本文關(guān)鍵詞：B7-H4的異常表達在肝內(nèi)膽管癌發(fā)病機制中的作用研究

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【摘要】：[背景與目的]肝內(nèi)膽管細胞癌(ICC)分屬腺癌,區(qū)別于肝門部膽管癌,其來源于二級膽管及其分支的上皮組織。近年來,多項研究提示其細胞表面標志物及其他生物學特征與肝門部膽管癌明顯不同。ICC是常見的肝臟原發(fā)性惡性腫瘤之一,ICC約占肝臟原發(fā)惡性腫瘤的10%-15%。發(fā)病率為肝臟原發(fā)惡性腫瘤的第2位,近年來其發(fā)病率逐年呈上升趨向。ICC早期無明顯臨床癥狀,癥狀隱匿,早期難以發(fā)現(xiàn),多數(shù)患者發(fā)現(xiàn)時己失去手術(shù)時機,因此對ICC的早期診斷和及時治療提出了更高的要求。B7-H4是最近發(fā)現(xiàn)的協(xié)同刺激因子B7家族新成員,研究表明,B7-H4在一些腫瘤組織上高表達,并與臨床分期和病理分級相關(guān)。本課題擬重點研究B7-H4介導(dǎo)ICC細胞惡性轉(zhuǎn)化發(fā)展的病理學機制,探討B(tài)7-H4是否直接影響腫瘤細胞的生物學活性,從而進一步闡明B7-H4在ICC病理過程中的作用,為臨床ICC靶向治療提供理論依據(jù)及實驗基礎(chǔ)。[方法]組織層面：1.利用B7-H4抗體通過免疫組化技術(shù)分析B7-H4及其可能的通路分子在肝內(nèi)膽管癌組織中的表達。2.WB法檢測癌組織及癌旁組織中的B7-H4表達。細胞層面篩選篩選B7-H4高表達的ICC細胞系……QBC939、RBE轉(zhuǎn)染慢病毒(shRNA-B7-H4)轉(zhuǎn)染ICC細胞系QBC939、RBE,用RT-PCR及WB、細胞免疫熒光法驗證B7-H4 mRNA及蛋白的表達情況。細胞功能試驗體外細胞實驗：1.細胞形態(tài)學：顯微鏡觀察轉(zhuǎn)染前后的細胞形態(tài)學變化2.細胞功能學改變：2.1：CCK-8法測細胞增殖成長變化；2.2：劃痕愈合試驗測查細胞遷移能力變化,Transwell法試驗檢測細胞侵襲能力改變；2.3：WB法檢測轉(zhuǎn)染前后的B7-H4及E-cad、Snail、Vimentin、Erk1/2、AKT等)細胞信號分子的改變；2.4：流式細胞術(shù)——Annexin V-FITC/PI雙染色法檢測細胞凋亡;2.5：細胞免疫熒光法檢測細胞信號分子(如E-cad、Snail、Vimentin、Erkl/2、AKT等)的改變。[結(jié)果]1.B7-H4在ICC組織(或細胞系)中的表達顯著高于癌旁組織(或細胞系)且其高表達的分度與腫瘤病理分級及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等密切相關(guān)。2.設(shè)計合成的shRNA-B7-H4三條序列中有兩條可顯著抑制B7-H4基因的表達。3.體外實驗發(fā)現(xiàn)：3.1經(jīng)shRNA介導(dǎo)B7-H4表達沉默后,QBC939、RBE細胞連接緊密、折光性減弱、偽足明顯減少。伴上皮表型標記分子E-cad表達上調(diào),間質(zhì)表型標記分子Vimentin表達下調(diào),提示B7-H4可參與ICC細胞形態(tài)改變。3.2 B7-H4轉(zhuǎn)染后的ICC細胞在細胞增殖、劃痕遷移及Transwell侵襲能力減弱,凋亡增加。3.3 B7-H4轉(zhuǎn)染后的ICC細胞Caspases 3 (active)、Bax表達上調(diào)(凋亡促進因子),Bcl-2表達則下調(diào),其在細胞凋亡過程中主要起抑制作用,并伴有Erkl/2磷酸化程度的下降。[結(jié)論]B7-H4在ICC中呈現(xiàn)高表達,與腫瘤分期、病理分級及淋巴轉(zhuǎn)移呈正相關(guān),提示該分子可能參與ICC病理進程。ICC靶向慢病毒抑制(shRNA-B7H4)參與了肝內(nèi)膽管上皮的間充質(zhì)轉(zhuǎn)化,即EMT過程。同時也可促使Caspases-3、Bc1-2等的激活,并抑制Bax的表達及Erk1/2的磷酸化,同時促使ICC細胞凋亡。上述結(jié)果均提示其在ICC發(fā)病中的作用。B7-H4的高表達參與了ICC的病理進程,靶向B7-H4抑制可在一定程度上影響ICC細胞的生物學行為,有望成為ICC新的潛在治療靶點。
【關(guān)鍵詞】：B7-H4 肝內(nèi)膽管細胞癌 上皮細胞間充質(zhì)轉(zhuǎn)化 凋亡 通路
【學位授予單位】：昆明醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R735.8
【目錄】：

• 縮略詞表(以字母順序排列)5-7
• 中文摘要7-10
• 英文摘要10-14
• 前言14-17
• 第一部分 B7-H4在肝內(nèi)膽管癌中的表達特征17-29
• 材料與方法17-24
• 結(jié)果24-27
• 討論27-28
• 結(jié)論28-29
• 第二部分 B7-H4增強ICC細胞致瘤性及其分子通路29-44
• 材料與方法29-34
• 結(jié)果34-43
• 討論43-44
• 結(jié)論44
• 參考文獻44-51
• 綜述51-59
• 參考文獻54-59
• 攻讀學位期間獲得的學術(shù)成果59-60
• 致謝60-61

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1 傅曉輝,湯朝暉,宗明,楊廣順,姚曉平,吳孟超;肝內(nèi)膽管細胞癌的影像學特點分析[J];肝膽胰外科雜志;2005年01期

2 梁富堅;;肝內(nèi)膽管細胞癌的螺旋CT三期增強特征及其診斷價值[J];醫(yī)藥產(chǎn)業(yè)資訊;2006年15期

3 王曉明;胡士杰;吳健雄;榮維淇;王黎明;;41例肝內(nèi)膽管細胞癌的臨床特點及其預(yù)后觀察[J];中國腫瘤臨床;2006年15期

4 楊忠誠;劉金貴;胡達;;肝內(nèi)膽管細胞癌的影像學表現(xiàn)[J];湘南學院學報;2006年03期

5 胡士杰;吳健雄;榮維淇;王黎明;邵永孚;;28例肝內(nèi)膽管細胞癌手術(shù)治療分析[J];中國腫瘤臨床與康復(fù);2006年05期

6 郭勇;林革;羅旺啟;吳茂鑄;;肝內(nèi)膽管細胞癌的多排螺旋CT診斷[J];現(xiàn)代中西醫(yī)結(jié)合雜志;2007年09期

7 胡士杰;吳健雄;榮維淇;王黎明;邵永孚;;37例肝內(nèi)膽管細胞癌手術(shù)治療分析[J];肝膽外科雜志;2007年04期

8 莊禮釗;張敏杰;倪勇;程書榜;;肝內(nèi)膽管細胞癌的診斷與治療[J];實用臨床醫(yī)學;2007年07期

9 閆劍鋒;馮國活;彭永軍;;肝內(nèi)膽管細胞癌的螺旋CT表現(xiàn)[J];影像診斷與介入放射學;2007年04期

10 成建萍;;彩色多普勒超聲對21例肝內(nèi)膽管細胞癌的診斷分析[J];蘇州大學學報(醫(yī)學版);2008年03期

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1 李超倫;王文平;丁紅;毛楓;黃備建;;肝內(nèi)膽管細胞癌的實時灰階諧波超聲造影表現(xiàn)[A];中華醫(yī)學會第十次全國超聲醫(yī)學學術(shù)會議論文匯編[C];2009年

2 ;肝內(nèi)膽管細胞癌[A];中國抗癌協(xié)會膽道腫瘤專業(yè)委員會成立大會暨第一屆全國膽道腫瘤學術(shù)會議論文集[C];2009年

3 胡曉燕;吳湖炳;王全師;;~(18)F-FDG PET/CT顯像用于肝細胞癌與肝內(nèi)膽管細胞癌的鑒別診斷[A];中華醫(yī)學會第九次全國核醫(yī)學學術(shù)會議論文摘要匯編[C];2011年

4 姜威;曾昭沖;湯釗猷;樊嘉;周儉;曾蒙蘇;張建英;陳一興;譚云山;;90例伴同步淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的肝內(nèi)膽管細胞癌術(shù)后放療療效分析[A];中華醫(yī)學會放射腫瘤治療學分會六屆二次暨中國抗癌協(xié)會腫瘤放療專業(yè)委員會二屆二次學術(shù)會議論文集[C];2009年

5 陳一興;曾昭沖;湯釗猷;樊嘉;周儉;姜威;陳兵;曾蒙蘇;王建華;;129例不可切除肝內(nèi)膽管細胞癌放療療效分析[A];中華醫(yī)學會放射腫瘤治療學分會六屆二次暨中國抗癌協(xié)會腫瘤放療專業(yè)委員會二屆二次學術(shù)會議論文集[C];2009年

6 繆丁丁;高金亭;程新生;王甫譽;鄭永彬;索質(zhì)君;;肝內(nèi)膽管細胞癌的診斷和治療(附12例報告)[A];第十二屆全國肝癌學術(shù)會議論文匯編[C];2009年

7 成建萍;;彩色多普勒超聲對肝內(nèi)膽管細胞癌的診斷[A];中國超聲醫(yī)學工程學會第七屆全國腹部超聲學術(shù)會議學術(shù)論文匯編[C];2007年

8 張法標;方哲平;王愛東;杜學峰;季一鳴;;肝內(nèi)膽管細胞癌臨床病理特點及影響預(yù)后分析[A];2012年浙江省外科學學術(shù)年會論文集[C];2012年

9 李超倫;王文平;丁紅;毛楓;黃備建;;肝內(nèi)膽管細胞癌的實時灰階諧波超聲造影表現(xiàn)[A];第二屆長三角超聲醫(yī)學論壇暨2009年浙江省超聲醫(yī)學學術(shù)年會論文匯編[C];2009年

10 趙齊羽;蔣天安;陳芬;王利英;李琚;鄧壯;;肝內(nèi)膽管細胞癌超聲造影增強模式分析[A];2011年浙江省超聲醫(yī)學學術(shù)年會論文匯編[C];2011年

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1 衣曉峰 金鷗 劉宇;哈醫(yī)大四院新術(shù)式治療肝內(nèi)膽管細胞癌合并瘤內(nèi)出血[N];中國醫(yī)藥報;2014年

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1 劉衡;YB-1與肝內(nèi)膽管細胞癌增殖和多藥耐受性關(guān)系的研究[D];上海交通大學;2014年

2 周華邦;肝內(nèi)膽管細胞癌危險因素及其發(fā)病機制研究[D];第二軍醫(yī)大學;2010年

3 原泉;團塊型肝內(nèi)膽管細胞癌的預(yù)后因素研究[D];第二軍醫(yī)大學;2014年

4 史若愚;分泌型蛋白DKK1在肝內(nèi)膽管細胞癌侵襲轉(zhuǎn)移中的作用及其機制研究[D];復(fù)旦大學;2012年

5 顧方明;IL-17對原發(fā)性肝癌生物學特性的影響及臨床意義研究[D];復(fù)旦大學;2011年

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1 胡曉燕;~(18)F-FDG PET/CT顯像對肝細胞癌與肝內(nèi)膽管細胞癌診斷的比較研究[D];南方醫(yī)科大學;2011年

2 李妍卓;CT能譜成像在診斷鑒別肝內(nèi)膽管細胞癌與肝細胞癌中的臨床應(yīng)用研究[D];第二軍醫(yī)大學;2015年

3 代學楊;~(18)F-FDG PET/CT與動態(tài)增強CT對肝臟占位性病變診斷價值的比較[D];天津醫(yī)科大學;2015年

4 趙鳴;四跨膜蛋白CO-029在肝內(nèi)膽管細胞癌中的表達及臨床價值[D];南華大學;2015年

5 胡凌波;肝內(nèi)膽管細胞癌患者行肝移植的可行性的meta分析和系統(tǒng)評價[D];重慶醫(yī)科大學;2015年

6 趙賢慧;肝內(nèi)膽管細胞癌的預(yù)后影響因素分析[D];廣西醫(yī)科大學;2016年

7 吳超;鈣蛋白酶Capn1促進肝內(nèi)膽管細胞癌轉(zhuǎn)移復(fù)發(fā)的實驗研究[D];揚州大學;2016年

8 謝楠;B7-H4的異常表達在肝內(nèi)膽管癌發(fā)病機制中的作用研究[D];昆明醫(yī)科大學;2016年

9 畢愛紅;肝內(nèi)膽管細胞癌微侵襲灶的病理及相關(guān)臨床因素分析及其用于臨床靶區(qū)確定的意義[D];復(fù)旦大學;2009年

10 毛楓;肝內(nèi)膽管細胞癌的超聲綜合診斷評價[D];復(fù)旦大學;2008年

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