本文關(guān)鍵詞：結(jié)直腸癌中RNF43基因突變的病理意義

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【摘要】：結(jié)直腸癌是嚴(yán)重威脅人類健康的惡性消化道腫瘤之一,對結(jié)直腸癌發(fā)病機(jī)制以及防治策略的研究具有十分重要的現(xiàn)實(shí)意義。在經(jīng)典的正常上皮-腺瘤-腺癌序列中Wnt通路激活是重要的早期環(huán)節(jié),對Wnt通路信號強(qiáng)度調(diào)控的研究有助于闡明結(jié)直腸癌的發(fā)病機(jī)制。環(huán)指蛋白43(Ring finger protein 43, RNF43)是Wnt信號通路中重要的負(fù)向調(diào)控因子之一,具有清除細(xì)胞膜Wnt受體以及阻滯TCF4 (T cell factor 4)入核的功能,在通路中發(fā)揮Wnt信號抑制作用。RNF43的異常表達(dá)、突變等改變對Wnt信號通路的活化程度有重大影響,與腫瘤的發(fā)生發(fā)展有密切聯(lián)系,在臨床可能具有較為重要的意義。有研究報道RNF43的突變在高頻微衛(wèi)星不穩(wěn)定(High-frequency microsatellite instability,MSI-H)的腫瘤中發(fā)生頻率較高,其突變情況與微衛(wèi)星不穩(wěn)定性相關(guān)。RNF43的截短突變絕大多數(shù)發(fā)生在MSI-H情況下且與APC突變極少同時發(fā)生。這提示RNF43功能缺失對Wnt通路激活程度的影響很可能是MSI類型結(jié)直腸癌發(fā)生機(jī)制中重要的一環(huán),對其基因突變情況及微衛(wèi)星不穩(wěn)定情況的綜合分析可能有助于闡明其在臨床的功能效應(yīng)。對比在微衛(wèi)星穩(wěn)定／微衛(wèi)星不穩(wěn)定病例中RNF43基因的改變情況與臨床參數(shù)、預(yù)后之間的差異,有助于尋找新的預(yù)測標(biāo)志物、為個體化治療提供指導(dǎo),具有重要的實(shí)際應(yīng)用價值和理論意義。KRAS/BRAF的突變狀態(tài)與微衛(wèi)星不穩(wěn)定狀態(tài)均可以作為預(yù)測預(yù)后的指標(biāo),且均與耐藥存在關(guān)聯(lián),因此我們還對其與KRAS/BRAF突變狀態(tài)的關(guān)聯(lián)進(jìn)行了分析,以深入探討RNF43對預(yù)后可能存在的效應(yīng)。本次研究選取的446例散發(fā)性結(jié)直腸癌樣本均取自經(jīng)福爾馬林固定-石蠟包埋的患者手術(shù)切除組織。RNF43的基因外顯子區(qū)段存在多個微衛(wèi)星位點(diǎn),根據(jù)RNF43突變與微衛(wèi)星不穩(wěn)定性的相關(guān)性推測,這些位點(diǎn)可能具有較高的突變率。因此我們先篩選出RNF43外顯子序列上存在的這些微衛(wèi)星位點(diǎn)并設(shè)計了針對性引物,在提取樣本基因組DNA后,用PCR方法對這些微衛(wèi)星區(qū)段進(jìn)行擴(kuò)增,并使用Sanger測序方法對這些位點(diǎn)的突變情況進(jìn)行了檢測。之后我們運(yùn)用SPSS軟件(version 20)分析了這些病例中RNF43突變與微衛(wèi)星不穩(wěn)定性狀態(tài)、KRAS、BRAF等基因的突變情況(由本實(shí)驗(yàn)室在之前基于焦磷酸測序技術(shù)和多重?zé)晒釶CR-毛細(xì)管電泳的臨床分子檢測方法獲得)、患者的臨床病理學(xué)參數(shù)(性別、年齡、腫瘤部位、浸潤深度、大體類型和組織學(xué)類型、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移、TNM分期等)、預(yù)后生存數(shù)據(jù)等信息的相關(guān)性。我們還對RNF43在腫瘤組織的表達(dá)做了免疫組化檢測,并分析了RNF43突變對其表達(dá)情況的影響。本次研究試圖闡明RNF43在結(jié)直腸癌人群中的突變情況,探討RNF43基因突變情況與上述各因素之間的聯(lián)系,分析這些改變情況與臨床參數(shù)的關(guān)聯(lián)及對預(yù)后的影響。本次研究共發(fā)現(xiàn)結(jié)直腸癌人群中存在p.Gly659fs、p.Arg117fs、c.350GA,c.816TC四種RNF43基因的突變,其總體突變頻率分別為9.2%、1.1%、54.5%、0.91%。p.Gly659fs在MSI-H狀態(tài)下的突變率為28.6%,在MSI-L/MSS狀態(tài)下的突變率為3.1%。p.Arg117fs在MSI-H狀態(tài)下的突變率為3.6%,未在MSI-L/MSS狀態(tài)下發(fā)現(xiàn)此種突變。c.350GA的突變率在不同微衛(wèi)星狀態(tài)下未發(fā)現(xiàn)差異。發(fā)現(xiàn)p.Gly659fs與腫瘤部位(位于結(jié)腸、位于右半大腸)相關(guān),與組織學(xué)類型(粘液腺癌)、組織學(xué)分化(低分化)相關(guān),攜帶此突變的患者較少發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移；c.350GA與組織學(xué)類型(腺癌)、組織學(xué)分化(高分化)相關(guān),這些相關(guān)性體現(xiàn)在此位點(diǎn)發(fā)生純合突變的情況下,而此位點(diǎn)發(fā)生雜合型突變時其各項臨床參數(shù)相比未突變組則均無差異。當(dāng)患者攜帶RNF43基因的p.Gly659fs突變時,再發(fā)生BRAF突變的患者五年生存率低于無BRAF突變者。暫未發(fā)現(xiàn)RNF43的突變與其在腫瘤組織的表達(dá)之間存在相關(guān)性。本次研究目前可以得出以下結(jié)論：1、RNF43在結(jié)直腸癌中突變率高。2、p.Gly659fs. p.Arg117fs兩種突變與微衛(wèi)星不穩(wěn)定存在相關(guān)性,其在MSI-H狀態(tài)下的突變率顯著高于在MSI-L/MSS狀態(tài)下的突變率。3、RNF43基因的p.Gly659fs突變是結(jié)直腸癌遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的保護(hù)因素。4、當(dāng)患者攜帶RNF43基因的p.Gly659fs突變時,這些患者的BRAF基因突變會導(dǎo)致其五年生存率降低。
【關(guān)鍵詞】：結(jié)直腸癌 RNF43 微衛(wèi)星不穩(wěn)定
【學(xué)位授予單位】：浙江大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R735.34
【目錄】：

• 致謝4-5
• 中文摘要5-8
• Abstract8-11
• 縮略語11-13
• 1 引言13-17
• 2 儀器設(shè)備17-18
• 2.1 儀器設(shè)備17-18
• 3 試劑與相關(guān)溶液的配制18-20
• 3.1 主要生物學(xué)與化學(xué)試劑18
• 3.2 相關(guān)溶液的配制18-20
• 4 RNF43基因突變的研究20-41
• 4.1 實(shí)驗(yàn)材料與方法20-28
• 4.2 結(jié)果分析28-41
• 5 討論41-44
• 6 結(jié)論44-45
• 參考文獻(xiàn)45-47
• 文獻(xiàn)綜述47-59
• 參考文獻(xiàn)56-59
• 作者簡歷及在讀期間所取得科研成果59

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本文編號：725824