目的:乳腺腺樣囊性癌(adenoid cystic carcinoma,ACC)是浸潤(rùn)性乳腺癌中一種罕見(jiàn)亞型,占所有乳腺腫瘤的0.1~1%。已有研究發(fā)現(xiàn)乳腺腺樣囊性癌組織形態(tài)學(xué)與涎腺原發(fā)腺樣囊性癌類似,分子生物學(xué)方面特征性融合基因MYB-NFIB在乳腺ACC能檢出,但乳腺腺樣囊性癌不易發(fā)生淋巴結(jié)和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移,單純手術(shù)切除不予任何治療,患者預(yù)后也良好。既往研究大多集中于特征性融合基因MYB-NFIB在常見(jiàn)的涎腺ACC中發(fā)生情況,而其在乳腺ACC中的研究多為個(gè)案或小樣本報(bào)道。本研究收集了20例乳腺腺樣囊性癌病例,對(duì)其組織病理學(xué)特點(diǎn)、MYB和CD117蛋白的表達(dá)及MYB-NFIB融合基因轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物檢出率進(jìn)行分析,旨在探討MYB、CD117蛋白及融合基因MYB-NFIB在乳腺腺樣囊性癌診斷中的應(yīng)用價(jià)值。方法:參照2012年WHO乳腺腫瘤分類和2014年Rosen乳腺病理學(xué)研究中ACC的診斷標(biāo)準(zhǔn)。篩查四川大學(xué)華西醫(yī)院病理科2007至2016年近10年間穿刺活檢或手術(shù)切除的乳腺腫瘤,經(jīng)兩位乳腺�？撇±磲t(yī)師共同閱片確定乳腺ACC病例并篩選每例病例中用于免疫組織化學(xué)染色和q RT-PCR檢測(cè)的組織蠟塊,獲得乳腺ACC研究病例20例。從病理科技術(shù)室提取本組病例的ER、PR、HER2染色切片。同時(shí)提取20例涎腺原發(fā)ACC病例作為陽(yáng)性對(duì)照組及唯一1例乳腺原發(fā)ACC冷凍保存的組織樣本作為q RT-PCR實(shí)驗(yàn)陽(yáng)性對(duì)照樣本。同時(shí)提取10例乳腺膠原小球病(collagenous spherulosis,CS)和10例乳腺腺肌上皮瘤(adenomyoepithelioma,AME)作為鑒別診斷樣本。1.免疫組織化學(xué)檢測(cè):對(duì)20例乳腺原發(fā)ACC及20例涎腺原發(fā)ACC及10例乳腺膠原小球病、10例乳腺腺肌上皮瘤石蠟組織樣本行MYB、CD117抗體的免疫組織化學(xué)檢測(cè)。2.總RNA提取:提取20例乳腺ACC及5例MYB高表達(dá)的涎腺ACC石蠟組織樣本中的總RNA,用Trizol法提取乳腺ACC冷凍組織樣本的總RNA。3.q RT-PCR檢測(cè):設(shè)計(jì)9對(duì)MYB-NFIB融合基因引物,包括MYB基因的9號(hào)、10號(hào)、12號(hào)及14號(hào)外顯子和NFIB基因的8a號(hào)、8c號(hào)和9號(hào)外顯子,獲得各組織樣本的q RT-PCR產(chǎn)物。4.MYB-NFIB融合基因產(chǎn)物行核酸電泳:將每個(gè)樣本行9對(duì)MYB-NFIB融合基因的q RT-PCR產(chǎn)物進(jìn)行電泳實(shí)驗(yàn)。5.MYB-NFIB融合基因轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物行測(cè)序分析:由擎科公司代做檢測(cè)。結(jié)果:1.臨床資料:20例乳腺腺樣囊性癌患者均為女性,年齡33~73歲(平均年齡51.5歲)。左乳發(fā)病14例(70%),右乳發(fā)病6例(30%)。其中9例患者行乳腺癌改良根治術(shù)(包括腋窩淋巴結(jié)清掃),1/9例患者出現(xiàn)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移,8例患者行單純?nèi)橄倌[塊切除術(shù),3例患者行粗針穿刺活檢確診后未進(jìn)一步治療。2.組織病理特點(diǎn):20例乳腺ACC中有6例腫瘤組織內(nèi)未見(jiàn)實(shí)體型結(jié)構(gòu)評(píng)為Ⅰ級(jí),8例腫瘤組織實(shí)體型結(jié)構(gòu)30%評(píng)為Ⅱ級(jí),6例腫瘤組織實(shí)體型結(jié)構(gòu)30%評(píng)為Ⅲ級(jí)(其中3例為具有基底樣特征的實(shí)體型腺樣囊性癌)。對(duì)照20例涎腺ACC腫瘤中,Ⅰ級(jí)涎腺ACC7例,Ⅱ級(jí)涎腺ACC8例,Ⅲ級(jí)涎腺ACC5例。冷凍的1例乳腺ACC病例為Ⅲ級(jí)ACC。3.免疫組織化學(xué)檢測(cè)結(jié)果:20例乳腺原發(fā)ACC免疫組織化學(xué)染色結(jié)果如下:(1)MYB陽(yáng)性表達(dá)于細(xì)胞核,乳腺ACC中腫瘤性腺上皮、肌上皮均可表達(dá)MYB,其中16例(16/20,80%)表達(dá)MYB,4例不表達(dá)MYB的ACC中有1例(1/6,16.7%)為Ⅰ級(jí)乳腺ACC,有2例(2/8,25%)為Ⅱ級(jí)ACC,有1例(1/6,16.7%)為Ⅲ級(jí)ACC。(2)CD117陽(yáng)性表達(dá)于細(xì)胞膜和(或)細(xì)胞質(zhì),20例(20/20)乳腺ACC全部表達(dá),其中有6例(6/20,30%)乳腺腺樣囊性癌CD117染色不均勻呈散在灶性分布,灶性區(qū)域腫瘤腺上皮弱表達(dá)。20例中有2例病例腫瘤細(xì)胞CD117陽(yáng)性率90%,其中1例恰好是MYB不表達(dá)的Ⅰ級(jí)乳腺ACC,1例是表達(dá)MYB的Ⅲ級(jí)ACC。(3)復(fù)習(xí)本組ACC病理科已做的ER、PR及HER2免疫組化結(jié)果如下:有2例ER灶性陽(yáng)性,有3例PR灶性陽(yáng)性,有2例HER2(1+),有1例HER2(2+)。(4)20例對(duì)照組涎腺原發(fā)ACC中,13例(13/20,65%)表達(dá)MYB。7例MYB陰性病例中有3例(3/7,42.9%)Ⅰ級(jí)涎腺ACC,有2例(2/8,25%)Ⅱ級(jí)涎腺ACC及2例(2/5,40%)Ⅲ級(jí)涎腺ACC。20例涎腺ACC病例CD117(20/20,100%)全部表達(dá),其中只有2例(2/20例,10%)CD117染色不均勻呈散在灶性分布,染色強(qiáng)度為中等或偏弱。(5)10例乳腺膠原小球病病例中3例表達(dá)MYB(3/10,30%),但都是1+,2+及2+以上為0例(0/10,0%),有1例表達(dá)CD117(1/10,10%)。10例乳腺腺肌上皮瘤病例中5例表達(dá)MYB(5/10,50%),其中1+為3例,2+為2例,2+及2+以上病例表達(dá)MYB(2/10,20%)。4例表達(dá)CD117(4/10,40%)。4.MYB-NFIB融合基因q RT-PCR產(chǎn)物結(jié)果:20例乳腺ACC中有1例因總RNA濃度過(guò)低未進(jìn)行q RT-PCR實(shí)驗(yàn),剩下的19例乳腺ACC石蠟組織樣本中有6例(6/19,31.6%)檢出MYB-NFIB融合基因。冷凍乳腺ACC 9種MYB-NFIB融合基因檢測(cè)出3種融合基因,但該病例石蠟組織樣本未檢測(cè)到任何一種MYB-NFIB融合基因。MYB-NFIB融合基因轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物陽(yáng)性的6例病例其MYB及CD117蛋白全為陽(yáng)性,但CD117陽(yáng)性率90%的兩例病例均未檢測(cè)到MYB-NFIB融合轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物。5例對(duì)照涎腺ACC中有2例檢出MYB-NFIB融合基因。5.MYB-NFIB融合基因測(cè)序分析結(jié)果:4例MYB高表達(dá)的涎腺ACC中有兩例(3號(hào)、6號(hào))及20例乳腺ACC中有5例(5號(hào)、10號(hào)、15號(hào)、22號(hào)、26號(hào))1334F-1197R測(cè)序比對(duì)結(jié)果提示該7例病例檢出的融合基因結(jié)果可靠。測(cè)序比對(duì)結(jié)果還顯示4例乳腺ACC(1號(hào)、10號(hào)、13號(hào)、15號(hào))檢出1925F-1197R融合基因。另有1例涎腺ACC3號(hào)樣本檢出1432F-1197R融合基因。19例石蠟乳腺ACC中6例檢出融合基因,檢出率31.6%(6/19)。結(jié)論:1.CD117表達(dá)是乳腺腺樣囊性癌的一個(gè)免疫表型,雖不特異但有利于輔助ACC的病理診斷。2.融合基因MYB-NFIB及高表達(dá)MYB蛋白在乳腺腺樣囊性癌中具有高度特異性,其檢測(cè)有助于乳腺腺樣囊性癌與乳腺膠原小球病、腺肌上皮瘤的鑒別診斷。3.石蠟組織樣本RNA容易降解,ACC腫瘤中冷凍組織樣本可能更適合做融合基因MYB-NFIB檢測(cè)。4.基因測(cè)序進(jìn)一步驗(yàn)證融合基因MYB-NFIB電泳結(jié)果的可靠性。



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