本文關(guān)鍵詞：Connexin43過表達(dá)對U251細(xì)胞生長遷移及凋亡作用的研究

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【摘要】：縫隙連接是相鄰細(xì)胞間的直接連接，細(xì)胞質(zhì)可以通過縫隙連接通道直接聯(lián)系在一起�？p隙連接直接調(diào)解代謝產(chǎn)物、離子從一個(gè)細(xì)胞運(yùn)輸?shù)搅硪粋�(gè)細(xì)胞內(nèi)。縫隙連接蛋白43（Connexin43，Cx43）在中樞神經(jīng)系統(tǒng)星型膠質(zhì)細(xì)胞中高表達(dá)，而最常見的星形細(xì)胞瘤中的表達(dá)常常是降低的。有研究認(rèn)為Cx43表達(dá)的降低將會有利于膠質(zhì)瘤細(xì)胞的生長。本研究在建立膠質(zhì)瘤U251過表達(dá)Cx43基礎(chǔ)上，通過細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)，細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)（Migration assay），，RT-PCR（Reversetranscription，PCR）和Western Blot等實(shí)驗(yàn)方法，分析Cx43對膠質(zhì)瘤U251在生長，遷移和凋亡方面的作用和影響。為膠質(zhì)瘤的治療及耐藥機(jī)制的研究提供新的思路和方法。 1．Cx43對細(xì)胞生長的影響 U251和Cx43過表達(dá)U251細(xì)胞分別計(jì)數(shù)，10%FBS+IMDM培養(yǎng)基種植到24孔板，培養(yǎng)7天，每隔24h消化細(xì)胞，取均值進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)，U251和Cx43-U251細(xì)胞在4-5天時(shí)生長迅速，在6-7天時(shí)細(xì)胞生長趨于平緩。兩種細(xì)胞在1-4天時(shí)生長差別不大，在5-7天時(shí)U251細(xì)胞增殖遠(yuǎn)大于Cx43-U251細(xì)胞具顯著差異。 實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，過表達(dá)Cx43對U251細(xì)胞增殖具有一定的影響。Cx43對U251細(xì)胞生長的抑制作用有可能與細(xì)胞周期調(diào)解蛋白相關(guān)。 2. Cx43對細(xì)胞遷移的影響 本部分實(shí)驗(yàn)擬檢測Cx43對膠質(zhì)瘤細(xì)胞遷移能力的影響。劃痕實(shí)驗(yàn)顯示，Cx43過表達(dá)U251細(xì)胞在修復(fù)劃痕過程中細(xì)胞的運(yùn)動性更有方向性（指向性），正常U251細(xì)胞在劃痕修復(fù)時(shí)間和細(xì)胞運(yùn)動性上與Cx43過表達(dá)U251具有顯著差別。觀察發(fā)現(xiàn)，Cx43過表達(dá)U251細(xì)胞劃痕處遷移過程中細(xì)胞自身形態(tài)發(fā)生改變。與U251細(xì)胞相比，Cx43過表達(dá)U251細(xì)胞骨架更為伸展，由多角形變?yōu)楠M長的梭形。 實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，Cx43過表達(dá)可以促使細(xì)胞更快修復(fù)劃痕，增強(qiáng)了細(xì)胞遷移能力。腦膠質(zhì)瘤的浸潤性生長是臨床治療難點(diǎn)，Cx43有可能是通過與細(xì)胞骨架蛋白之間相互作用來影響細(xì)胞遷移。 3. Cx43對細(xì)胞凋亡的影響 目前對膠質(zhì)瘤的治療多采用手術(shù)、放化療綜合治療方案。TMZ因?yàn)榫吡己茂熜Ф粡V泛使用。實(shí)驗(yàn)證明1000uM TMZ誘導(dǎo)膠質(zhì)瘤發(fā)生凋亡。為進(jìn)一步闡述Cx43是否參與TMZ誘導(dǎo)膠質(zhì)瘤凋亡，采用U251和Cx43過表達(dá)U251細(xì)胞組，檢測了Cx43，Caspase-3，Bcl-2和Bax的表達(dá)水平。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示: Cx43過表達(dá)組U251Bax/Bcl-2比值遠(yuǎn)低于U251組比值，具統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（p0.05）。Cx43過表達(dá)U251細(xì)胞中Bcl-2表達(dá)增多，Bax表達(dá)降低，Bax/Bcl-2比率顯著降低；Cx43過表達(dá)U251細(xì)胞中Caspase-3表達(dá)明顯降低。結(jié)果表明，Cx43可能是通過線粒體通路影響細(xì)胞凋亡。 綜上所述，Cx43具有可抑制U251細(xì)胞的增殖，促進(jìn)細(xì)胞遷移，抵抗由TMZ誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的作用。
【關(guān)鍵詞】：縫隙連接蛋白43 膠質(zhì)瘤 遷移 凋亡
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R739.41
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-8
• 英文詞表8-11
• 第1章 文獻(xiàn)回顧11-28
• 1.1 中樞神經(jīng)系統(tǒng)腫瘤的形成星形細(xì)胞瘤11-12
• 1.2 縫隙連接蛋白家族12-17
• 1.2.1 縫隙連接（GJIC，Gap junction intercellular communiction）12-13
• 1.2.2 縫隙連接蛋白的基因結(jié)構(gòu)13-17
• 1.3 Cx43 的生物學(xué)特性17-27
• 1.3.1 Cx43(GJA1)17-18
• 1.3.2 Cx43 結(jié)構(gòu)特點(diǎn)18-19
• 1.3.3 Cx43 在人膠質(zhì)瘤細(xì)胞中的表達(dá)19
• 1.3.4 Cx43 在腫瘤發(fā)生中的作用機(jī)制19
• 1.3.5 Cx43 對細(xì)胞生長的作用19-22
• 1.3.6 Cx43 對細(xì)胞遷移作用22-25
• 1.3.7 Cx43 對凋亡的作用25-27
• 1.4 本課題研究目的和內(nèi)容27-28
• 1.4.1 研究目的27
• 1.4.2 具體內(nèi)容27-28
• 第2章 材料與方法28-39
• 2.1 實(shí)驗(yàn)細(xì)胞28
• 2.2 實(shí)驗(yàn)試劑28-29
• 2.3 實(shí)驗(yàn)儀器29-30
• 2.4 試劑配置30-31
• 2.5 實(shí)驗(yàn)方法31-39
• 2.5.1 細(xì)胞培養(yǎng)及穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞系構(gòu)建31-32
• 2.5.2 Cx43 對 U251 細(xì)胞增殖的影響32
• 2.5.3 Cx43 過表達(dá)對 U251 細(xì)胞遷移及細(xì)胞形態(tài)學(xué)的影響32-33
• 2.5.4 檢測替莫唑胺 Cx43 過表達(dá) U251 細(xì)胞凋亡作用的研究33-38
• 2.5.5 TUNEL 檢測凋亡38
• 2.5.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析38-39
• 第3章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果39-49
• 3.1 Cx43 過表達(dá)對 U251 細(xì)胞增殖的影響39-41
• 3.2 Cx43 過表達(dá)對 U251 細(xì)胞遷移能力的影響41-42
• 3.3 Cx43 過表達(dá) U251 細(xì)胞在替莫唑胺誘導(dǎo)的凋亡機(jī)制中產(chǎn)生的影響42-49
• 3.3.1 MTS 檢測細(xì)胞增殖42-44
• 3.3.2 RT-PCR 檢測 U251 及過表達(dá) Cx43 U251 細(xì)胞 mRNA 表達(dá)情況44-46
• 3.3.3 Western Blot 檢測 Cx43 過表達(dá) U251 細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋白表達(dá)情況46-48
• 3.3.4 TUNEL 檢測凋亡48-49
• 第4章 討論49-52
• 第5章 結(jié)論52-53
• 參考文獻(xiàn)53-64
• 作者簡介及在學(xué)期間所取得的科研成果64-65
• 致謝65

【共引文獻(xiàn)】

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本文編號：647209