本文關(guān)鍵詞：TMEM49在卵巢癌組織中表達的臨床意義及對卵巢癌發(fā)生及轉(zhuǎn)移中的作用機制

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【摘要】：研究目的在中國,卵巢癌是女性前十大常見腫瘤,在女性生殖系統(tǒng)常見惡性腫瘤中發(fā)病率位居第三,死亡率卻僅次于宮頸癌。原因是卵巢癌發(fā)病隱匿、轉(zhuǎn)移前常無癥狀,大多數(shù)卵巢癌患者確診時即處于癌癥晚期,錯過了最佳的治療時機。因此,尋找卵巢癌特異性相關(guān)基因,為卵巢癌的診斷和治療提供新的理論依據(jù),成為卵巢癌早期診療的關(guān)鍵。為此,國內(nèi)外大量研究致力于尋找卵巢癌相關(guān)特異性基因。TMEM (Transmembrane Protein,跨膜蛋白)作為膜蛋白的一部分,參與了細(xì)胞的信號傳導(dǎo)和增殖分化等,是腫瘤相關(guān)基因研究熱點之一。TMEM家族里大部分作為癌基因,如TMEM16a、TMEM17a、TMEM17b等,也有作為抑癌基因發(fā)揮功能,如TMEM100等。TMEM49在不同腫瘤中的作用已有相關(guān)文獻報道,但它與卵巢癌之間的關(guān)系尚未明確。本研究以TMEM49作為目標(biāo)基因,應(yīng)用免疫組織化學(xué)的方法進一步研究其在卵巢癌組織與正常卵巢組織中的表達情況,探討其表達的臨床意義。并通過RNA干擾技術(shù)研究TMEM49對卵巢癌株系生物學(xué)行為的影響,探測其與卵巢癌發(fā)生、發(fā)展、轉(zhuǎn)移等的相關(guān)性,并揭示其在癌癥發(fā)生過程中的分子機制及探討其作為卵巢癌診斷和治療靶點的可能性。研究方法應(yīng)用免疫組織化學(xué)方法檢測卵巢癌組織和正常組織各30例的TMEM49的表達情況。分別采用蛋白免疫印跡方法和實時定量PCR檢測5株卵巢癌細(xì)胞系中TMEM49蛋白和mRNA水平的表達,選擇高表達的卵巢癌株系構(gòu)建TMEM49-ShRNA穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的細(xì)胞系,通過細(xì)胞增殖實驗、流式周期和凋亡實驗、細(xì)胞侵襲粘附實驗等方法分析TMEM49對卵巢癌株系生物學(xué)行為的影響。并通過PCR和Western blot方法檢測卵巢癌細(xì)胞系中TMEM49基因干擾凋亡通路Caspase3、Bad、Bax及轉(zhuǎn)移通路MMP2、KLF10、CXCL12等的表達差異。研究結(jié)果1.TMEM49在卵巢癌組織中表達率比正常卵巢組織高,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05);2.卵巢癌組織中TMEM49的表達與FIGO分期、組織學(xué)分級有關(guān)(P0.05)。FIGO分期或組織學(xué)等級越高,TMEM49表達陽性率越高；3. TMEM49 ShRNA下調(diào)TMEM49的表達可減慢卵巢癌細(xì)胞A2780的增殖速度,阻滯細(xì)胞G1/S期轉(zhuǎn)化,誘導(dǎo)其細(xì)胞凋亡,并降低侵襲能力和粘附能力,差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)；4. TMEM49 ShRNA可上調(diào)凋亡通路的相關(guān)基因如Caspase3、Bad、bax的表達,卻下調(diào)轉(zhuǎn)移通路MMP2、KLF10、CXCL12的表達(P0.05)。研究結(jié)論1. TMEM49在卵巢癌中高表達,并與卵巢癌FIGO分期、組織分化程度正相關(guān),這可能與TMEM49高表達參與了卵巢癌的發(fā)生進展有關(guān)。2.干擾TMEM49表達可降低卵巢癌細(xì)胞的增殖、侵襲和粘附能力,阻滯細(xì)胞G1/S期轉(zhuǎn)化,并誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡,這表明TMEM49促進卵巢癌的發(fā)生發(fā)展,提示TMEM49可以作為卵巢癌治療的一個潛在基因靶點。3.干擾TMEM49的表達可引起細(xì)胞凋亡通路Caspase3、Bad、bax表達的上調(diào),以及下調(diào)轉(zhuǎn)移通路MMP2、KLF10、CXCL12的表達,這提示TMEM49可能是通過抑制細(xì)胞凋亡通路及轉(zhuǎn)移通路來促進卵巢癌的進展。
【關(guān)鍵詞】：TMEM49 卵巢癌 增殖 凋亡 侵襲
【學(xué)位授予單位】：福建中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R737.31
【目錄】：

• 中文摘要6-8
• Abstract8-11
• 前言11-12
• TMEM49在卵巢癌中的表達及臨床意義12-18
• 1. 實驗材料12-13
• 1.1 研究標(biāo)本的選擇和收集12
• 1.2 實驗試劑12
• 1.3 主要儀器12-13
• 2. 實驗方法13-14
• 2.1 實驗步驟13
• 2.2 染色結(jié)果判讀13
• 2.3 統(tǒng)計學(xué)方法13-14
• 3. 實驗結(jié)果14-15
• 3.1 TMEM49在卵巢癌及正常卵巢組織的細(xì)胞定位及表達情況14
• 3.2 TMEM49在卵巢癌中的表達與臨床病理特征的關(guān)系分析14-15
• 4. 討論15-17
• 5. 結(jié)論17-18
• 下調(diào)TMEM49對卵巢癌細(xì)胞生物學(xué)行為的影響18-39
• 1. 實驗材料18-21
• 1.1 細(xì)胞株與質(zhì)粒來源18
• 1.2 實驗試劑18-20
• 1.3 主要儀器20-21
• 2. 實驗方法21-27
• 2.1 細(xì)胞培養(yǎng)及質(zhì)粒提取21
• 2.2 構(gòu)建能夠穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的卵巢癌細(xì)胞系21-22
• 2.3 Western-blot法確定TMEM49及相關(guān)基因的表達22-23
• 2.4 實時定量PCR檢測mRNA的表達23-25
• 2.5 Cell Counting Kit-8檢測細(xì)胞增殖實驗25
• 2.6 流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞周期25-26
• 2.7 Annexin V-FITC/PI雙染法檢測細(xì)胞凋亡26
• 2.8 Transwell實驗檢測細(xì)胞侵襲能力26-27
• 2.9 細(xì)胞粘附實驗檢測細(xì)胞粘附能力27
• 2.10 統(tǒng)計學(xué)方法27
• 3. 實驗結(jié)果27-35
• 3.1 Western-blot法檢測相關(guān)蛋白的表達情況27-28
• 3.2 實時定量PCR從mRNA水平檢測TMEM49及相關(guān)基因的表達28-31
• 3.3 下調(diào)TMEM49表達可抑制卵巢癌細(xì)胞的增值31-32
• 3.4 下調(diào)TMEM49表達可阻止卵巢癌細(xì)胞周期進程32
• 3.5 干擾TMEM49的表達可促進細(xì)胞凋亡32-33
• 3.6 干擾TMEM49表達可降低卵巢癌細(xì)胞的侵襲及粘附能力33-35
• 4. 討論35-38
• 5. 結(jié)論38-39
• 總結(jié)39-40
• 參考文獻40-42
• 附錄42-43
• 致謝43-44
• 文獻綜述44-49
• 參考文獻46-49
• 作者簡歷49

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1 鄭麗麗;TMEM49在卵巢癌組織中表達的臨床意義及對卵巢癌發(fā)生及轉(zhuǎn)移中的作用機制[D];福建中醫(yī)藥大學(xué);2016年

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本文編號：634599