本文關(guān)鍵詞：HtrA1絲氨酸蛋白酶通過(guò)XIAP途徑逆轉(zhuǎn)肝癌細(xì)胞多藥耐藥的相關(guān)研究

  更多相關(guān)文章： HtrA1絲氨酸蛋白酶 肝細(xì)胞癌 化療耐藥 化療敏感性 X連鎖凋亡抑制蛋白

【摘要】：目的:對(duì)肝細(xì)胞癌中Htr A1絲氨酸蛋白酶(Htr A1 serine protease)表達(dá)量和肝癌細(xì)胞化療敏感性之間的關(guān)系進(jìn)行研究,同時(shí)探討Htr A1絲氨酸蛋白酶的作用機(jī)制。方法:使用阿霉素(adriamycin,ADM)誘導(dǎo)出耐藥肝癌細(xì)胞株Hep G2/ADM,MTT法檢測(cè)耐藥細(xì)胞株Hep G2/ADM對(duì)5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil,5-Fu)、絲裂霉素(mitomycin,MMC)、奧沙利鉑(Oxaliplatin,L-OHP)、阿霉素(adriamycin,ADM)和長(zhǎng)春新堿(vincristine,VC R)的化療敏感性,計(jì)算耐藥指數(shù)(resistance index,RI)。Western blot方法檢測(cè)Hep G2/ADM細(xì)胞中Htr A1絲氨酸蛋白酶、多藥耐藥P糖蛋白(p-glycoprotein,P-gp)以及多藥耐藥相關(guān)蛋白1(multidrug resistance-associated proteins,MRP1)的表達(dá)情況。限制性內(nèi)切酶Bam HI和Eco RI構(gòu)建真核表達(dá)載體p EGFP-N1-Htr A1,然后用p EGFP-N1-Htr A1對(duì)肝癌細(xì)胞株Hep G2/ADM進(jìn)行轉(zhuǎn)染。MTT檢測(cè)高表達(dá)Htr A1絲氨酸蛋白酶的Hep G2/ADM肝癌細(xì)胞對(duì)5-Fu、ADM、MMC、L-0HP、VCR的化療敏感性,計(jì)算RI,以觀察Htr A1絲氨酸蛋白酶的高表達(dá)對(duì)肝癌細(xì)胞耐藥的影響,采用加入不同濃度的Htr A1抑制劑NVP-LEB748的Hep G2/ADM細(xì)胞作為對(duì)照。為進(jìn)一步研究Htr A1絲氨酸蛋白酶的作用機(jī)制,通過(guò)western blot檢測(cè)多藥耐藥P-gp、MRP1和X連鎖凋亡抑制蛋白(X-linked inhibitor of apoptosis protein,XIAP)在Htr A1高表達(dá)以及分別加入不同濃度NVP-LEB748的Hep G2/ADM肝癌細(xì)胞中的表達(dá)情況,通過(guò)XIAPsi RNA抑制其表達(dá)后,檢測(cè)Htr A1高表達(dá)的Hep G2/ADM細(xì)胞對(duì)不同化療藥物的化療耐藥的情況,采用活性檢測(cè)試劑盒對(duì)細(xì)胞凋亡蛋白酶--天冬氨酸特異性半胱氨酸蛋白酶3、7和9(aspartate-specific cysteine proteases 3、7和9,Caspase-3,Caspase-7,Caspase-9)的活性進(jìn)行分析。結(jié)果:成功構(gòu)建了肝癌耐藥細(xì)胞株Hep G2/ADM,細(xì)胞中Htr A1的表達(dá)水平明顯降低。真核表達(dá)載體p EGFP-N1-Htr A1轉(zhuǎn)染Hep G2/ADM細(xì)胞后,細(xì)胞中Htr A1呈明顯的高表達(dá)狀態(tài),Htr A1高表達(dá)的Hep G2/ADM細(xì)胞的化療敏感性增強(qiáng),肝癌細(xì)胞中Htr A1的表達(dá)和耐藥指數(shù)(Resistance index,RI)成負(fù)相關(guān)。Western blot發(fā)現(xiàn),不論有無(wú)Htr A1抑制劑的存在,P-gp和MRP1的表達(dá)水平并沒(méi)有顯著的變化,然而,XIAP的表達(dá)卻隨著Htr A1抑制劑濃度的升高而升高。通過(guò)RNA干擾后,XIAP的低表達(dá)導(dǎo)致RI的低水平,XIAP的表達(dá)和Hep G2細(xì)胞的化療敏感性之間為負(fù)相關(guān)關(guān)系,另外,隨著抑制劑濃度的增高,caspases 3、7和9的活性也明顯降低。結(jié)論:Htr A1的高表達(dá)可以逆轉(zhuǎn)肝癌細(xì)胞的多藥耐藥,其通過(guò)XIAP途徑來(lái)提高肝癌細(xì)胞的化療敏感性,Htr A1可能能夠作為肝癌化療的一個(gè)靶點(diǎn)。
【關(guān)鍵詞】：HtrA1絲氨酸蛋白酶 肝細(xì)胞癌 化療耐藥 化療敏感性 X連鎖凋亡抑制蛋白
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R735.7
【目錄】：

• 摘要4-6
• Abstract6-9
• 引言9-11
• 材料和方法11-24
• 結(jié)果24-29
• 討論29-31
• 結(jié)論31-32
• 參考文獻(xiàn)32-35
• 綜述35-45
• 參考文獻(xiàn)40-45
• 在讀期間發(fā)表論文45-46
• 攻讀學(xué)位期間本人獲獎(jiǎng)情況46-47
• 中英文縮寫詞表47-48
• 致謝48-49

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