Ikaros作為一種重要的轉錄因子,在正常造血系統(tǒng)中發(fā)揮著非常重要的作用。在腫瘤細胞中Ikaros能發(fā)揮腫瘤抑制或腫瘤促進作用,但是它在急性髓系白血病(AML)中的作用尚不明確。我們的研究顯示:用RNA干擾技術在細胞內(nèi)沉默熱休克蛋白90(Hsp90)或在AML細胞內(nèi)使用Hsp90抑制劑STA-9090后,細胞內(nèi)Ikaros的蛋白表達均發(fā)生下調(diào);同時我們發(fā)現(xiàn)STA-9090引起的細胞內(nèi)Ikaros的下調(diào)是由熱休克同源蛋白70碳末端結合蛋白(CHIP)這個E3泛素連接酶所介導的。進一步的研究顯示細胞內(nèi)Ikaros基因的沉默能夠顯著抑制體內(nèi)外AML細胞的增殖。綜合以上研究,我們發(fā)現(xiàn)了細胞內(nèi)Hsp90與Ikaros的相互作用關系,并且深入探討了Hsp90抑制劑引起細胞內(nèi)Ikaros降解的具體機制。該研究有望為今后Hsp90抑制劑應用于AML的臨床試驗提供一定的線索和理論基礎。急性淋巴細胞白血病(ALL)是好發(fā)于兒童和青少年的惡性血液系統(tǒng)疾病,盡管目前急性淋巴細胞白血病在兒童中治愈率可高達90%,但是該病在成人中的治愈率低,且預后差,因此,人們迫切地需要尋找新的治療方案。本論文研究顯示組蛋白去乙...

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【學位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
全文主要縮略語中英文對照表
第一部分 :CHIP介導急性髓系白血病細胞內(nèi)IKAROS的降解和相關機制研究
    第一章 :緒論
        1.1 研究背景
        1.2 本研究的主要內(nèi)容
    第二章 :HSP90抑制劑引起急性髓系白血病細胞內(nèi)IKAROS的降解
        2.1 材料與方法
            2.1.1 試劑和抗體
            2.1.2 主要儀器
            2.1.3 主要溶液配制
            2.1.4 主要實驗器具的處理
            2.1.5 細胞培養(yǎng)
            2.1.6 單個核細胞分選
            2.1.7 臺盼藍拒染法檢測細胞活率
            2.1.8 基因敲除質(zhì)粒的構建和篩選
            2.1.9 病毒的包裝和感染
            2.1.10 細胞總蛋白的提取
            2.1.11 免疫印跡(western blot)
            2.1.12 實時熒光定量PCR(Q-PCR)
            2.1.13 統(tǒng)計學分析
        2.2 結果
            2.2.1 Hsp90抑制劑引起急性髓系白血病細胞內(nèi)Ikaros的減少
            2.2.2 Hsp90抑制劑對細胞內(nèi)Ikaros mRNA的影響
            2.2.3 Hsp90抑制劑對急性髓系白血病細胞增殖和活率的影響
            2.2.4 Hsp90抑制劑不改變其他類型血液腫瘤細胞內(nèi)Ikaros蛋白的表達水平
        2.3 小結與討論
    第三章 :CHIP介導的急性髓系白血病細胞內(nèi)IKAROS降解的相關機制研究
        3.1 材料與方法
            3.1.1 試劑和抗體
            3.1.2 主要儀器
            3.1.3 質(zhì)粒共轉染
            3.1.4 免疫熒光
            3.1.5 免疫共沉淀(co-IP)
            3.1.6 Western blot檢測蛋白表達
            3.1.7 真核表達質(zhì)粒的構建
            3.1.8 蛋白質(zhì)截短體的構建
            3.1.9 質(zhì)粒突變
            3.1.10 統(tǒng)計學方法
        3.2 結果
            3.2.1 細胞內(nèi)Hsp90與Ikaros的共定位
            3.2.2 細胞內(nèi)Hsp90與Ikaros的相互作用
            3.2.3 Hsp90抑制劑引起Ikaros的降解是通過泛素蛋白酶體途徑所介導
            3.2.4 Hsp90抑制劑并不是通過E3泛素連接酶CRBN引起AML細胞內(nèi)Ikaros的降解
            3.2.5 Hsp90抑制劑引起的Ikaros降解是通過E3泛素連接酶CHIP介導
            3.2.6 細胞內(nèi)CHIP和Ikaros的共定位
            3.2.7 CHIP通過TPR結構域與Ikaros發(fā)生相互作用
            3.2.8 Hsp90抑制劑通過作用于Ikaros的N端促進Ikaros的降解
        3.3 小結與討論
    第四章 :急性髓系白血病細胞內(nèi)IKAROS降解引起的生物學效應
        4.1 材料與方法
            4.1.1 試劑與耗材
            4.1.2 主要儀器
            4.1.3 主要溶液配方
            4.1.4 Ikaros基因敲除質(zhì)粒的構建和篩選
            4.1.5 細胞增殖的測定
            4.1.6 細胞周期分析
            4.1.7 動物實驗
            4.1.8 免疫組化實驗
            4.1.9 統(tǒng)計學方法
        4.2 結果
            4.2.1 AML細胞內(nèi)Ikaros敲除后對細胞增殖和細胞周期的影響
            4.2.2 AML細胞內(nèi)Ikaros敲除后在體內(nèi)對腫瘤的抑制作用
        4.3 小結與討論
    第五章 :討論
    參考文獻
第二部分 :SAHA聯(lián)合QC對急性淋巴細胞白血病效應及機制研究
    第一章 :緒論
        1.1 研究背景
        1.2 本研究的主要內(nèi)容
    第二章 :SAHA聯(lián)合QC對急性淋巴細胞白血病效應及機制研究
        2.1 材料與方法
            2.1.1 試劑和抗體
            2.1.2 主要儀器
            2.1.3 細胞培養(yǎng)
            2.1.4 臺盼藍拒染法檢測細胞活率
            2.1.5 單個核細胞的分選
            2.1.6 AnnexinV-APC/PI雙染法檢測細胞凋亡
            2.1.7 Western blot(蛋白免疫印跡)
            2.1.8 細胞內(nèi)活性氧(ROS)的檢測
            2.1.9 動物體內(nèi)實驗
            2.1.10 統(tǒng)計學方法
        2.2 結果
            2.2.1 SAHA聯(lián)合QC在急性淋巴細胞白血病病人細胞上的效應
            2.2.2 SAHA聯(lián)合QC引起急性B淋巴細胞白血病細胞發(fā)生凋亡
            2.2.3 SAHA聯(lián)合QC誘導的B-ALL細胞凋亡與線粒體功能紊亂密切相關
            2.2.4 SAHA聯(lián)合QC具有體內(nèi)抑制急性淋巴細胞白血病細胞皮下移植瘤增殖的效應
        2.3 小結與討論
    參考文獻
致謝
附錄一:學術論文和科研成果目錄



本文編號：3999112