目的:乳腺腺樣囊性癌(adenoid cystic carcinoma,ACC)是浸潤性乳腺癌中一種罕見亞型,占所有乳腺腫瘤的0.1~1%。已有研究發(fā)現(xiàn)乳腺腺樣囊性癌組織形態(tài)學與涎腺原發(fā)腺樣囊性癌類似,分子生物學方面特征性融合基因MYB-NFIB在乳腺ACC能檢出,但乳腺腺樣囊性癌不易發(fā)生淋巴結和遠處轉(zhuǎn)移,單純手術切除不予任何治療,患者預后也良好。既往研究大多集中于特征性融合基因MYB-NFIB在常見的涎腺ACC中發(fā)生情況,而其在乳腺ACC中的研究多為個案或小樣本報道。本研究收集了20例乳腺腺樣囊性癌病例,對其組織病理學特點、MYB和CD117蛋白的表達及MYB-NFIB融合基因轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物檢出率進行分析,旨在探討MYB、CD117蛋白及融合基因MYB-NFIB在乳腺腺樣囊性癌診斷中的應用價值。方法:參照2012年WHO乳腺腫瘤分類和2014年Rosen乳腺病理學研究中ACC的診斷標準。篩查四川大學華西醫(yī)院病理科2007至2016年近10年間穿刺活檢或手術切除的乳腺腫瘤,經(jīng)兩位乳腺�？撇±磲t(yī)師共同閱片確定乳腺ACC病例并篩選每例病例中用于免疫組織化學染色和q RT-PCR檢測的組織蠟塊,獲得乳腺ACC研究病例20例。從病理科技術室提取本組病例的ER、PR、HER2染色切片。同時提取20例涎腺原發(fā)ACC病例作為陽性對照組及唯一1例乳腺原發(fā)ACC冷凍保存的組織樣本作為q RT-PCR實驗陽性對照樣本。同時提取10例乳腺膠原小球病(collagenous spherulosis,CS)和10例乳腺腺肌上皮瘤(adenomyoepithelioma,AME)作為鑒別診斷樣本。1.免疫組織化學檢測:對20例乳腺原發(fā)ACC及20例涎腺原發(fā)ACC及10例乳腺膠原小球病、10例乳腺腺肌上皮瘤石蠟組織樣本行MYB、CD117抗體的免疫組織化學檢測。2.總RNA提取:提取20例乳腺ACC及5例MYB高表達的涎腺ACC石蠟組織樣本中的總RNA,用Trizol法提取乳腺ACC冷凍組織樣本的總RNA。3.q RT-PCR檢測:設計9對MYB-NFIB融合基因引物,包括MYB基因的9號、10號、12號及14號外顯子和NFIB基因的8a號、8c號和9號外顯子,獲得各組織樣本的q RT-PCR產(chǎn)物。4.MYB-NFIB融合基因產(chǎn)物行核酸電泳:將每個樣本行9對MYB-NFIB融合基因的q RT-PCR產(chǎn)物進行電泳實驗。5.MYB-NFIB融合基因轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物行測序分析:由擎科公司代做檢測。結果:1.臨床資料:20例乳腺腺樣囊性癌患者均為女性,年齡33~73歲(平均年齡51.5歲)。左乳發(fā)病14例(70%),右乳發(fā)病6例(30%)。其中9例患者行乳腺癌改良根治術(包括腋窩淋巴結清掃),1/9例患者出現(xiàn)淋巴結轉(zhuǎn)移,8例患者行單純?nèi)橄倌[塊切除術,3例患者行粗針穿刺活檢確診后未進一步治療。2.組織病理特點:20例乳腺ACC中有6例腫瘤組織內(nèi)未見實體型結構評為Ⅰ級,8例腫瘤組織實體型結構30%評為Ⅱ級,6例腫瘤組織實體型結構30%評為Ⅲ級(其中3例為具有基底樣特征的實體型腺樣囊性癌)。對照20例涎腺ACC腫瘤中,Ⅰ級涎腺ACC7例,Ⅱ級涎腺ACC8例,Ⅲ級涎腺ACC5例。冷凍的1例乳腺ACC病例為Ⅲ級ACC。3.免疫組織化學檢測結果:20例乳腺原發(fā)ACC免疫組織化學染色結果如下:(1)MYB陽性表達于細胞核,乳腺ACC中腫瘤性腺上皮、肌上皮均可表達MYB,其中16例(16/20,80%)表達MYB,4例不表達MYB的ACC中有1例(1/6,16.7%)為Ⅰ級乳腺ACC,有2例(2/8,25%)為Ⅱ級ACC,有1例(1/6,16.7%)為Ⅲ級ACC。(2)CD117陽性表達于細胞膜和(或)細胞質(zhì),20例(20/20)乳腺ACC全部表達,其中有6例(6/20,30%)乳腺腺樣囊性癌CD117染色不均勻呈散在灶性分布,灶性區(qū)域腫瘤腺上皮弱表達。20例中有2例病例腫瘤細胞CD117陽性率90%,其中1例恰好是MYB不表達的Ⅰ級乳腺ACC,1例是表達MYB的Ⅲ級ACC。(3)復習本組ACC病理科已做的ER、PR及HER2免疫組化結果如下:有2例ER灶性陽性,有3例PR灶性陽性,有2例HER2(1+),有1例HER2(2+)。(4)20例對照組涎腺原發(fā)ACC中,13例(13/20,65%)表達MYB。7例MYB陰性病例中有3例(3/7,42.9%)Ⅰ級涎腺ACC,有2例(2/8,25%)Ⅱ級涎腺ACC及2例(2/5,40%)Ⅲ級涎腺ACC。20例涎腺ACC病例CD117(20/20,100%)全部表達,其中只有2例(2/20例,10%)CD117染色不均勻呈散在灶性分布,染色強度為中等或偏弱。(5)10例乳腺膠原小球病病例中3例表達MYB(3/10,30%),但都是1+,2+及2+以上為0例(0/10,0%),有1例表達CD117(1/10,10%)。10例乳腺腺肌上皮瘤病例中5例表達MYB(5/10,50%),其中1+為3例,2+為2例,2+及2+以上病例表達MYB(2/10,20%)。4例表達CD117(4/10,40%)。4.MYB-NFIB融合基因q RT-PCR產(chǎn)物結果:20例乳腺ACC中有1例因總RNA濃度過低未進行q RT-PCR實驗,剩下的19例乳腺ACC石蠟組織樣本中有6例(6/19,31.6%)檢出MYB-NFIB融合基因。冷凍乳腺ACC 9種MYB-NFIB融合基因檢測出3種融合基因,但該病例石蠟組織樣本未檢測到任何一種MYB-NFIB融合基因。MYB-NFIB融合基因轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物陽性的6例病例其MYB及CD117蛋白全為陽性,但CD117陽性率90%的兩例病例均未檢測到MYB-NFIB融合轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物。5例對照涎腺ACC中有2例檢出MYB-NFIB融合基因。5.MYB-NFIB融合基因測序分析結果:4例MYB高表達的涎腺ACC中有兩例(3號、6號)及20例乳腺ACC中有5例(5號、10號、15號、22號、26號)1334F-1197R測序比對結果提示該7例病例檢出的融合基因結果可靠。測序比對結果還顯示4例乳腺ACC(1號、10號、13號、15號)檢出1925F-1197R融合基因。另有1例涎腺ACC3號樣本檢出1432F-1197R融合基因。19例石蠟乳腺ACC中6例檢出融合基因,檢出率31.6%(6/19)。結論:1.CD117表達是乳腺腺樣囊性癌的一個免疫表型,雖不特異但有利于輔助ACC的病理診斷。2.融合基因MYB-NFIB及高表達MYB蛋白在乳腺腺樣囊性癌中具有高度特異性,其檢測有助于乳腺腺樣囊性癌與乳腺膠原小球病、腺肌上皮瘤的鑒別診斷。3.石蠟組織樣本RNA容易降解,ACC腫瘤中冷凍組織樣本可能更適合做融合基因MYB-NFIB檢測。4.基因測序進一步驗證融合基因MYB-NFIB電泳結果的可靠性。



本文編號：1481529