本文關鍵詞：TMEM49在卵巢癌組織中表達的臨床意義及對卵巢癌發(fā)生及轉移中的作用機制

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【摘要】：研究目的在中國,卵巢癌是女性前十大常見腫瘤,在女性生殖系統(tǒng)常見惡性腫瘤中發(fā)病率位居第三,死亡率卻僅次于宮頸癌。原因是卵巢癌發(fā)病隱匿、轉移前常無癥狀,大多數卵巢癌患者確診時即處于癌癥晚期,錯過了最佳的治療時機。因此,尋找卵巢癌特異性相關基因,為卵巢癌的診斷和治療提供新的理論依據,成為卵巢癌早期診療的關鍵。為此,國內外大量研究致力于尋找卵巢癌相關特異性基因。TMEM (Transmembrane Protein,跨膜蛋白)作為膜蛋白的一部分,參與了細胞的信號傳導和增殖分化等,是腫瘤相關基因研究熱點之一。TMEM家族里大部分作為癌基因,如TMEM16a、TMEM17a、TMEM17b等,也有作為抑癌基因發(fā)揮功能,如TMEM100等。TMEM49在不同腫瘤中的作用已有相關文獻報道,但它與卵巢癌之間的關系尚未明確。本研究以TMEM49作為目標基因,應用免疫組織化學的方法進一步研究其在卵巢癌組織與正常卵巢組織中的表達情況,探討其表達的臨床意義。并通過RNA干擾技術研究TMEM49對卵巢癌株系生物學行為的影響,探測其與卵巢癌發(fā)生、發(fā)展、轉移等的相關性,并揭示其在癌癥發(fā)生過程中的分子機制及探討其作為卵巢癌診斷和治療靶點的可能性。研究方法應用免疫組織化學方法檢測卵巢癌組織和正常組織各30例的TMEM49的表達情況。分別采用蛋白免疫印跡方法和實時定量PCR檢測5株卵巢癌細胞系中TMEM49蛋白和mRNA水平的表達,選擇高表達的卵巢癌株系構建TMEM49-ShRNA穩(wěn)定轉染的細胞系,通過細胞增殖實驗、流式周期和凋亡實驗、細胞侵襲粘附實驗等方法分析TMEM49對卵巢癌株系生物學行為的影響。并通過PCR和Western blot方法檢測卵巢癌細胞系中TMEM49基因干擾凋亡通路Caspase3、Bad、Bax及轉移通路MMP2、KLF10、CXCL12等的表達差異。研究結果1.TMEM49在卵巢癌組織中表達率比正常卵巢組織高,差異具有統(tǒng)計學意義(P0.05);2.卵巢癌組織中TMEM49的表達與FIGO分期、組織學分級有關(P0.05)。FIGO分期或組織學等級越高,TMEM49表達陽性率越高；3. TMEM49 ShRNA下調TMEM49的表達可減慢卵巢癌細胞A2780的增殖速度,阻滯細胞G1/S期轉化,誘導其細胞凋亡,并降低侵襲能力和粘附能力,差異均具有統(tǒng)計學意義(P0.05)；4. TMEM49 ShRNA可上調凋亡通路的相關基因如Caspase3、Bad、bax的表達,卻下調轉移通路MMP2、KLF10、CXCL12的表達(P0.05)。研究結論1. TMEM49在卵巢癌中高表達,并與卵巢癌FIGO分期、組織分化程度正相關,這可能與TMEM49高表達參與了卵巢癌的發(fā)生進展有關。2.干擾TMEM49表達可降低卵巢癌細胞的增殖、侵襲和粘附能力,阻滯細胞G1/S期轉化,并誘導細胞凋亡,這表明TMEM49促進卵巢癌的發(fā)生發(fā)展,提示TMEM49可以作為卵巢癌治療的一個潛在基因靶點。3.干擾TMEM49的表達可引起細胞凋亡通路Caspase3、Bad、bax表達的上調,以及下調轉移通路MMP2、KLF10、CXCL12的表達,這提示TMEM49可能是通過抑制細胞凋亡通路及轉移通路來促進卵巢癌的進展。
【關鍵詞】：TMEM49 卵巢癌 增殖 凋亡 侵襲
【學位授予單位】：福建中醫(yī)藥大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R737.31
【目錄】：

• 中文摘要6-8
• Abstract8-11
• 前言11-12
• TMEM49在卵巢癌中的表達及臨床意義12-18
• 1. 實驗材料12-13
• 1.1 研究標本的選擇和收集12
• 1.2 實驗試劑12
• 1.3 主要儀器12-13
• 2. 實驗方法13-14
• 2.1 實驗步驟13
• 2.2 染色結果判讀13
• 2.3 統(tǒng)計學方法13-14
• 3. 實驗結果14-15
• 3.1 TMEM49在卵巢癌及正常卵巢組織的細胞定位及表達情況14
• 3.2 TMEM49在卵巢癌中的表達與臨床病理特征的關系分析14-15
• 4. 討論15-17
• 5. 結論17-18
• 下調TMEM49對卵巢癌細胞生物學行為的影響18-39
• 1. 實驗材料18-21
• 1.1 細胞株與質粒來源18
• 1.2 實驗試劑18-20
• 1.3 主要儀器20-21
• 2. 實驗方法21-27
• 2.1 細胞培養(yǎng)及質粒提取21
• 2.2 構建能夠穩(wěn)定轉染的卵巢癌細胞系21-22
• 2.3 Western-blot法確定TMEM49及相關基因的表達22-23
• 2.4 實時定量PCR檢測mRNA的表達23-25
• 2.5 Cell Counting Kit-8檢測細胞增殖實驗25
• 2.6 流式細胞術檢測細胞周期25-26
• 2.7 Annexin V-FITC/PI雙染法檢測細胞凋亡26
• 2.8 Transwell實驗檢測細胞侵襲能力26-27
• 2.9 細胞粘附實驗檢測細胞粘附能力27
• 2.10 統(tǒng)計學方法27
• 3. 實驗結果27-35
• 3.1 Western-blot法檢測相關蛋白的表達情況27-28
• 3.2 實時定量PCR從mRNA水平檢測TMEM49及相關基因的表達28-31
• 3.3 下調TMEM49表達可抑制卵巢癌細胞的增值31-32
• 3.4 下調TMEM49表達可阻止卵巢癌細胞周期進程32
• 3.5 干擾TMEM49的表達可促進細胞凋亡32-33
• 3.6 干擾TMEM49表達可降低卵巢癌細胞的侵襲及粘附能力33-35
• 4. 討論35-38
• 5. 結論38-39
• 總結39-40
• 參考文獻40-42
• 附錄42-43
• 致謝43-44
• 文獻綜述44-49
• 參考文獻46-49
• 作者簡歷49

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1 鄭麗麗;TMEM49在卵巢癌組織中表達的臨床意義及對卵巢癌發(fā)生及轉移中的作用機制[D];福建中醫(yī)藥大學;2016年

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本文編號：634599