本文關(guān)鍵詞：膠質(zhì)瘤細胞與人腦微血管內(nèi)皮細胞之間ERK的作用機制

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【摘要】：神經(jīng)膠質(zhì)瘤是在中樞神經(jīng)系統(tǒng)中為最常見的,也是最難治愈的惡性腫瘤,起源于神經(jīng)外胚層的中樞神經(jīng)惡性原發(fā)腫瘤,約占顱內(nèi)腫瘤的35.26%-60.96%,占成人所有惡性腫瘤的2%,是一種嚴(yán)重危害著人體健康的常見惡性疾病。在膠質(zhì)瘤的發(fā)生發(fā)展過程中,具有浸潤性生長、侵襲性強、易復(fù)發(fā)、血管豐富等生物學(xué)特征,而一般認為,正是膠質(zhì)瘤的這種高侵襲性、富血管化等以及它與血管內(nèi)皮細胞之間的一些相互作用而導(dǎo)致神經(jīng)膠質(zhì)瘤難根治、愈后差、易復(fù)發(fā)等。神經(jīng)膠質(zhì)瘤細胞與血管內(nèi)皮細胞之間的相互作用能夠促進膠質(zhì)瘤的侵襲性生長,但是具體機制尚不十分明確。因此,研究人腦微血管內(nèi)皮細胞和神經(jīng)膠質(zhì)瘤細胞之間的相互作用具有很重要的現(xiàn)實意義。神經(jīng)膠質(zhì)瘤作為人類顱內(nèi)最常見的惡性腫瘤,其本質(zhì)上是一種多基因參與,并且多基因異常的疾病。多數(shù)研究結(jié)果顯示,ERK/MAPK信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路是目前與神經(jīng)膠質(zhì)瘤相關(guān)的主要的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路之一,與神經(jīng)膠質(zhì)瘤的發(fā)病機制、發(fā)展過程及其生物學(xué)行為有著密切的關(guān)系。在本實驗中,我們擬通過觀察血管內(nèi)皮細胞分泌因子EGF對膠質(zhì)瘤細胞的增殖能力及侵襲能力等生物學(xué)行為的影響,以及ERK信號通路相關(guān)因子反過來對血管內(nèi)皮細胞的影響來探討二者之間的相互作用及相關(guān)機制。研究內(nèi)容和方法:探討血管內(nèi)皮細胞分泌因子EGF對神經(jīng)膠質(zhì)瘤細胞生物學(xué)行為的影響。體外培養(yǎng)神經(jīng)膠質(zhì)瘤細胞系U87MG、U251,以及微血管內(nèi)皮細胞HBMEC,建立神經(jīng)膠質(zhì)瘤細胞與血管內(nèi)皮細胞二者之間的共培養(yǎng)體系;應(yīng)用ERK信號通路激動劑EGF和抑制劑PD98059處理人神經(jīng)膠質(zhì)瘤細胞U87MG和U251,觀察ERK的活性改變時對細胞增殖、侵襲及擬血管形態(tài)的影響。按實驗要求將細胞分組,分別為神經(jīng)膠質(zhì)瘤細胞單獨培養(yǎng)組,二者共培養(yǎng)組,加入外源性EGF組和加入PD98059組。分別采取CCK-8法檢測神經(jīng)膠質(zhì)瘤細胞的增殖能力,Transwell侵襲法檢測神經(jīng)膠質(zhì)瘤細胞的侵襲能力,擬血管形態(tài)實驗檢測神經(jīng)膠質(zhì)瘤細胞的擬血管形態(tài)形成的能力,Western Blots法檢測神經(jīng)膠質(zhì)瘤細胞P-ERK的活化。探討神經(jīng)膠質(zhì)瘤細胞分泌的VEGF對血管內(nèi)皮細胞生物學(xué)行為的影響以及EGF的分泌量的影響。按實驗的不同要求將細胞分組,分別為HBMEC單獨培養(yǎng)組,HBMEC與神經(jīng)膠質(zhì)瘤細胞共培養(yǎng)組。ELISA法檢測不同情況下血管內(nèi)皮細胞EGF的分泌量,血管生成實驗檢測不同情況下HBMEC血管生成的情況。結(jié)果:(1)結(jié)果顯示,與對照組相比,與HBMEC共培養(yǎng)組神經(jīng)膠質(zhì)瘤細胞的增殖能力明顯增強。加入50ng/m L的外源性EGF時,增殖能力明顯增強。而加入5μM/L PD98059時,增殖能力明顯降低。(p0.05)(2)與對照組相比(侵襲數(shù)目為105.33±6.110),與HBMEC共培養(yǎng)組U87MG的侵襲能力明顯增強(侵襲數(shù)目為261.67±10.214),U87MG加入50ng/m L EGF組細胞襲能力明顯增強(侵襲數(shù)目為214.33±11.150)。而U87MG加入5μM/L PD98059細胞侵襲能力明顯降低(侵襲數(shù)目為55.67±6.028)。U251細胞也表現(xiàn)出相似的結(jié)果,對照組、共培養(yǎng)組、加入EGF組、加入PD98059組細胞侵襲的數(shù)目分別為77.33±6.658、237.00±10.440、191.33±3.215、50.67±4.509。(p0.05)(3)與對照組相比(管腔直徑:130.112土2.022μm),HBMEC共培養(yǎng)組U87MG相互融合,連接成網(wǎng)絡(luò)樣結(jié)構(gòu),擬血管形態(tài)形成的能力明顯增強(管腔直徑202.134土2.007μm),U87MG加入50ng/m L EGF組(223.19土2.012μm)擬血管形態(tài)形成的能力也明顯增強,而加入5UM/L PD98059組(76.199土2.833μm)細胞生長較為紊亂,擬血管形態(tài)管腔明顯變小。U251細胞也顯示出相似的結(jié)果,對照組、共培養(yǎng)組、加入EGF組、加入PD98059組細胞侵襲的數(shù)目分別為:90.122土2.733μm、230.112土2.662μm、143.2262.098μm、44.039土1.092μm。(p0.05)(4)以GAPDH為內(nèi)參,結(jié)果顯示,與HBMEC共培養(yǎng)組P-ERK的表達明顯增強。加入50ng/m L EGF組P-ERK的表達也相對增強。而加入5μM/L PD98059組P-ERK的表達明顯降低。(p0.05)(5)結(jié)果顯示,HBMEC加入不同濃度的VEGF165時,EGF的分泌量不斷的增加。HBMEC與兩種神經(jīng)膠質(zhì)瘤細胞共培養(yǎng)時,EGF分泌量明顯增加。(p0.05)(6)結(jié)果顯示,與對照組相比(管腔直徑:115.12土1.731μm),HBMEC與U87MG共培養(yǎng)時,血管生成的能力明顯增加,細胞之間相互融合,形成網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu),并且小管的數(shù)目及管腔直徑明顯增加(管腔直徑:245.228土1.993μm)。U251細胞也表現(xiàn)出相似的結(jié)果,管腔直徑:225.163土1.622μm。(p0.05)結(jié)論:1.血管內(nèi)皮細胞分泌因子EGF能夠通過RAF-MAPK-ERK信號通路增加神經(jīng)膠質(zhì)瘤細胞的增殖能力,侵襲能力,擬血管形態(tài)形成的能力,使得P-ERK的表達增強。2.神經(jīng)膠質(zhì)瘤細胞分泌的因子VEGF能夠通過RAF-MAPK-ERK信號通路增加血管內(nèi)皮細胞的血管生成能力,信號因子EGF分泌量的增加。
【關(guān)鍵詞】：膠質(zhì)瘤 血管內(nèi)皮細胞 ERK 共培養(yǎng) VEGF
【學(xué)位授予單位】：寧夏醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R739.4
【目錄】：

• 摘要4-7
• ABSTRACT7-11
• 中文縮略詞表11-14
• 前言14-18
• 材料與方法18-31
• 結(jié)果31-41
• 討論41-46
• 結(jié)論46-47
• 參考文獻47-52
• 綜述52-62
• 綜述參考文獻59-62
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文62-63
• 致謝63-64
• 個人簡介64

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本文編號：644086