本文關(guān)鍵詞：胃癌中miR-106b-25的表達及生物學行為特征的研究

  更多相關(guān)文章： 胃癌 miR-106b-25臨床病理因素 MGC-803胃癌細胞 生物學特征

【摘要】：目的:研究miRNA-106b-25基因簇在胃癌組織中表達及其與胃癌患者臨床病理特征的關(guān)系。同時,在胃癌細胞系中檢測miRNA-106b-25的表達水平,利用瞬時轉(zhuǎn)染技術(shù)在體外實驗中抑制miRNA-106b-25的表達,并探究低miRNA-106b-25表達水平對胃癌細胞系生物學行為特征的影響。方法:1、采用qRT-PCR方法檢測90例胃癌患者癌組織以及癌旁正常胃粘膜組織中miRNA-106b-25的相對表達量。收集天津醫(yī)科大學腫瘤醫(yī)院2013年3月至2013年9月收治的90例胃癌患者的臨床病理資料,分析miRNA-106b-25在胃癌患者的原癌組織及其癌旁正常胃粘膜組織中的表達差異。同時查閱所有入組患者的臨床病理特征,進一步分析mi RNA-106b-25與臨床病理特征的相關(guān)性。2、采用qRT-PCR方法檢測胃癌細胞系SGC-7901、MGC-803、BGC-823以及胃粘膜正常細胞系GES-1中miRNA-106b-25的表達水平。同時,以lipo2000作為轉(zhuǎn)染媒介,向胃癌細胞系中瞬時轉(zhuǎn)染人工合成miRNA-106b-25抑制劑(miRNA inhibitor),分別通過熒光顯微鏡下觀察和qRT-PCR方法檢測轉(zhuǎn)染效率,選擇抑制效果最好的胃癌細胞系作為進一步細胞功能研究的實驗對象。3、采用劃痕實驗觀察胃癌細胞遷移能力,生長曲線和MTT法觀察胃癌細胞增殖的變化以及miRNA inhibitor對細胞生長的抑制情況,PI單染法及Annexin V/PI雙染法檢測細胞周期及凋亡的變化,Transwell細胞遷徙實驗檢測細胞侵襲能力的改變。結(jié)果:1、胃癌患者miRNA-106b-25在癌組織中的表達水平顯著高于癌旁正常胃粘膜組織,差異有統(tǒng)計學意義。miRNA-106b和miRNA-93相對表達倍數(shù)與腫瘤大小、漿膜累犯、脈管癌栓、浸潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、遠處轉(zhuǎn)移和TNM分期顯著相關(guān),差異具有統(tǒng)計學意義;miRNA-25相對表達倍數(shù)則僅與漿膜累犯、脈管癌栓、浸潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移顯著相關(guān)。2、MiRNA-106b、miRNA-93、miRNA-25在胃癌細胞系SGC-7901、MGC-803、BGC-823表達量均高于胃粘膜正常細胞系GES-1。MGC-803相較于另外兩種胃癌細胞系(SGC-7901、BGC-823),外源性mi RNA inhibitor對mi RNA-106b-25的抑制靶向性較高,即選擇MGC-803作為細胞功能研究的實驗對象。3、在胃癌細胞系MGC-803中瞬時轉(zhuǎn)染人工合成的miRNA inhibitor后,通過劃痕實驗、Transwell實驗表明轉(zhuǎn)染后MGC-803細胞遷移、侵襲能力顯著下降;MTT實驗、細胞生長計數(shù)表明轉(zhuǎn)染后MGC-803細胞的生長受到顯著抑制;Annexin V/PI法表明轉(zhuǎn)染后MGC-803細胞凋亡增加。結(jié)論:1、胃癌組織中miRNA-106b-25基因簇過表達,并且該簇miRNA的表達與胃癌中與預后密切相關(guān)的臨床病理特征有關(guān),提示其表達量可作為反映胃癌的進展程度重要臨床指標。2、相對于正常胃粘膜細胞,miRNA-106b-25基因簇在胃癌細胞系中均過表達;并通過外源性抑制其表達后,胃癌細胞的多項生物學行為均受到顯著抑制,提示其可能作用于胃癌發(fā)生發(fā)展過程中的關(guān)鍵部位,為進一步探究并尋找其在胃癌治療中關(guān)鍵分子靶點奠定堅實基礎(chǔ)。
【關(guān)鍵詞】：胃癌 miR-106b-25臨床病理因素 MGC-803胃癌細胞 生物學特征
【學位授予單位】：天津醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R735.2
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-10
• 縮略語/符號說明10-12
• 前言12-15
• 研究現(xiàn)狀、成果12-13
• 研究目的、方法13-15
• 一、胃癌組織中miRNA-106b-25的表達15-32
• 1.1 對象和方法15-19
• 1.1.1 對象15
• 1.1.2 材料與試劑15-16
• 1.1.3 溶液配制16
• 1.1.4 主要儀器16
• 1.1.5 實驗方法16-19
• 1.1.6 統(tǒng)計學處理19
• 1.2 結(jié)果19-30
• 1.2.1 胃癌組織與其癌旁正常胃粘膜組織中miRNA-106b-25的表達差異19-20
• 1.2.2 胃癌組織miRNA-106b-25的表達與臨床病理特征的關(guān)系20-30
• 1.3 討論30-31
• 1.4 小結(jié)31-32
• 二、miR-106b-25在胃癌細胞系中表達的研究32-39
• 2.1 對象和方法32-34
• 2.1.1 細胞系32
• 2.1.2 相關(guān)試劑與材料32
• 2.1.3 主要儀器32
• 2.1.4 實驗方法32-34
• 2.1.5 統(tǒng)計學處理34
• 2.2 結(jié)果34-36
• 2.2.1 胃癌細胞系中miRNA-106b-25的表達34
• 2.2.2 瞬時轉(zhuǎn)染反義抑制劑篩選降表達效果最佳的胃癌細胞系34-36
• 2.3 討論36-38
• 2.4 小結(jié)38-39
• 三、反義抑制miR-106b-25對胃癌細胞生物學行為的影響39-51
• 3.1 對象和方法39-43
• 3.1.1 對象39
• 3.1.2 方法39-43
• 3.1.3 統(tǒng)計學處理43
• 3.2 結(jié)果43-49
• 3.2.1 劃痕實驗觀察轉(zhuǎn)染后細胞遷移能力的變化43-44
• 3.2.2 MTT（噻唑蘭比色分析）檢測轉(zhuǎn)染抑制效果44-45
• 3.2.3 細胞生長計數(shù)45-46
• 3.2.4 Transwell實驗檢測細胞侵襲能力46-47
• 3.2.5 流式細胞術(shù)檢測細胞周期47-48
• 3.2.6 流式細胞術(shù)檢測細胞凋亡48-49
• 3.3 討論49-50
• 3.4 小結(jié)50-51
• 結(jié)論51-52
• 參考文獻52-56
• 發(fā)表論文和參加科研情況說明56-57
• 附錄57-59
• 綜述 microRNA-106b-25在胃癌中的研究進展59-71
• 綜述參考文獻66-71
• 致謝71

【共引文獻】

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本文編號：648788