本文關(guān)鍵詞：癌基因TBC1D3的功能研究

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【摘要】：TBC1D3是一類在靈長類動物中特有的并在人類基因組中出現(xiàn)重復(fù)的癌基因,在部分前列腺癌和乳腺癌中都發(fā)現(xiàn)了它的擴(kuò)增。擴(kuò)增是癌基因常見的激活方式,表現(xiàn)為包括雙微體和均質(zhì)染色區(qū)在內(nèi)的染色體異常所導(dǎo)致的基因拷貝數(shù)目的增加。TBC1D3發(fā)生擴(kuò)增的原因及其致癌機(jī)制尚未清楚。Hippo信號通路是近年來發(fā)現(xiàn)的一條在生理情況下控制器官大小的信號通路,它的異常調(diào)控會導(dǎo)致腫瘤的發(fā)生。在哺乳動物中,經(jīng)典的Hippo信號通路由激酶Mstl/2,激酶Lats1/2以及它們的效應(yīng)蛋白YAP/TAZ構(gòu)成。我的研究發(fā)現(xiàn)TBC1D3是一個全新的Hippo信號通路調(diào)控基因,實(shí)驗(yàn)表明,它的過表達(dá)可以顯著激活Hippo通路下游的輔轉(zhuǎn)錄因子YAP和TAZ。為了更好地闡明TBC1D3對Hippo信號通路的調(diào)控作用,我構(gòu)建了四環(huán)素誘導(dǎo)]HBC1D3C表達(dá)的穩(wěn)定細(xì)胞系,利用該細(xì)胞系進(jìn)行的一系列研究發(fā)現(xiàn),TBC1D3C可以與小G蛋白RhoA的鳥苷酸交換因子GEF-H1直接相互作用,使其脫離細(xì)胞微管骨架而活化,之后進(jìn)入細(xì)胞質(zhì)激活RhoA�；罨腞hoA促使微絲發(fā)生聚合,對Lats1/2激酶進(jìn)行抑制,最終導(dǎo)致YAP和TAZ的去磷酸化激活�？偨Y(jié)來看,本研究發(fā)現(xiàn)了靈長類動物特有的基因TBC1D3通過抑制Hippo通路來促進(jìn)腫瘤發(fā)生的可能機(jī)制；提出了一個新的GEF-H1激活途徑；此外,更深入地闡明了Hippo信號通路從微管解聚到Y(jié)AP/TAZ激活的中間過程,深化了我們對細(xì)胞骨架調(diào)控Hippo通路的理解。
【關(guān)鍵詞】：TBC1D3 Hippo信號通路 RhoA GEF-H1
【學(xué)位授予單位】：浙江大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R730.2
【目錄】：

• 致謝5-6
• 摘要6-7
• Abstract7-8
• 縮略詞表8-12
• 1 引言12-16
• 1.1 基因擴(kuò)增與癌癥發(fā)生12
• 1.2 TBClD3蛋白的基本介紹12-14
• 1.3 Hippo信號通路的發(fā)現(xiàn)及發(fā)展14-15
• 1.4 GEF-H1與Rho家族介紹15-16
• 2 材料和方法16-26
• 2.1 胞系16
• 2.2 實(shí)驗(yàn)方法16-19
• 2.2.1 主要溶液及配方16-18
• 2.2.2 主要試劑和抗體18-19
• 2.2.3 載體及菌株19
• 2.3 試驗(yàn)方法19-26
• 2.3.1 細(xì)胞總RNA的制備19-20
• 2.3.2 逆轉(zhuǎn)錄合成cDNA20
• 2.3.3 實(shí)時(shí)定量PCR20-22
• 2.3.4 胞轉(zhuǎn)染22-23
• 2.3.5 Western blot免疫印跡檢測23
• 2.3.6 雙熒光報(bào)告實(shí)驗(yàn)23
• 2.3.7 蛋白純化23-24
• 2.3.8 免疫沉淀24
• 2.3.9 免疫熒光24-25
• 2.3.10 RBD pull down25
• 2.3.11 全細(xì)胞裂解液活化的鳥苷酸交換因子分析25-26
• 3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果26-58
• 3.1 TBC1D3誘導(dǎo)YAP/TAZ的去磷酸化及入核26-33
• 3.2 TBC1D3激活YAP/TAZ的關(guān)鍵位點(diǎn)及關(guān)鍵區(qū)域的鑒定33-38
• 3.3 TBC1D3依賴于RHOA來調(diào)控Hippo信號通路38-45
• 3.4 TBC1D3與GEF-H1直接相互作用并介導(dǎo)其從微管解離激活45-58
• 4 討論58-61
• 5 小結(jié)61-62
• 參考文獻(xiàn)62-68
• 作者簡歷68

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中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 ;Hippo signaling:A hub of growth control,tumor suppression and pluripotency maintenance[J];遺傳學(xué)報(bào);2011年10期

2 許傳銘;萬福生;;哺乳動物Hippo信號通路:腫瘤治療的新標(biāo)靶[J];遺傳;2012年03期

3 李敏睿;張盛洪;鐘碧慧;;Hippo信號通路在惡性腫瘤及干細(xì)胞中的作用[J];胃腸病學(xué)和肝病學(xué)雜志;2013年04期

4 朱忠勝;張春林;;腫瘤中Hippo-TAZ信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路研究進(jìn)展[J];國際骨科學(xué)雜志;2013年03期

5 史夢婕;邵松軍;李潔媚;周艷芳;黃培春;;Hippo通路與腫瘤相關(guān)性研究進(jìn)展[J];中國細(xì)胞生物學(xué)學(xué)報(bào);2014年03期

6 李桂蘭;張麗;閆華超;;Hippo信號通路與腫瘤發(fā)生相關(guān)性研究進(jìn)展[J];基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與臨床;2010年09期

7 鮑乾坤;何金龍;朱毅;;Hippo-YAP通路在心血管系統(tǒng)中的作用[J];生理科學(xué)進(jìn)展;2014年03期

8 Jiliang Zhou;;An emerging role for Hippo-YAP signaling in cardiovascular development[J];The Journal of Biomedical Research;2014年04期

9 Masato Enomoto;Tatsushi Igaki;;Deciphering tumor-suppressor signaling in flies:Genetic link between Scribble/Dlg/Lgl and the Hippo pathways[J];遺傳學(xué)報(bào);2011年10期

10 張靖;朱金水;;Hippo-YAP信號通路與胃癌相關(guān)性研究[J];國際消化病雜志;2011年04期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前3條

1 Zhan Yang;;MicroRNA-155 and Hippo/STK3 Form a Feedback Loop to Participate in Vascular Smooth Muscle Cell Proliferation[A];中國生物化學(xué)與分子生物學(xué)會第十一次會員代表大會暨2014年全國學(xué)術(shù)會議論文集——專題報(bào)告五[C];2014年

2 Hongtan Wu;Luyao Wei;Suyuan Ji;Fuqin Fan;Funiu Qin;Lanfen Chen;Dawang Zhou;;MST1/2-Yap signaling pathway in organ size control and cancer development[A];生命的分子機(jī)器及其調(diào)控網(wǎng)絡(luò)——2012年全國生物化學(xué)與分子生物學(xué)學(xué)術(shù)大會摘要集[C];2012年

3 Zhan Yang;Bin Zheng;Yu Zhang;Xin-hua Zhang;Ming He;Dong Ma;Jin-kun Wen;;MicroRNA-155 and Hippo/STK3 Form a Feedback Loop to Participate in Vascular Smooth Muscle Cell Proliferation[A];第十二屆全國脂質(zhì)與脂蛋白學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2014年

中國重要報(bào)紙全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 記者 胡德榮;我學(xué)者發(fā)現(xiàn)原癌蛋白質(zhì)YAP抑制劑[N];健康報(bào);2014年

2 記者 徐瑞哲;人造“克星”抑制胃癌[N];解放日報(bào);2014年

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 安健;Nedd4-like E3泛素連接酶調(diào)控Angiomotin/p130蛋白穩(wěn)定性的分子機(jī)制研究[D];復(fù)旦大學(xué);2011年

2 劉歡;Hippo通路效應(yīng)蛋白YAP調(diào)控基因轉(zhuǎn)錄的機(jī)制與功能研究[D];浙江大學(xué);2015年

3 劉鵬;HBV preS2 通過miR-338-3p 調(diào)控Hippo通路效應(yīng)分子TAZ促進(jìn)肝細(xì)胞肝癌作用研究[D];山東大學(xué);2015年

4 朱國華;上調(diào)miR-130b通過滅活Hippo信號通路來增強(qiáng)膠質(zhì)瘤干細(xì)胞的表型[D];新疆醫(yī)科大學(xué);2015年

5 韓笑;Hippo信號通路中TEAD蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)與功能研究[D];吉林大學(xué);2016年

6 郭鵬達(dá);RARγ的缺失通過調(diào)控Hippo-Yap信號通路促進(jìn)結(jié)直腸癌的發(fā)生和轉(zhuǎn)移[D];蘇州大學(xué);2016年

7 周菁;YAP在哮喘發(fā)生過程中的表達(dá)情況及其功能探討[D];南昌大學(xué);2016年

8 鄧軍;CUL4A通過調(diào)控Hippo通路促胃癌細(xì)胞增殖和侵襲的分子機(jī)制[D];南昌大學(xué);2016年

9 李佳;Hippo信號通路在調(diào)節(jié)卵巢生殖干細(xì)胞功能和延緩卵巢衰老中的作用[D];南昌大學(xué);2016年

10 劉乃華;磷酸二酯酶5/PKG通過Hippo/TAZ信號調(diào)控前列腺癌腫瘤干細(xì)胞干性及其分子機(jī)制研究[D];浙江大學(xué);2016年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 陸亞紅;家蠶BmYki不同剪接體的功能研究[D];蘇州大學(xué);2016年

2 宋春暖;家蠶Hippo通路成員的全基因組鑒定與分析[D];西南大學(xué);2016年

3 王日遠(yuǎn);家蠶Hippo通路主基因BmYki的克隆、表達(dá)及功能初探[D];西南大學(xué);2016年

4 王曉霞;E-cadherin介導(dǎo)的麥冬皂苷B調(diào)控非小細(xì)胞肺癌Hippo通路的機(jī)制研究[D];南京中醫(yī)藥大學(xué);2016年

5 朱羽桐;癌基因TBC1D3的功能研究[D];浙江大學(xué);2016年

6 車聰;炎性因子通過抑制胃上皮細(xì)胞中Hippo-YAP信號通路促進(jìn)胃黏膜發(fā)生EMT改變[D];青島大學(xué);2016年

7 武亞楠;Hippo/TAZ信號通路在骨肉瘤耐藥過程中的機(jī)制研究[D];中國人民解放軍醫(yī)學(xué)院;2016年

8 孟煥然;Hippo通路相關(guān)蛋白在卵巢癌組織中的表達(dá)及其臨床意義[D];寧夏醫(yī)科大學(xué);2016年

9 梁坤;Hippo信號通路在結(jié)直腸癌中的表達(dá)及臨床意義[D];青島大學(xué);2014年

10 魏文超;Hippo信號通路在胃粘膜癌變過程中的作用[D];青島大學(xué);2013年

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本文編號：628467