ADP-葡萄糖焦磷酸化酶（AGPase）是淀粉生物合成中的關鍵酶,由成對的兩個大亞基（AGPL）和成對的兩個小亞基（AGPS）組成的異源四聚體,分為胞質型和質體型兩種,因此,在植物細胞內存在四類AGPase亞基:AGPase胞質型大亞基（AGPL1）、胞質型小亞基（AGPS1）、質體型大亞基（AGPL2）和質體型小亞基（AGPS2）。課題組前期研究結果表明,小麥淀粉合成基因TaAGPL1的過表達能顯著提高小麥籽粒AGPase活性和淀粉積累速率,從而證明了它在小麥籽粒淀粉合成中的重要作用。本研究運用酵母單雜交技術,通過將TaAGPL1 promoter與小麥籽粒cDNA文庫進行酵母單雜交,篩選出控制TaAGPL1基因表達的上游調控因子,并利用大麥條紋花葉病毒誘導的基因沉默（BSMV-VIGS）技術對調控因子進行功能研究,從而探究了調控TaAGPL1基因表達的分子機制。主要結果如下:（1）運用酵母單雜交技術篩選出控制TaAGPL1表達的兩個調控因子（TabHLH39轉錄因子和TaPDIL1-2分子伴侶）。分離出TabHLH39基因的cDNA序列,它編碼了486個氨基酸,蛋白序列包含了bHL... 

【文章來源】：河南農業(yè)大學河南省

【文章頁數】：56 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

禾本科胚乳細胞內淀粉合成的過程(Jeonetal.,2010;PfisterandZeeman2016)

tal.,2005;Radchuketal.,2009;Yanetal.,2009;Kangetal.,2013a;Wangetal.,2014;Bahajietal.,2014;Bilaletal.,2015;Houetal.,2017)。1.2AGPase同工酶基因研究進展在禾本科作物淀粉合成的六大類相關酶中，AGPase在淀粉合成過程中發(fā)揮著關鍵作用，這是因為經AGPase催化合成的ADP-Glc是淀粉合成的底物(Tetlowetal.,2004;Devietal.,2010;TuncelandOkita,2013)。根據在細胞內存在的部位不同，AGPase分為胞質型(cytosolic)和質體型(plastidial)兩類，其結構是由成對的兩個大亞基與小亞基組成的異源四聚體(GeorgelisandHannah,2008)(圖1.2)。因此，在植物細胞內AGPase存在著4種類型的亞基：即胞質型大亞基和小亞基(cytosoliclargesubunit,AGPL1或LSUI；cytosolicsmallsubunit，AGPS1或SSUI)、質體型大亞基和小亞基(plastidiallargesubunit,AGPL2或LSUII；plastidialsmallsubunit,AGPS2或SSUII)(Burtonetal.,2002;Tetlowetal.,2004)。圖1.2高等植物細胞內AGPase異源四聚體的結構(TuncelandOkita2013)注：A和C為大亞基，B和D為小亞基Fig.1.2StructureofAGPaseheterotetramerinhigherplantcells.Note:A,CandB,Darelargesubunitandsmallsubunit,respectively.

件結合位點的預測等方面的探索提供了寶貴依據。1.3.3酵母單雜交技術酵母單雜交是一種研究真核生物內DNA-蛋白質間相互作用的技術，具有最強活性的啟動子片段通過與cDNA文庫單雜交從而直接篩選到與靶基因互作的蛋白。基本原理：將已知特定功能的順式元件構建到最基本啟動子(minimalpromoter,Pmin)的上游，在Pmin的下游連接報告基因(常用的有HIS3系統(tǒng))。之后，將酵母轉錄激活結構域(transcriptionactivationdomain,AD)融合表達載體與cDNA文庫共轉酵母細胞，通過觀察與檢測報告基因是否表達，從而來確定是否篩選到互作調控因子(圖1.3)。圖1.3酵母單雜交原理Fig.1.3Theprincipleofyeastone-hybridassay.酵母單雜交技術具有操作簡便、效率高、反應靈敏等優(yōu)點，所以被廣泛應用于植物轉錄調控方面的研究。目前，許多關于運用此技術而篩選出調控因子的文章已被大量報道，如Gao等人運用酵母單雜交技術篩選出與BjCHI1啟動子中W-box元件相結合的BjMYB轉

【參考文獻】：
期刊論文
[1]轉錄因子在植物進化和抗逆中的作用[J]. 孫麗芳,邢少辰,張君,楊建福,王興智,董英山.  基因組學與應用生物學. 2009(03)

博士論文
[1]病原誘導啟動子和組織特異性啟動子的分離克隆和功能鑒定[D]. 蔡萌.華中農業(yè)大學 2007



本文編號：3489398