本文關(guān)鍵詞：舌鱗癌細(xì)胞經(jīng)順鉑作用前后Nanog表達(dá)和細(xì)胞遷移能力的對比研究

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【摘要】：口腔頜面部惡性腫瘤是目前人類常見惡性腫瘤之一,口腔癌位居全身惡性腫瘤的第六位。因此近年來雖然頭頸部惡性腫瘤的治療在一定程度上提高了患者的生活質(zhì)量,但并沒有延長患者的長期生存率。而患者的死亡主要是由于腫瘤復(fù)發(fā)、頸部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移或遠(yuǎn)處臟器轉(zhuǎn)移引起的,因此腫瘤的形成及轉(zhuǎn)移的機(jī)制成為研究重點(diǎn)�；瘜W(xué)藥物作為中晚期病例手術(shù)前后的輔助治療,可有效緩解腫瘤的生長,其也適用于有遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的病人。但是,部分患者在接受治療后仍有腫瘤的復(fù)發(fā)甚至轉(zhuǎn)移。目前,尚無文獻(xiàn)研究比較經(jīng)化療后的剩余細(xì)胞與未經(jīng)化療的細(xì)胞兩者的腫瘤復(fù)發(fā)和遷移的能力。為此,本次實(shí)驗(yàn)?zāi)康?探討舌鱗癌細(xì)胞SCC-15經(jīng)化療藥物作用前后的Nanog表達(dá)和遷移能力是否有改變。本文應(yīng)用化療藥物作用舌鱗癌細(xì)胞系SCC-15,并檢測順鉑作用前后與細(xì)胞增殖密切相關(guān)的Nanog基因的表達(dá)、細(xì)胞凋亡率及遷移能力的變化,試以探究經(jīng)順鉑作用前后舌鱗癌細(xì)胞的細(xì)胞遷移和增殖能力的變化。實(shí)驗(yàn)中化療藥物以及基因的選擇理由如下:1.順鉑(順氯氨鉑,cisplatin,DDP)屬周期非特異性藥物,為治療多種實(shí)體瘤的一線用藥。20世紀(jì)80年代,順鉑開始應(yīng)用于頭頸部癌癥化療,對頭頸部鱗癌具有十分顯著的療效,其化療效果優(yōu)于多西他賽(docetaxe),且毒副作用較小,廣泛用于舌鱗癌臨床一線用藥。2.nanog已被廣泛認(rèn)為參與調(diào)控胚胎干細(xì)胞的自我更新,在腫瘤細(xì)胞中,nanog的異常表達(dá)與體外細(xì)胞增殖能力的增強(qiáng)及體內(nèi)腫瘤的生長有關(guān),其積極調(diào)節(jié)腫瘤細(xì)胞活性和腫瘤轉(zhuǎn)移能力。它是維持腫瘤細(xì)胞干性的關(guān)鍵性基因,促進(jìn)幾種癌癥中的腫瘤干細(xì)胞樣特征。例如,異位nanogp8基因的超表達(dá)能增強(qiáng)前列腺癌細(xì)胞克隆生長和腫瘤再生能力。并且胚胎nanog基因的激活能驅(qū)動(dòng)結(jié)直腸癌細(xì)胞的一個(gè)亞群擁有一個(gè)干性樣的表型。乳腺癌細(xì)胞系中nanog的過表達(dá)也能增強(qiáng)其化療抗性,nanog蛋白質(zhì)可以與周期蛋白d1的啟動(dòng)子區(qū)域結(jié)合,從而調(diào)節(jié)細(xì)胞周期和增殖。本文分為兩個(gè)部分進(jìn)行相關(guān)研究:第一部分舌鱗癌細(xì)胞系scc-15與正常細(xì)胞系293中nanog表達(dá)情況及半效抑制濃度ic50的測定目的:確定scc-15細(xì)胞系中是否有nanog表達(dá),以及與人正常組織細(xì)胞系相比,人舌鱗癌細(xì)胞系中的nanog表達(dá)是否不同,應(yīng)用細(xì)胞免疫熒光技術(shù)定性檢測兩細(xì)胞系中nanog表達(dá)情況。方法:首先應(yīng)用細(xì)胞免疫熒光方法檢測人舌鱗癌細(xì)胞scc-15細(xì)胞系中是否有nanog蛋白表達(dá),并且同時(shí)比較與293細(xì)胞系中nanog表達(dá)情況進(jìn)行比較。如scc-15細(xì)胞系中檢測到有nanog表達(dá),則可以進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。cck-8試劑盒的細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)用于檢測scc-15不同順鉑作用時(shí)間下的藥物毒性半效抑制率(ic50),從而確定各試驗(yàn)組的實(shí)驗(yàn)條件。結(jié)果:(1)、在舌鱗癌細(xì)胞系中有nanog表達(dá),而在正常成熟分化的293細(xì)胞中無表達(dá),scc-15可應(yīng)用于本實(shí)驗(yàn)中nanog基因的相關(guān)研究。(2)、成功通過細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)結(jié)果得出各實(shí)驗(yàn)組的藥物毒性半效抑制率,24h組的ic50約為5μg/ml,48h組為4μg/ml,72h組為3.5μg/ml,從而確定各實(shí)驗(yàn)組的實(shí)驗(yàn)條件(見表1.1)。第二部分順鉑作用前后細(xì)胞凋亡、nanog表達(dá)和遷移能力的對比研究目的:應(yīng)用各種實(shí)驗(yàn)技術(shù)檢測順鉑作用前后細(xì)胞凋亡情況的變化,以及nanog的mrna及蛋白表達(dá)情況是否改變,遷移能力的變化等。方法:為比較順鉑作用前后scc-15的細(xì)胞凋亡情況,我們應(yīng)用annexin-fitc/pi雙染色法結(jié)合流式細(xì)胞儀檢測未用順鉑處理的scc-15即對照組以及經(jīng)不同濃度順鉑分別處理24h、48h及72h的實(shí)驗(yàn)組,并計(jì)算細(xì)胞凋亡率;檢測與腫瘤細(xì)胞增殖能力密切相關(guān)的nanog基因的mrna及蛋白表達(dá)水平,應(yīng)用qrt-pcr及westernblot對各組細(xì)胞進(jìn)行定量分析研究;劃痕實(shí)驗(yàn)檢測兩組細(xì)胞遷移能力的變化。結(jié)果:細(xì)胞凋亡實(shí)驗(yàn)示:各組凋亡率結(jié)果如下:24h組(13.34±4.14)%、48h組(24.75±1.48)%、72h組(25.92±1.78)%,對照組(6.61±0.64)%。兩兩比較統(tǒng)計(jì)學(xué)差異分析,24h、48h及72h組分別與對照組相比p值分別為0.035,0.000及0.000,有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。各實(shí)驗(yàn)組分別與對照組比較,細(xì)胞凋亡率均高于對照組,可見順鉑促進(jìn)細(xì)胞凋亡;qrt-pcr結(jié)果顯示:從mrna水平上看,順鉑作用24h、48h及72h后nanog的mrna相對表達(dá)逐漸升高,表達(dá)量分別為(3.86±1.26)、(5.11±1.35)及(7.92±0.80),與對照組(1.04±0.36)相比均有增高(p=0.040;p=0.006;p=0.000),實(shí)驗(yàn)組nanog的mrna相對表達(dá)量均比對照組高。此外Western結(jié)果示,實(shí)驗(yàn)組24h,48h,72h蛋白表達(dá)量依次為:0.057±0.013,0.131±0.031,0.168±0.019,分別與對照組0.038±0.005兩兩比較(p=0.541;p=0.001;p=0.000)。除24 h組的表達(dá)量與對照組無差異外,其余兩組的Nanog蛋白表達(dá)量均高于對照組。qRT-PCR及Western結(jié)果說明,通過順鉑作用于細(xì)胞,可以增強(qiáng)Nanog表達(dá)量。劃痕實(shí)驗(yàn)顯示:按v=s/t計(jì)算得出各組細(xì)胞移動(dòng)速率:24h組(15.45±2.46)μm/h、48h組(35.74±2.19)μm/h、72h組(45.70±4.51)μm/h,分別與對照組(11.42±1.69)μm/h相比p=0.388;p=0.000;p=0.000�？梢娊�(jīng)順鉑作用時(shí)間越長的實(shí)驗(yàn)組,細(xì)胞遷移能力越強(qiáng)。結(jié)論:經(jīng)化療后的殘存細(xì)胞的腫瘤形成能力和遷移能力都較未行化療前的細(xì)胞增強(qiáng)。
【關(guān)鍵詞】：舌鱗狀細(xì)胞癌 Nanog 增殖 遷移
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R739.86
【目錄】：

• 英漢縮略語名詞對照4-6
• 中文摘要6-10
• 英文摘要10-15
• 前言15-17
• 第一部分 舌鱗癌細(xì)胞系SCC-15 與正常細(xì)胞系293中Nanog表達(dá)情況及半效抑制濃度IC50的測定17-22
• 1 材料與方法17-19
• 2 結(jié)果19-20
• 3 結(jié)論20-22
• 第二部分 順鉑作用前后細(xì)胞凋亡、Nanog表達(dá)和遷移能力的對比研究22-27
• 1 材料與方法22-24
• 2 結(jié)果24-25
• 3 結(jié)論25-27
• 全文總結(jié)27-28
• 參考文獻(xiàn)28-31
• 附圖31-34
• 文獻(xiàn)綜述34-43
• 參考文獻(xiàn)39-43
• 致謝43-44
• 攻讀碩士期間發(fā)表論文44

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本文編號(hào)：647001