本文關鍵詞：Bcl-2、Twist1在舌鱗狀細胞癌中的表達及其調控上皮間質轉化的研究

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【摘要】：目的舌鱗癌是頭頸部常見的惡性腫瘤,中晚期舌鱗癌往往侵犯瘤周軟組織,并伴有頸部淋巴結或遠處轉移,研究顯示復發(fā)和轉移是影響舌鱗癌預后的重要因素。近年來盡管以手術為主的綜合治療有了長足的發(fā)展,但是其5年生存率仍然徘徊在50%左右,難以得到有效提高。因此中晚期舌鱗癌仍是頭頸部惡性腫瘤領域的難治性疾病,闡明其發(fā)生、轉移機理,尋找新的治療手段日益受到重視。研究顯示Bcl-2、Twist1、EMT在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展特別是侵襲轉移中發(fā)揮著重要作用,但Bcl-2與Twist1是否相互協(xié)同通過EMT參與舌鱗癌侵襲轉移的機制探討甚少。本研究旨在探討B(tài)cl-2、Twist1在舌鱗癌中的表達與舌鱗癌臨床病理特征間的相關性及其對EMT的調控。方法1.免疫組化:收集標本:實驗組為82例臨床舌鱗癌手術標本,對照組為24例癌旁組織;通過免疫組織化學染色法檢測舌鱗癌標本中Bcl-2、Twist1、神經(jīng)鈣黏素、波形蛋白、鈣黏著蛋白表達;χ2檢驗或Fisher確切檢驗分析分析舌鱗癌臨床病理特征與Bcl-2、Twist1及神經(jīng)鈣黏素、波形蛋白、鈣黏著蛋白間的關系。應用SPSS 16.0統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計學分析,計數(shù)資料用χ2或Fisher確切概率法及Spearman相關性分析行統(tǒng)計學處理。2.蛋白質印跡法檢測Bcl-2、Twist1、EMT相關因子表達情況;通過免疫共沉淀法檢測Bcl-2、Twist1的相互相用情況;免疫熒光方法檢測Bcl-2、Twist1的定位情況。結果1.免疫組織化學結果:Bcl-2、Twist1及EMT相關因子在舌鱗癌中的表達與臨床病理間的相關性:在細胞核膜上發(fā)現(xiàn)Bcl-2陽性表達,Twist1陽性表達定位于胞核,波形蛋白陽性表達定位于細胞質,神經(jīng)鈣黏素、鈣黏著蛋白陽性表達定位于細胞膜,少數(shù)表達于細胞質。82例舌鱗癌組織中46例Twist1呈陽性表達,24例癌旁組織中4例Twist1呈陽性表達,Twist1在舌鱗癌組織中表達明顯高于癌旁組織(P=0.001)。Bcl-2高表達見于48例舌鱗癌組織和6例癌旁組織,Bcl-2在舌鱗癌組織與癌旁組織的表達有差異同樣具有統(tǒng)計學意義(p=0.005)。Bcl-2、Twist1、神經(jīng)鈣黏素、波形蛋白在中低分化組和淋巴結轉移組的表達均顯著高于高分化組和非淋巴結轉移組(Bcl-2:P=0.040和P=0.012;Twist1:P=0.013和P=0.003;神經(jīng)鈣粘素:P=0.014和P=0.044;波形蛋白:P=0.041和P=0.012),而鈣黏著蛋白在高分化組及非淋巴結轉移組表達高于中低分化組及淋巴結轉移組(P0.05)。Bcl-2、Twist1、神經(jīng)鈣黏素、波形蛋白、鈣黏著蛋白在患者不同性別,年齡,腫瘤T分期無統(tǒng)計學意義,Bcl-2、Twist1與EMT相關因子進行相關性分析得出,Bcl-2表達與Twist1、神經(jīng)鈣黏素、波形蛋白呈正相關,而與鈣黏著蛋白的表達呈負相關;Twist1表達與Bcl-2、神經(jīng)鈣黏素、波形蛋白表達呈正相關,與鈣黏著蛋白的表達呈負相關。2.體外實驗部分:蛋白質印跡法檢測舌鱗癌TB3.1細胞系中Bcl-2、Twist1、EMT相關因子表達情況:Bcl-2、Twist1、神經(jīng)鈣黏素及波形蛋白隨乏氧時間延長表達明顯上調,而鈣黏著素明顯下調。免疫共沉淀法檢測Bcl-2、Twist1的相互作用情況,結果顯示:正常和乏氧情況下均見Bcl-2抗體沉降的細胞裂解產(chǎn)物中Twist1陽性,Twist1抗體沉降細胞裂解產(chǎn)物反向驗證同樣出現(xiàn)Bcl-2陽性。免疫熒光法檢測Bcl-2、Twist1蛋白表達情況:乏氧后Bcl-2、Twist1、明顯上調并存在定位重合現(xiàn)象。結論1.Bcl-2、Twist1在舌鱗癌組織中呈高表達,在癌旁組織中呈低表達。結合臨床病理資料分析發(fā)現(xiàn)組織分化程度、淋巴結轉移有統(tǒng)計學意義,說明舌鱗癌中Bcl-2、Twist1的異常表達可以促進淋巴結轉移,導致腫瘤異型性增加,進而導致腫瘤惡性程度增加。這一切預示著檢測Bcl-2、Twist1蛋白的表達水平可能作為預測腫瘤淋巴轉移能力參考指標,Bcl-2、Twist1可以作為腫瘤的分子標簽,具有重要的臨床意義。2.神經(jīng)鈣黏素、波形蛋白、鈣黏著蛋白等EMT相關標志性蛋白在舌鱗癌淋巴結轉移組和非轉移組中的表達有顯著差異,證明EMT能促進淋巴結轉移,并在舌鱗癌中這一現(xiàn)象廣泛存在。Bcl-2、Twist1、神經(jīng)鈣黏素、波形蛋白在中低分化組和淋巴結轉移組的表達均顯著高于高分化組和非淋巴結轉移組,而在高分化組及非淋巴結轉移組發(fā)現(xiàn)鈣黏著蛋白呈現(xiàn)高表達,明顯高于中低分化組及淋巴結轉移組,說明Bcl-2、Twist1與EMT間有某種相關性。綜上所述我們推測Bcl-2、Twist1通過調控EMT進而影響腫瘤的發(fā)生發(fā)展。3.蛋白質印跡法檢測Bcl-2、Twist1、EMT相關因子表達情況:Bcl-2、Twist1、神經(jīng)鈣黏素及波形蛋白隨乏氧時間延長表達明顯上調,而鈣黏著素明顯下調。證明了Bcl-2、Twist1在體外實驗中高表達并與EMT相關蛋白的表達具有相關性,進一步驗證了體內實驗的結果。免疫共沉淀法檢測Bcl-2、Twist1的相互相用情況,結果顯示:正常和乏氧情況下均見Bcl-2抗體沉降的細胞裂解產(chǎn)物中Twist1陽性,Twist1抗體沉降細胞裂解產(chǎn)物反向驗證同樣出現(xiàn)Bcl-2陽性。通過免疫熒光法檢測Bcl-2、Twist1蛋白表達情況:乏氧后Bcl-2、Twist1、明顯上調并存在定位重合現(xiàn)象。由此可見,Bcl-2、Twist1在舌鱗癌細胞內存在直接相互作用,即二者形成Bcl-2/Twist1復合體,這些研究提示,舌鱗癌中Bcl-2可能在乏氧情況下穿梭入細胞核與Twist1結合形成復合體進而促進舌鱗癌中EMT的發(fā)生。
【關鍵詞】：舌鱗癌 Bcl-2 Twist1 上皮間質轉化 淋巴轉移
【學位授予單位】：天津醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R739.86
【目錄】：

• 中文摘要4-7
• Abstract7-13
• 縮略語/符號說明13-14
• 前言14-18
• 研究現(xiàn)狀、成果14-17
• 研究目的、方法17-18
• 一、Bcl-2、Twist1及EMT相關因子在舌鱗癌中的表達及臨床意義18-30
• 1.1 對象和方法18-20
• 1.1.1 組織標本及臨床資料18
• 1.1.2 主要試劑18
• 1.1.3 實驗儀器18
• 1.1.4 實驗方法18-20
• 1.1.5 統(tǒng)計方法20
• 1.2 結果20-26
• 1.2.1twist1、bcl-2 及EMT相關因子在舌鱗癌中的表達20-21
• 1.2.2twist1、bcl-2 及EMT相關蛋白的相關性分析21-26
• 1.3 討論26-28
• 1.4 小結28-30
• 二、Bcl-2、Twist1及EMT相關因子在舌鱗癌細胞系中的表達及Bcl-2/Twsit1復合體的形成30-42
• 2.1 對象和方法30-31
• 2.2 實驗方法31-36
• 2.3 結果36-39
• 2.4 討論39-40
• 2.5 小結40-42
• 全文結論42-43
• 參考文獻43-50
• 發(fā)表論文和參加科研情況說明50-51
• 綜述 Twist1在腫瘤EMT中的研究進展51-65
• 綜述參考文獻58-65
• 致謝65-66
• 個人簡歷66

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本文編號：642301