本文關(guān)鍵詞：胃癌中miR-106b-25的表達(dá)及生物學(xué)行為特征的研究

  更多相關(guān)文章： 胃癌 miR-106b-25臨床病理因素 MGC-803胃癌細(xì)胞 生物學(xué)特征

【摘要】：目的:研究miRNA-106b-25基因簇在胃癌組織中表達(dá)及其與胃癌患者臨床病理特征的關(guān)系。同時(shí),在胃癌細(xì)胞系中檢測(cè)miRNA-106b-25的表達(dá)水平,利用瞬時(shí)轉(zhuǎn)染技術(shù)在體外實(shí)驗(yàn)中抑制miRNA-106b-25的表達(dá),并探究低miRNA-106b-25表達(dá)水平對(duì)胃癌細(xì)胞系生物學(xué)行為特征的影響。方法:1、采用qRT-PCR方法檢測(cè)90例胃癌患者癌組織以及癌旁正常胃粘膜組織中miRNA-106b-25的相對(duì)表達(dá)量。收集天津醫(yī)科大學(xué)腫瘤醫(yī)院2013年3月至2013年9月收治的90例胃癌患者的臨床病理資料,分析miRNA-106b-25在胃癌患者的原癌組織及其癌旁正常胃粘膜組織中的表達(dá)差異。同時(shí)查閱所有入組患者的臨床病理特征,進(jìn)一步分析mi RNA-106b-25與臨床病理特征的相關(guān)性。2、采用qRT-PCR方法檢測(cè)胃癌細(xì)胞系SGC-7901、MGC-803、BGC-823以及胃粘膜正常細(xì)胞系GES-1中miRNA-106b-25的表達(dá)水平。同時(shí),以lipo2000作為轉(zhuǎn)染媒介,向胃癌細(xì)胞系中瞬時(shí)轉(zhuǎn)染人工合成miRNA-106b-25抑制劑(miRNA inhibitor),分別通過熒光顯微鏡下觀察和qRT-PCR方法檢測(cè)轉(zhuǎn)染效率,選擇抑制效果最好的胃癌細(xì)胞系作為進(jìn)一步細(xì)胞功能研究的實(shí)驗(yàn)對(duì)象。3、采用劃痕實(shí)驗(yàn)觀察胃癌細(xì)胞遷移能力,生長(zhǎng)曲線和MTT法觀察胃癌細(xì)胞增殖的變化以及miRNA inhibitor對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制情況,PI單染法及Annexin V/PI雙染法檢測(cè)細(xì)胞周期及凋亡的變化,Transwell細(xì)胞遷徙實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞侵襲能力的改變。結(jié)果:1、胃癌患者miRNA-106b-25在癌組織中的表達(dá)水平顯著高于癌旁正常胃粘膜組織,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。miRNA-106b和miRNA-93相對(duì)表達(dá)倍數(shù)與腫瘤大小、漿膜累犯、脈管癌栓、浸潤(rùn)深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移和TNM分期顯著相關(guān),差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;miRNA-25相對(duì)表達(dá)倍數(shù)則僅與漿膜累犯、脈管癌栓、浸潤(rùn)深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移顯著相關(guān)。2、MiRNA-106b、miRNA-93、miRNA-25在胃癌細(xì)胞系SGC-7901、MGC-803、BGC-823表達(dá)量均高于胃粘膜正常細(xì)胞系GES-1。MGC-803相較于另外兩種胃癌細(xì)胞系(SGC-7901、BGC-823),外源性mi RNA inhibitor對(duì)mi RNA-106b-25的抑制靶向性較高,即選擇MGC-803作為細(xì)胞功能研究的實(shí)驗(yàn)對(duì)象。3、在胃癌細(xì)胞系MGC-803中瞬時(shí)轉(zhuǎn)染人工合成的miRNA inhibitor后,通過劃痕實(shí)驗(yàn)、Transwell實(shí)驗(yàn)表明轉(zhuǎn)染后MGC-803細(xì)胞遷移、侵襲能力顯著下降;MTT實(shí)驗(yàn)、細(xì)胞生長(zhǎng)計(jì)數(shù)表明轉(zhuǎn)染后MGC-803細(xì)胞的生長(zhǎng)受到顯著抑制;Annexin V/PI法表明轉(zhuǎn)染后MGC-803細(xì)胞凋亡增加。結(jié)論:1、胃癌組織中miRNA-106b-25基因簇過表達(dá),并且該簇miRNA的表達(dá)與胃癌中與預(yù)后密切相關(guān)的臨床病理特征有關(guān),提示其表達(dá)量可作為反映胃癌的進(jìn)展程度重要臨床指標(biāo)。2、相對(duì)于正常胃粘膜細(xì)胞,miRNA-106b-25基因簇在胃癌細(xì)胞系中均過表達(dá);并通過外源性抑制其表達(dá)后,胃癌細(xì)胞的多項(xiàng)生物學(xué)行為均受到顯著抑制,提示其可能作用于胃癌發(fā)生發(fā)展過程中的關(guān)鍵部位,為進(jìn)一步探究并尋找其在胃癌治療中關(guān)鍵分子靶點(diǎn)奠定堅(jiān)實(shí)基礎(chǔ)。
【關(guān)鍵詞】：胃癌 miR-106b-25臨床病理因素 MGC-803胃癌細(xì)胞 生物學(xué)特征
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R735.2
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-10
• 縮略語/符號(hào)說明10-12
• 前言12-15
• 研究現(xiàn)狀、成果12-13
• 研究目的、方法13-15
• 一、胃癌組織中miRNA-106b-25的表達(dá)15-32
• 1.1 對(duì)象和方法15-19
• 1.1.1 對(duì)象15
• 1.1.2 材料與試劑15-16
• 1.1.3 溶液配制16
• 1.1.4 主要儀器16
• 1.1.5 實(shí)驗(yàn)方法16-19
• 1.1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理19
• 1.2 結(jié)果19-30
• 1.2.1 胃癌組織與其癌旁正常胃粘膜組織中miRNA-106b-25的表達(dá)差異19-20
• 1.2.2 胃癌組織miRNA-106b-25的表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系20-30
• 1.3 討論30-31
• 1.4 小結(jié)31-32
• 二、miR-106b-25在胃癌細(xì)胞系中表達(dá)的研究32-39
• 2.1 對(duì)象和方法32-34
• 2.1.1 細(xì)胞系32
• 2.1.2 相關(guān)試劑與材料32
• 2.1.3 主要儀器32
• 2.1.4 實(shí)驗(yàn)方法32-34
• 2.1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理34
• 2.2 結(jié)果34-36
• 2.2.1 胃癌細(xì)胞系中miRNA-106b-25的表達(dá)34
• 2.2.2 瞬時(shí)轉(zhuǎn)染反義抑制劑篩選降表達(dá)效果最佳的胃癌細(xì)胞系34-36
• 2.3 討論36-38
• 2.4 小結(jié)38-39
• 三、反義抑制miR-106b-25對(duì)胃癌細(xì)胞生物學(xué)行為的影響39-51
• 3.1 對(duì)象和方法39-43
• 3.1.1 對(duì)象39
• 3.1.2 方法39-43
• 3.1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理43
• 3.2 結(jié)果43-49
• 3.2.1 劃痕實(shí)驗(yàn)觀察轉(zhuǎn)染后細(xì)胞遷移能力的變化43-44
• 3.2.2 MTT（噻唑蘭比色分析）檢測(cè)轉(zhuǎn)染抑制效果44-45
• 3.2.3 細(xì)胞生長(zhǎng)計(jì)數(shù)45-46
• 3.2.4 Transwell實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞侵襲能力46-47
• 3.2.5 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞周期47-48
• 3.2.6 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡48-49
• 3.3 討論49-50
• 3.4 小結(jié)50-51
• 結(jié)論51-52
• 參考文獻(xiàn)52-56
• 發(fā)表論文和參加科研情況說明56-57
• 附錄57-59
• 綜述 microRNA-106b-25在胃癌中的研究進(jìn)展59-71
• 綜述參考文獻(xiàn)66-71
• 致謝71

【共引文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：648788