)(Transwell)比較實(shí)驗(yàn)組和對照組細(xì)胞的轉(zhuǎn)移和侵襲能力的變化,從直觀上直接觀察細(xì)胞侵襲及轉(zhuǎn)移能力的變化。結(jié)果：Ovol2基因過表達(dá)后,不論在mRNA還是在蛋白表達(dá)水平,E-鈣黏蛋白表達(dá)上升,N-鈣黏蛋白及波形蛋白表達(dá)下降；如若進(jìn)一步同時(shí)將被Ovo12基因明顯抑制的轉(zhuǎn)錄因子Twistl過表達(dá)后,這種抑制作用會被部分抵消。而且,Ovo12可以直接結(jié)合與轉(zhuǎn)錄因子Twist1的啟動子序列,從而來調(diào)控(抑制)其表達(dá),這種抑制作用是一種劑量依賴性的；最后肺癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移和侵襲能力也相應(yīng)的被抑制。結(jié)論：Ovo12基因可以通過直接抑制轉(zhuǎn)錄因子Twistl的表達(dá)來抑制肺腺癌細(xì)胞的EMT過程,從而抑制其遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移及侵襲力。
【學(xué)位授予單位】：安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R734.2

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 楊晉平,王澤,張?zhí)K;肺腺癌5-羥色胺受體的免疫組織化學(xué)定位[J];四川解剖學(xué)雜志;2003年02期

2 吳一龍,林嘉穎,楊學(xué)寧,喬貴賓,王坤,陳剛;肺腺癌患者酪氨酸激酶信號傳導(dǎo)通路的異常與臨床預(yù)后[J];中華醫(yī)學(xué)雜志;2004年12期

3 張利群,陳杭薇,王四海,辛慶紅,杜玉國,尤蘭華;人呼吸道合胞病毒轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)基因轉(zhuǎn)染肺腺癌細(xì)胞系的研究[J];山東醫(yī)藥;2005年12期

4 黎聯(lián);梅同華;周向東;張新高;車德亞;;細(xì)胞外信號調(diào)節(jié)激酶信號通路與基質(zhì)金屬蛋白酶-26在肺腺癌表達(dá)中的關(guān)系[J];第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào);2009年02期

5 王亞南;顧國浩;;生物芯片在肺腺癌研究和診療中的應(yīng)用進(jìn)展[J];國際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志;2011年02期

6 ;我國人體肺腺癌細(xì)胞系建立[J];腫瘤;1981年06期

本文編號：1560635