目的1.將血液腫瘤患者血清外泌體作用肝癌Hep G2細(xì)胞、宮頸癌He La細(xì)胞,探討血液腫瘤患者血清外泌體在第二腫瘤細(xì)胞耐藥及遷移過程中扮演的角色。方法1.血液腫瘤患者及健康人血清外泌體分離提取。2.透射電子顯微鏡(TEM)對外泌體形態(tài)觀察。3.蛋白免疫印跡法(Western blot)測定外泌體相應(yīng)標(biāo)記蛋白CD63、HSP70及TSG101的表達(dá)。4.蛋白免疫印跡法(Western blot)測定外泌體P-gp、MMP-2蛋白表達(dá),并動(dòng)態(tài)監(jiān)測血液腫瘤患者治療療程中血清外泌體P-gp、MMP-2表達(dá)情況。5.蛋白免疫印跡法(Western blot)檢測血液腫瘤患者血清外泌體作用肝癌Hep G2細(xì)胞后P-gp蛋白變化情況;免疫熒光法測定血液腫瘤患者血清外泌體作用宮頸癌He La細(xì)胞后P-gp蛋白變化情況。6.蛋白免疫印跡法(Western blot)檢測血液腫瘤患者血清外泌體作用肝癌Hep G2細(xì)胞后MMP-2蛋白變化情況。7.Transwell細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)檢測血液腫瘤患者血清外泌體對肝癌Hep G2細(xì)胞和宮頸癌He La細(xì)胞遷移的影響。結(jié)果1.外泌體提取試劑盒所提取的物質(zhì)呈現(xiàn)明顯的脂...

【文章頁數(shù)】：67 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
一 前言
    1.1 研究背景
        1.1.1 第二腫瘤
        1.1.2 血液系統(tǒng)腫瘤與第二腫瘤
        1.1.3 外泌體
        1.1.4 人血清外泌體
        1.1.5 腫瘤耐藥
        1.1.6 外泌體與惡性腫瘤化療耐藥
        1.1.7 細(xì)胞遷移與腫瘤轉(zhuǎn)移
        1.1.8 外泌體與惡性腫瘤遷移及影響免疫反應(yīng)
        1.1.9 P-糖蛋白
        1.1.10 MMP-2蛋白
    1.2 研究目的
    1.3 研究內(nèi)容
    1.4 研究思路
二 材料與方法
    2.1 材料
        2.1.1 實(shí)驗(yàn)細(xì)胞株
        2.1.2 實(shí)驗(yàn)用人血清
        2.1.3 主要儀器及設(shè)備
        2.1.4 主要試劑及藥品
    2.2 方法
        2.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)
        2.2.2 試劑盒提取人血清外泌體
            分離純化血清外泌體
        2.2.3 外泌體的形態(tài)學(xué)檢測
        2.2.4 實(shí)驗(yàn)分組
        2.2.5 蛋白免疫印跡法(Western blot)
            2.2.5.1 人血清外泌體總蛋白提取
            2.2.5.2 細(xì)胞總蛋白提取
        2.2.6 細(xì)胞免疫熒光
        2.2.7 細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)
        2.2.8 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理
三 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    3.1 人血清外泌體的分離鑒定及P-GP、MMP-2 蛋白檢測
        3.1.1 人血清外泌體的形態(tài)學(xué)及粒徑鑒定
        3.1.2 人血清外泌體的標(biāo)記蛋白檢測
        3.1.3 人血清外泌體的P-gp、MMP-2 蛋白檢測
        3.1.4 血液腫瘤患者化療前后血清外泌體P-gp、MMP-2 蛋白的檢測
    3.2 血液腫瘤患者血清外泌體增加HEPG2 細(xì)胞、HELA細(xì)胞中P-GP蛋白的含量,致細(xì)胞獲得外源性耐藥
        3.2.1 血液腫瘤患者血清的外泌體增加Hep G2 細(xì)胞P-gp蛋白的含量
        3.2.2 血液腫瘤患者血清的外泌體增加He La細(xì)胞P-gp蛋白的含量
    3.3 血液腫瘤患者血清外泌體無明顯增加HEPAG2 細(xì)胞中MMP-2 蛋白的含量,但致HEPG2 細(xì)胞、HELA細(xì)胞遷移能力增強(qiáng)
        3.3.1 血液腫瘤患者血清外泌體無明顯增加Hep G2 細(xì)胞中MMP-2 蛋白的含量
        3.3.2 血液腫瘤患者血清外泌體致HEPG2 細(xì)胞、HELA細(xì)胞遷移能力增強(qiáng)
四 討論
    4.1 血液腫瘤患者血清的外泌體會(huì)致HEPG2細(xì)胞、HELA細(xì)胞外源獲得性耐藥性
    4.2 血液腫瘤患者血清的外泌體會(huì)致HEPG2 細(xì)胞、HELA細(xì)胞遷移能力增強(qiáng)
五 結(jié)論與展望
    5.1 結(jié)論
    5.2 展望
參考文獻(xiàn)
附錄一 英文縮略詞表
致謝
攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的論文



本文編號：3995121