發(fā)布時間：2017-08-09 08:19

  本文關(guān)鍵詞：恢復(fù)SFRP1基因表達對MGC803細(xì)胞增殖遷移的影響

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【摘要】：目的:胃癌在我國屬最常見的惡性腫瘤之一,其死亡率居各類惡性腫瘤的第二位。由于胃癌早期臨床癥狀不明顯,多數(shù)患者確診時已屬中晚期,然而接受姑息性化療的晚期胃癌患者5年生存率小于10%。因此,尋找新的治療靶點、研發(fā)新的化療藥物,對胃癌的治療具有重大意義。最新研究表明,Wnt信號通路的異常激活與多種腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān),細(xì)胞表觀遺傳改變,導(dǎo)致抑瘤基因沉默是腫瘤的常見事件。由于抑瘤基因甲基化具有可逆性,故通過甲基化轉(zhuǎn)移酶抑制劑5-氮雜-2'-脫氧胞苷(5-Aza-2'-deoxycytidine,5-Aza-d C)處理胃癌MGC-803細(xì)胞,分析MGC-803細(xì)胞SFRP1表達水平及對細(xì)胞生物學(xué)行為的影響,為探討5-Aza-d C在治療胃癌臨床應(yīng)用提供實驗依據(jù)。方法:1.體外培養(yǎng)胃癌MGC-803細(xì)胞,取對數(shù)生長期細(xì)胞,隨機分為空白對照組、1umol/L 5-Aza-d C處理組、5umol/L 5-Aza-d C處理組、10umol/L 5-Aza-d C處理組和20 umol/L5-Aza-d C處理組umol/L。2.用噻唑藍(lán)MTT法檢測各組在0h、12h、24h、48h的OD值,觀察5-Aza-Cd對MGC-803細(xì)胞生長抑制作用,繪制生成曲線抑制圖,根據(jù)MTT結(jié)果初步篩選抑制率較高濃度。3.取該濃度5-Aza-d C,分別作用細(xì)胞0h、12h、24h、48h,提取藥物作用后細(xì)胞的RNA及蛋白,分別采用RT-PCR和Western blot實驗檢測5-Aza-d C干預(yù)不同時間后人胃癌MGC803細(xì)胞中SFRP1及β-catenin m RNA和蛋白表達的情況;4.應(yīng)用劃痕實驗探討5-Aza-d C對MGC-803細(xì)胞遷移能力的影響。結(jié)果:1.MTT結(jié)果顯示,5-Aza-Cd對MGC-803細(xì)胞生長有明顯抑制作用,并且存在劑量依賴性反應(yīng)關(guān)系;2.RT-PCR結(jié)果顯示,SFRP1基因m RNA水平較未處理組升高(p0.01),而β-catenin m RNA水平較未處理組降低(p0.01),兩者m RNA表達水平呈負(fù)相關(guān),且具有時間依賴性。3.Western blot結(jié)果顯示,SFRP1基因蛋白水平較未處理組升高(p0.01),與SFRP1基因m RNA表達水平一致,β-catenin蛋白表達水平較未處理組降低,與β-catenin m RNA表達水平一致。4.劃痕實驗結(jié)果顯示:12小時5μmol/L組MGC-803細(xì)胞愈合率為(47.8%±3.1%)、10μmol/L組MGC-803細(xì)胞愈合率為(18.2%±2.8%)與對照組(54.5.0%±1.6%)比較p0.05,有統(tǒng)計學(xué)意義;劃痕24小時后5μmol/L組MGC-803細(xì)愈合率為(82.7%±1.9%),10μmol/L組MGC-803細(xì)胞愈合率為(45.5%±1.3%),與對照組(91%±2.5%)比較p0.05,有統(tǒng)計學(xué)意義;結(jié)論:1.5-Aza-d C可抑制MGC-803細(xì)胞增殖,使其遷移能力降低,其作用呈時間和濃度依賴性。2.5-Aza-d C可能通過恢復(fù)SFRP1基因表達,從而發(fā)揮抑制MGC-803細(xì)胞增殖和遷移的作用。
【關(guān)鍵詞】：胃癌 Wnt 5-Aza-dC SFRP1
【學(xué)位授予單位】：南華大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R735.2
【目錄】：

• 中文摘要4-7
• 英文摘要7-11
• 中英文詞對照表11-12
• 第1章 前言12-16
• 第2章 材料和方法16-26
• 第3章 結(jié)果26-34
• 第4章 討論34-38
• 第5章 結(jié)論38-40
• 參考文獻40-46
• 文獻綜述46-56
• 參考文獻52-56
• 碩士期間發(fā)表論文56-58
• 致謝58

【共引文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 伍丹;伍尤華;;Wnt拮抗因子SFRP1與腫瘤相關(guān)性的研究進展[J];現(xiàn)代醫(yī)藥衛(wèi)生;2015年07期

2 薛猛;王良靜;;結(jié)直腸癌基因DNA甲基化標(biāo)志物篩查的價值[J];世界華人消化雜志;2015年29期

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 李金平;抑癌基因OPCML在人乳腺癌中的表達、甲基化狀態(tài)及生物學(xué)功能的研究[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2013年

2 甘平;藍(lán)萼甲素對神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞抑制作用及其機制研究[D];蘇州大學(xué);2014年

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本文編號：644297