本文關(guān)鍵詞：Bcl-2、Twist1在舌鱗狀細(xì)胞癌中的表達(dá)及其調(diào)控上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化的研究

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【摘要】：目的舌鱗癌是頭頸部常見的惡性腫瘤,中晚期舌鱗癌往往侵犯瘤周軟組織,并伴有頸部淋巴結(jié)或遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移,研究顯示復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移是影響舌鱗癌預(yù)后的重要因素。近年來盡管以手術(shù)為主的綜合治療有了長足的發(fā)展,但是其5年生存率仍然徘徊在50%左右,難以得到有效提高。因此中晚期舌鱗癌仍是頭頸部惡性腫瘤領(lǐng)域的難治性疾病,闡明其發(fā)生、轉(zhuǎn)移機(jī)理,尋找新的治療手段日益受到重視。研究顯示Bcl-2、Twist1、EMT在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展特別是侵襲轉(zhuǎn)移中發(fā)揮著重要作用,但Bcl-2與Twist1是否相互協(xié)同通過EMT參與舌鱗癌侵襲轉(zhuǎn)移的機(jī)制探討甚少。本研究旨在探討B(tài)cl-2、Twist1在舌鱗癌中的表達(dá)與舌鱗癌臨床病理特征間的相關(guān)性及其對EMT的調(diào)控。方法1.免疫組化:收集標(biāo)本:實(shí)驗(yàn)組為82例臨床舌鱗癌手術(shù)標(biāo)本,對照組為24例癌旁組織;通過免疫組織化學(xué)染色法檢測舌鱗癌標(biāo)本中Bcl-2、Twist1、神經(jīng)鈣黏素、波形蛋白、鈣黏著蛋白表達(dá);χ2檢驗(yàn)或Fisher確切檢驗(yàn)分析分析舌鱗癌臨床病理特征與Bcl-2、Twist1及神經(jīng)鈣黏素、波形蛋白、鈣黏著蛋白間的關(guān)系。應(yīng)用SPSS 16.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,計(jì)數(shù)資料用χ2或Fisher確切概率法及Spearman相關(guān)性分析行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。2.蛋白質(zhì)印跡法檢測Bcl-2、Twist1、EMT相關(guān)因子表達(dá)情況;通過免疫共沉淀法檢測Bcl-2、Twist1的相互相用情況;免疫熒光方法檢測Bcl-2、Twist1的定位情況。結(jié)果1.免疫組織化學(xué)結(jié)果:Bcl-2、Twist1及EMT相關(guān)因子在舌鱗癌中的表達(dá)與臨床病理間的相關(guān)性:在細(xì)胞核膜上發(fā)現(xiàn)Bcl-2陽性表達(dá),Twist1陽性表達(dá)定位于胞核,波形蛋白陽性表達(dá)定位于細(xì)胞質(zhì),神經(jīng)鈣黏素、鈣黏著蛋白陽性表達(dá)定位于細(xì)胞膜,少數(shù)表達(dá)于細(xì)胞質(zhì)。82例舌鱗癌組織中46例Twist1呈陽性表達(dá),24例癌旁組織中4例Twist1呈陽性表達(dá),Twist1在舌鱗癌組織中表達(dá)明顯高于癌旁組織(P=0.001)。Bcl-2高表達(dá)見于48例舌鱗癌組織和6例癌旁組織,Bcl-2在舌鱗癌組織與癌旁組織的表達(dá)有差異同樣具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p=0.005)。Bcl-2、Twist1、神經(jīng)鈣黏素、波形蛋白在中低分化組和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組的表達(dá)均顯著高于高分化組和非淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組(Bcl-2:P=0.040和P=0.012;Twist1:P=0.013和P=0.003;神經(jīng)鈣粘素:P=0.014和P=0.044;波形蛋白:P=0.041和P=0.012),而鈣黏著蛋白在高分化組及非淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組表達(dá)高于中低分化組及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組(P0.05)。Bcl-2、Twist1、神經(jīng)鈣黏素、波形蛋白、鈣黏著蛋白在患者不同性別,年齡,腫瘤T分期無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,Bcl-2、Twist1與EMT相關(guān)因子進(jìn)行相關(guān)性分析得出,Bcl-2表達(dá)與Twist1、神經(jīng)鈣黏素、波形蛋白呈正相關(guān),而與鈣黏著蛋白的表達(dá)呈負(fù)相關(guān);Twist1表達(dá)與Bcl-2、神經(jīng)鈣黏素、波形蛋白表達(dá)呈正相關(guān),與鈣黏著蛋白的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)。2.體外實(shí)驗(yàn)部分:蛋白質(zhì)印跡法檢測舌鱗癌TB3.1細(xì)胞系中Bcl-2、Twist1、EMT相關(guān)因子表達(dá)情況:Bcl-2、Twist1、神經(jīng)鈣黏素及波形蛋白隨乏氧時(shí)間延長表達(dá)明顯上調(diào),而鈣黏著素明顯下調(diào)。免疫共沉淀法檢測Bcl-2、Twist1的相互作用情況,結(jié)果顯示:正常和乏氧情況下均見Bcl-2抗體沉降的細(xì)胞裂解產(chǎn)物中Twist1陽性,Twist1抗體沉降細(xì)胞裂解產(chǎn)物反向驗(yàn)證同樣出現(xiàn)Bcl-2陽性。免疫熒光法檢測Bcl-2、Twist1蛋白表達(dá)情況:乏氧后Bcl-2、Twist1、明顯上調(diào)并存在定位重合現(xiàn)象。結(jié)論1.Bcl-2、Twist1在舌鱗癌組織中呈高表達(dá),在癌旁組織中呈低表達(dá)。結(jié)合臨床病理資料分析發(fā)現(xiàn)組織分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,說明舌鱗癌中Bcl-2、Twist1的異常表達(dá)可以促進(jìn)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移,導(dǎo)致腫瘤異型性增加,進(jìn)而導(dǎo)致腫瘤惡性程度增加。這一切預(yù)示著檢測Bcl-2、Twist1蛋白的表達(dá)水平可能作為預(yù)測腫瘤淋巴轉(zhuǎn)移能力參考指標(biāo),Bcl-2、Twist1可以作為腫瘤的分子標(biāo)簽,具有重要的臨床意義。2.神經(jīng)鈣黏素、波形蛋白、鈣黏著蛋白等EMT相關(guān)標(biāo)志性蛋白在舌鱗癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組和非轉(zhuǎn)移組中的表達(dá)有顯著差異,證明EMT能促進(jìn)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移,并在舌鱗癌中這一現(xiàn)象廣泛存在。Bcl-2、Twist1、神經(jīng)鈣黏素、波形蛋白在中低分化組和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組的表達(dá)均顯著高于高分化組和非淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組,而在高分化組及非淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組發(fā)現(xiàn)鈣黏著蛋白呈現(xiàn)高表達(dá),明顯高于中低分化組及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組,說明Bcl-2、Twist1與EMT間有某種相關(guān)性。綜上所述我們推測Bcl-2、Twist1通過調(diào)控EMT進(jìn)而影響腫瘤的發(fā)生發(fā)展。3.蛋白質(zhì)印跡法檢測Bcl-2、Twist1、EMT相關(guān)因子表達(dá)情況:Bcl-2、Twist1、神經(jīng)鈣黏素及波形蛋白隨乏氧時(shí)間延長表達(dá)明顯上調(diào),而鈣黏著素明顯下調(diào)。證明了Bcl-2、Twist1在體外實(shí)驗(yàn)中高表達(dá)并與EMT相關(guān)蛋白的表達(dá)具有相關(guān)性,進(jìn)一步驗(yàn)證了體內(nèi)實(shí)驗(yàn)的結(jié)果。免疫共沉淀法檢測Bcl-2、Twist1的相互相用情況,結(jié)果顯示:正常和乏氧情況下均見Bcl-2抗體沉降的細(xì)胞裂解產(chǎn)物中Twist1陽性,Twist1抗體沉降細(xì)胞裂解產(chǎn)物反向驗(yàn)證同樣出現(xiàn)Bcl-2陽性。通過免疫熒光法檢測Bcl-2、Twist1蛋白表達(dá)情況:乏氧后Bcl-2、Twist1、明顯上調(diào)并存在定位重合現(xiàn)象。由此可見,Bcl-2、Twist1在舌鱗癌細(xì)胞內(nèi)存在直接相互作用,即二者形成Bcl-2/Twist1復(fù)合體,這些研究提示,舌鱗癌中Bcl-2可能在乏氧情況下穿梭入細(xì)胞核與Twist1結(jié)合形成復(fù)合體進(jìn)而促進(jìn)舌鱗癌中EMT的發(fā)生。
【關(guān)鍵詞】：舌鱗癌 Bcl-2 Twist1 上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化 淋巴轉(zhuǎn)移
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R739.86
【目錄】：

• 中文摘要4-7
• Abstract7-13
• 縮略語/符號說明13-14
• 前言14-18
• 研究現(xiàn)狀、成果14-17
• 研究目的、方法17-18
• 一、Bcl-2、Twist1及EMT相關(guān)因子在舌鱗癌中的表達(dá)及臨床意義18-30
• 1.1 對象和方法18-20
• 1.1.1 組織標(biāo)本及臨床資料18
• 1.1.2 主要試劑18
• 1.1.3 實(shí)驗(yàn)儀器18
• 1.1.4 實(shí)驗(yàn)方法18-20
• 1.1.5 統(tǒng)計(jì)方法20
• 1.2 結(jié)果20-26
• 1.2.1twist1、bcl-2 及EMT相關(guān)因子在舌鱗癌中的表達(dá)20-21
• 1.2.2twist1、bcl-2 及EMT相關(guān)蛋白的相關(guān)性分析21-26
• 1.3 討論26-28
• 1.4 小結(jié)28-30
• 二、Bcl-2、Twist1及EMT相關(guān)因子在舌鱗癌細(xì)胞系中的表達(dá)及Bcl-2/Twsit1復(fù)合體的形成30-42
• 2.1 對象和方法30-31
• 2.2 實(shí)驗(yàn)方法31-36
• 2.3 結(jié)果36-39
• 2.4 討論39-40
• 2.5 小結(jié)40-42
• 全文結(jié)論42-43
• 參考文獻(xiàn)43-50
• 發(fā)表論文和參加科研情況說明50-51
• 綜述 Twist1在腫瘤EMT中的研究進(jìn)展51-65
• 綜述參考文獻(xiàn)58-65
• 致謝65-66
• 個(gè)人簡歷66

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本文編號：642300