Ikaros作為一種重要的轉(zhuǎn)錄因子,在正常造血系統(tǒng)中發(fā)揮著非常重要的作用。在腫瘤細(xì)胞中Ikaros能發(fā)揮腫瘤抑制或腫瘤促進(jìn)作用,但是它在急性髓系白血病(AML)中的作用尚不明確。我們的研究顯示:用RNA干擾技術(shù)在細(xì)胞內(nèi)沉默熱休克蛋白90(Hsp90)或在AML細(xì)胞內(nèi)使用Hsp90抑制劑STA-9090后,細(xì)胞內(nèi)Ikaros的蛋白表達(dá)均發(fā)生下調(diào);同時(shí)我們發(fā)現(xiàn)STA-9090引起的細(xì)胞內(nèi)Ikaros的下調(diào)是由熱休克同源蛋白70碳末端結(jié)合蛋白(CHIP)這個(gè)E3泛素連接酶所介導(dǎo)的。進(jìn)一步的研究顯示細(xì)胞內(nèi)Ikaros基因的沉默能夠顯著抑制體內(nèi)外AML細(xì)胞的增殖。綜合以上研究,我們發(fā)現(xiàn)了細(xì)胞內(nèi)Hsp90與Ikaros的相互作用關(guān)系,并且深入探討了Hsp90抑制劑引起細(xì)胞內(nèi)Ikaros降解的具體機(jī)制。該研究有望為今后Hsp90抑制劑應(yīng)用于AML的臨床試驗(yàn)提供一定的線索和理論基礎(chǔ)。急性淋巴細(xì)胞白血病(ALL)是好發(fā)于兒童和青少年的惡性血液系統(tǒng)疾病,盡管目前急性淋巴細(xì)胞白血病在兒童中治愈率可高達(dá)90%,但是該病在成人中的治愈率低,且預(yù)后差,因此,人們迫切地需要尋找新的治療方案。本論文研究顯示組蛋白去乙...

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【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
全文主要縮略語(yǔ)中英文對(duì)照表
第一部分 :CHIP介導(dǎo)急性髓系白血病細(xì)胞內(nèi)IKAROS的降解和相關(guān)機(jī)制研究
    第一章 :緒論
        1.1 研究背景
        1.2 本研究的主要內(nèi)容
    第二章 :HSP90抑制劑引起急性髓系白血病細(xì)胞內(nèi)IKAROS的降解
        2.1 材料與方法
            2.1.1 試劑和抗體
            2.1.2 主要儀器
            2.1.3 主要溶液配制
            2.1.4 主要實(shí)驗(yàn)器具的處理
            2.1.5 細(xì)胞培養(yǎng)
            2.1.6 單個(gè)核細(xì)胞分選
            2.1.7 臺(tái)盼藍(lán)拒染法檢測(cè)細(xì)胞活率
            2.1.8 基因敲除質(zhì)粒的構(gòu)建和篩選
            2.1.9 病毒的包裝和感染
            2.1.10 細(xì)胞總蛋白的提取
            2.1.11 免疫印跡(western blot)
            2.1.12 實(shí)時(shí)熒光定量PCR(Q-PCR)
            2.1.13 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
        2.2 結(jié)果
            2.2.1 Hsp90抑制劑引起急性髓系白血病細(xì)胞內(nèi)Ikaros的減少
            2.2.2 Hsp90抑制劑對(duì)細(xì)胞內(nèi)Ikaros mRNA的影響
            2.2.3 Hsp90抑制劑對(duì)急性髓系白血病細(xì)胞增殖和活率的影響
            2.2.4 Hsp90抑制劑不改變其他類(lèi)型血液腫瘤細(xì)胞內(nèi)Ikaros蛋白的表達(dá)水平
        2.3 小結(jié)與討論
    第三章 :CHIP介導(dǎo)的急性髓系白血病細(xì)胞內(nèi)IKAROS降解的相關(guān)機(jī)制研究
        3.1 材料與方法
            3.1.1 試劑和抗體
            3.1.2 主要儀器
            3.1.3 質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染
            3.1.4 免疫熒光
            3.1.5 免疫共沉淀(co-IP)
            3.1.6 Western blot檢測(cè)蛋白表達(dá)
            3.1.7 真核表達(dá)質(zhì)粒的構(gòu)建
            3.1.8 蛋白質(zhì)截短體的構(gòu)建
            3.1.9 質(zhì)粒突變
            3.1.10 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法
        3.2 結(jié)果
            3.2.1 細(xì)胞內(nèi)Hsp90與Ikaros的共定位
            3.2.2 細(xì)胞內(nèi)Hsp90與Ikaros的相互作用
            3.2.3 Hsp90抑制劑引起Ikaros的降解是通過(guò)泛素蛋白酶體途徑所介導(dǎo)
            3.2.4 Hsp90抑制劑并不是通過(guò)E3泛素連接酶CRBN引起AML細(xì)胞內(nèi)Ikaros的降解
            3.2.5 Hsp90抑制劑引起的Ikaros降解是通過(guò)E3泛素連接酶CHIP介導(dǎo)
            3.2.6 細(xì)胞內(nèi)CHIP和Ikaros的共定位
            3.2.7 CHIP通過(guò)TPR結(jié)構(gòu)域與Ikaros發(fā)生相互作用
            3.2.8 Hsp90抑制劑通過(guò)作用于Ikaros的N端促進(jìn)Ikaros的降解
        3.3 小結(jié)與討論
    第四章 :急性髓系白血病細(xì)胞內(nèi)IKAROS降解引起的生物學(xué)效應(yīng)
        4.1 材料與方法
            4.1.1 試劑與耗材
            4.1.2 主要儀器
            4.1.3 主要溶液配方
            4.1.4 Ikaros基因敲除質(zhì)粒的構(gòu)建和篩選
            4.1.5 細(xì)胞增殖的測(cè)定
            4.1.6 細(xì)胞周期分析
            4.1.7 動(dòng)物實(shí)驗(yàn)
            4.1.8 免疫組化實(shí)驗(yàn)
            4.1.9 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法
        4.2 結(jié)果
            4.2.1 AML細(xì)胞內(nèi)Ikaros敲除后對(duì)細(xì)胞增殖和細(xì)胞周期的影響
            4.2.2 AML細(xì)胞內(nèi)Ikaros敲除后在體內(nèi)對(duì)腫瘤的抑制作用
        4.3 小結(jié)與討論
    第五章 :討論
    參考文獻(xiàn)
第二部分 :SAHA聯(lián)合QC對(duì)急性淋巴細(xì)胞白血病效應(yīng)及機(jī)制研究
    第一章 :緒論
        1.1 研究背景
        1.2 本研究的主要內(nèi)容
    第二章 :SAHA聯(lián)合QC對(duì)急性淋巴細(xì)胞白血病效應(yīng)及機(jī)制研究
        2.1 材料與方法
            2.1.1 試劑和抗體
            2.1.2 主要儀器
            2.1.3 細(xì)胞培養(yǎng)
            2.1.4 臺(tái)盼藍(lán)拒染法檢測(cè)細(xì)胞活率
            2.1.5 單個(gè)核細(xì)胞的分選
            2.1.6 AnnexinV-APC/PI雙染法檢測(cè)細(xì)胞凋亡
            2.1.7 Western blot(蛋白免疫印跡)
            2.1.8 細(xì)胞內(nèi)活性氧(ROS)的檢測(cè)
            2.1.9 動(dòng)物體內(nèi)實(shí)驗(yàn)
            2.1.10 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法
        2.2 結(jié)果
            2.2.1 SAHA聯(lián)合QC在急性淋巴細(xì)胞白血病病人細(xì)胞上的效應(yīng)
            2.2.2 SAHA聯(lián)合QC引起急性B淋巴細(xì)胞白血病細(xì)胞發(fā)生凋亡
            2.2.3 SAHA聯(lián)合QC誘導(dǎo)的B-ALL細(xì)胞凋亡與線粒體功能紊亂密切相關(guān)
            2.2.4 SAHA聯(lián)合QC具有體內(nèi)抑制急性淋巴細(xì)胞白血病細(xì)胞皮下移植瘤增殖的效應(yīng)
        2.3 小結(jié)與討論
    參考文獻(xiàn)
致謝
附錄一:學(xué)術(shù)論文和科研成果目錄



本文編號(hào)：3999112