本文關(guān)鍵詞：BRCA1啟動(dòng)子甲基化與散發(fā)性乳腺癌的相關(guān)性研究

  更多相關(guān)文章： DNA甲基化 BSP BRCA1 基因測(cè)序 散發(fā)性乳腺癌 三陰性乳腺癌

【摘要】：目的:乳腺癌(Breast cancer,BC)這一惡性腫瘤,嚴(yán)重地影響著女性的生命健康。乳腺癌可以分為兩種類型,家族性和散發(fā)性,其中大部分(約為95%)是散發(fā)性乳腺癌,家族性約占5%。乳腺癌易感基因1(Breast cancer susceptibility gene 1,BRCA1)的突變對(duì)家族性乳腺癌的發(fā)生發(fā)展有著非常重要意義。但是,研究發(fā)現(xiàn)在散發(fā)性乳腺癌中,BRCA1基因的序列是完整的,卻存在著其轉(zhuǎn)錄的m RNA明顯減少這一現(xiàn)象,說明BRCA1基因依靠其他的機(jī)制參與了散發(fā)型乳腺癌的發(fā)生。目前的研究認(rèn)為抑癌基因DNA異常甲基化在正常細(xì)胞發(fā)生惡性轉(zhuǎn)變以及在惡性腫瘤的侵襲性逐漸增強(qiáng)的過程中占有重要的作用。有研究表明,BRCA1基因啟動(dòng)子異常甲基化與BRCA1基因表達(dá)的缺失及散發(fā)性乳腺癌的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān),并且散發(fā)性三陰性乳腺癌這一基因啟動(dòng)子甲基化的概率高于其他類型。本實(shí)驗(yàn)擬在散發(fā)性乳腺癌的癌組織中,檢測(cè)BRCA1啟動(dòng)子中CpG島的甲基化頻率,比較在不同類型的乳腺癌中甲基化率的差異,探討乳腺癌易感基因BRCA1啟動(dòng)子甲基化和散發(fā)性乳腺癌的臨床特點(diǎn)之間的關(guān)系,并為其預(yù)后提供指導(dǎo)作用。方法:1實(shí)驗(yàn)對(duì)象隨機(jī)選擇河北醫(yī)科大學(xué)第四醫(yī)院乳腺中心2014年4月-2015年3月乳腺癌患者79例,均為女性,年齡處于27~81歲,中位年齡為53歲。患者術(shù)前均經(jīng)空心針穿刺病理證實(shí)為乳腺癌,且未行放療、化療及內(nèi)分泌治療。無乳腺癌家族史,無既往其他惡性腫瘤病史。根據(jù)2013年6月美國(guó)臨床腫瘤協(xié)會(huì)(American Society of Clinical Oncology,ASCO)、美國(guó)病理醫(yī)師學(xué)院(College of American Pathologists,CAP)頒布的乳腺癌雌激素受體(Estrogen receptor,ER)、孕激素受體(Progesterone receptor,PR)及Her2蛋白免疫組織化學(xué)檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn),按照St.Gallen2013年專家共識(shí)及免疫組化結(jié)果,將79例患者分為四個(gè)亞型:(1)Luminal A型乳腺癌22例,指ER/PR陽(yáng)性且PR高表達(dá)(≥20%)、Her2陰性、Ki-67低表達(dá)(14%)的乳腺癌;(2)Luminal B型乳腺癌19例,指ER/PR陽(yáng)性,若Her2陰性時(shí)Ki-67高表達(dá)或PR低表達(dá),若Her2陽(yáng)性時(shí)Ki-67可任何狀態(tài)的乳腺癌;(3)Her2陽(yáng)性型乳腺癌18例,指Her2陽(yáng)性,ER、PR皆為陰性的乳腺癌;(4)三陰性乳腺癌20例,指ER、PR均為陰性,無Her2蛋白過表達(dá)或基因擴(kuò)增的乳腺癌。并且詳細(xì)記錄臨床病理資料。2實(shí)驗(yàn)過程采用組織DNA提取試劑盒提取DNA,并行亞硫酸氫鹽處理DNA,則未甲基化的胞嘧啶被轉(zhuǎn)化為尿嘧啶,而甲基化的胞嘧啶不變,隨后以5'-TATTTTTGTGGGGTGAATTTAATATG-3'為上游引物,5'-CCCTCAACC CCAATATTTATTATTT-3'為下游引物,進(jìn)行PCR擴(kuò)增BRCA1啟動(dòng)子CpG島的目的序列,長(zhǎng)為195bp,在擴(kuò)增過程中尿嘧啶全部轉(zhuǎn)化為胸腺嘧啶,將PCR產(chǎn)物克隆至T載體后提取質(zhì)粒送測(cè)序公司進(jìn)行測(cè)序,即亞硫酸氫鹽測(cè)序法(Bisulfite sequencing PCR,BSP)。同時(shí)在病理科用該79名患者的乳腺癌組織石蠟標(biāo)本,行免疫組織化學(xué)染色檢測(cè)。3統(tǒng)計(jì)分析采用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理,檢驗(yàn)水準(zhǔn)為0.05。對(duì)計(jì)量資料采用均值±標(biāo)準(zhǔn)差((?)±s)表示,對(duì)計(jì)數(shù)資料采用n(%)表示。計(jì)數(shù)資料統(tǒng)計(jì)采用卡方檢驗(yàn)(X~2)。因?yàn)楦鹘M的甲基化率不符合正態(tài)分布,采用中位數(shù)(四分位數(shù)間距)描述,兩組間的比較采用Kruskal-Wallis秩和檢驗(yàn),多組間的比較采用Mann-Whitney U秩和檢驗(yàn)。結(jié)果:1乳腺癌各分子亞型臨床生物學(xué)特性的比較實(shí)驗(yàn)中各亞型患者的年齡、T分期(腫瘤大小)、N分期(淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移個(gè)數(shù))、TNM分期、病理類型及組織學(xué)分級(jí)經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)(卡方檢驗(yàn))分析:在病理類型方面,三陰型和其他分子亞型(Luminal A型,Luminal B型,Her2陽(yáng)性型)比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(分別為X~2=10.462,P=0.0150.05;X~2=10.181,P=0.0170.05;X~2=7.110,P=0.0290.05),三陰型主要以乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌和髓樣癌為主,其他分子亞型主要為浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌。在組織學(xué)分級(jí)方面,(1)Luminal A型和其他分子亞型(Luminal B型,Her2陽(yáng)性型,三陰型)比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(分別為X~2=7.819,P=0.0200.05;X~2=24.130,P=0.0000.05;X~2=15.724,P=0.0000.05),Luminal A型主要為II級(jí),其他分子亞型主要為III級(jí);(2)Luminal B型和Her2陽(yáng)性型比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(X~2=7.441,P=0.0060.05),Luminal B型主要為II級(jí)和III級(jí),Her2陽(yáng)性型主要為III級(jí)。其他分組的指標(biāo)均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P均0.05)。2整體12個(gè)位點(diǎn)的甲基化情況的描述經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,12個(gè)位點(diǎn)的甲基化頻率最高的為位點(diǎn)-842和位點(diǎn)-782,都為65.8%,說明這兩個(gè)位點(diǎn)甲基化狀態(tài)較常見,最低的為位點(diǎn)-742,為10.1%,說明該位點(diǎn)甲基化狀態(tài)較少見。3乳腺癌各分子亞型的12個(gè)位點(diǎn)的甲基化概率的差異性比較經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,(1)對(duì)于CpG位點(diǎn)-881的甲基化率,Luminal B型分別高于三陰型和Her2陽(yáng)性型(X~2=8.046,P=0.0050.05;X~2=4.937,P=0.0260.05);(2)對(duì)于CpG位點(diǎn)-764的甲基化率,三陰型高于Luminal A型(X~2=8.066,P=0.0050.05);(3)對(duì)于CpG位點(diǎn)-742的甲基化率,三陰型分別高于Luminal A型和Luminal B型(X~2=7.700,P=0.0060.05;X~2=6.736,P=0.0090.05);(4)其他位點(diǎn)在各分子分型中的甲基化率均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P均0.05)。4不同分子亞型總體甲基化率的差異性比較經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,四個(gè)亞型的總體甲基化率均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P=0.9540.05)。5三陰型和其他分子亞型(Luminal A型+Luminal B型+Her2陽(yáng)性型)的總體甲基化率的差異性比較經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,三陰型和其他分子亞型的總體甲基化率無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P=0.6420.05)。6各組或各樣本甲基化率與臨床生物學(xué)特性之間的關(guān)系或趨勢(shì)經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,不同臨床資料分組的患者的總體甲基化率無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P均0.05),說明甲基化情況與上述臨床資料無關(guān)聯(lián)。結(jié)論:1 BRCA1啟動(dòng)子CpG位點(diǎn)-842和位點(diǎn)-782的甲基化可能與散發(fā)性乳腺癌的發(fā)生相關(guān)。三陰性乳腺癌中CpG位點(diǎn)-764和位點(diǎn)-742的甲基化率均高于Luminal A型乳腺癌,三陰性乳腺癌中CpG位點(diǎn)-742的甲基化率高于Luminal B型乳腺癌。CpG位點(diǎn)-764和位點(diǎn)-742可能與散發(fā)性三陰性乳腺癌的發(fā)生相關(guān),需進(jìn)一步研究。2散發(fā)性三陰性乳腺癌患者中BRCA1基因啟動(dòng)子(距轉(zhuǎn)錄起始點(diǎn)-908~-714的基因序列)的甲基化率與其他分型的散發(fā)性乳腺癌(Luminal A型、Luminal B型、Her2陽(yáng)性型)甲基化率無明顯差別。3散發(fā)性乳腺癌BRCA1啟動(dòng)子的甲基化率與患者的年齡、腫瘤大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期、病理類型及組織學(xué)分級(jí)無明顯關(guān)聯(lián)。
【關(guān)鍵詞】：DNA甲基化 BSP BRCA1 基因測(cè)序 散發(fā)性乳腺癌 三陰性乳腺癌
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R737.9
【目錄】：

• 中文摘要4-8
• 英文摘要8-13
• 英文縮寫13-14
• 前言14-16
• 材料與方法16-26
• 結(jié)果26-28
• 附圖28-33
• 附表33-40
• 討論40-44
• 結(jié)論44-45
• 參考文獻(xiàn)45-47
• 綜述 BRCA1與乳腺癌相關(guān)的研究進(jìn)展47-57
• 參考文獻(xiàn)54-57
• 致謝57-58
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷58

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前6條

1 王烈亮;葉長(zhǎng)生;劉民鋒;謝小萌;;ER、PR和HER-2在乳腺髓樣癌中的表達(dá)及其臨床意義[J];廣東醫(yī)學(xué);2010年24期

2 任婕;魏敏杰;金鋒;楊棟;林哲珠;馬文峰;金萬(wàn)寶;;散發(fā)性乳腺癌組織中BRCA1基因啟動(dòng)子甲基化與蛋白表達(dá)的相關(guān)性[J];中華腫瘤防治雜志;2007年03期

3 馮景,陶建蜀,郭建華,付萍,周有利;BRCA1基因啟動(dòng)子異常甲基化與散發(fā)性乳腺癌的關(guān)系[J];中國(guó)老年學(xué)雜志;2005年11期

4 朱益民,來茂德;啟動(dòng)子CpGs位點(diǎn)甲基化所致BRCA1基因轉(zhuǎn)錄抑制作用的位點(diǎn)特異性[J];實(shí)用腫瘤雜志;2003年06期

5 李云青,張思仲,肖翠英,趙揚(yáng)冰;乳腺癌患者BRCA1基因啟動(dòng)子區(qū)甲基化模式的初步研究[J];癌癥;2001年10期

6 李文鳳;胡震;柳曉義;張斌;曹明智;王永勝;趙林;劉雁冰;袁文濤;沈鎮(zhèn)宙;黃薇;邵志敏;;中國(guó)早發(fā)性乳腺癌患者中BRCA1基因突變分析[J];中華醫(yī)學(xué)遺傳學(xué)雜志;2007年05期

，

本文編號(hào)：643931