發(fā)布時(shí)間：2017-08-06 05:09

  本文關(guān)鍵詞：缺氧誘導(dǎo)膠質(zhì)瘤細(xì)胞逆分化的在體研究

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【摘要】：背景及目的在中樞神經(jīng)系統(tǒng),惡性程度與致死率最高的腫瘤為膠質(zhì)瘤。雖然已有手術(shù)切除、放療和化療的規(guī)范治療,但患者預(yù)后欠佳,腫瘤術(shù)后極易復(fù)發(fā),且復(fù)發(fā)腫瘤惡性程度更高,放化療更耐受。因此,亟需發(fā)展新的治療手段來(lái)改善膠質(zhì)瘤患者的預(yù)后。缺氧是實(shí)體瘤的一個(gè)重要特征,腫瘤干細(xì)胞的存在也已得到證實(shí),且腫瘤干細(xì)胞處于缺氧微環(huán)境中。缺氧可以通過(guò)促進(jìn)膠質(zhì)瘤干細(xì)胞自我更新來(lái)加重膠質(zhì)瘤惡性進(jìn)展進(jìn)而促進(jìn)腫瘤的發(fā)生發(fā)展及放化療耐受。然而,對(duì)于分化期膠質(zhì)瘤細(xì)胞是否同樣參與膠質(zhì)瘤惡性進(jìn)展并受缺氧微環(huán)境調(diào)控目前并未見(jiàn)明顯報(bào)道。為此,我們擬通過(guò)在體研究,證明缺氧可以誘導(dǎo)分化期膠質(zhì)瘤細(xì)胞逆分化形成膠質(zhì)瘤干樣細(xì)胞進(jìn)而加重膠質(zhì)瘤惡性進(jìn)展。方法培養(yǎng)小鼠GL261膠質(zhì)瘤細(xì)胞,免疫磁珠分選出CD133-GL261細(xì)胞,部分細(xì)胞缺氧培養(yǎng)21天,另一部分細(xì)胞常氧培養(yǎng)21天。luc慢病毒感染上述條件處理后的CD133-GL261細(xì)胞,獲得穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的GL261-Luc細(xì)胞。將C57小鼠隨機(jī)分為4組,組1小鼠用缺氧培養(yǎng)21天后轉(zhuǎn)染的細(xì)胞、組2小鼠用常氧培養(yǎng)21天后轉(zhuǎn)染的細(xì)胞行顱內(nèi)荷瘤(1×104/只),組1、組2小鼠均行常氧飼養(yǎng)(21%O2,5%CO2,74%N2)。于5d、10d、15d、20d、25d行活體成像,30天內(nèi)觀察生存率,行腫瘤標(biāo)本大體觀察及HE染色。組3、組4小鼠均用常氧培養(yǎng)21天后轉(zhuǎn)染的細(xì)胞行顱內(nèi)荷瘤(5×104/只),組3小鼠行低氧飼養(yǎng)(10%O2,5%CO2,85%N2),組4小鼠行常氧飼養(yǎng)(21%O2,5%CO2,74%N2)。于5d、10d、15d、20d、25d行活體成像,30天內(nèi)觀察生存率,行腫瘤標(biāo)本大體觀察、HE染色,并用免疫組化、WB、RT-PCR檢測(cè)腫瘤干細(xì)胞標(biāo)志物SOX-2、OCT-4、KLF-4、Nanog、CD133表達(dá)情況。結(jié)果1、組1與組2活體成像比較:活體成像顯示組1小鼠在第10天開(kāi)始有明顯腫瘤形成,25d后腫瘤體積進(jìn)一步增大,而組2小鼠顱內(nèi)無(wú)明顯成瘤,配對(duì)樣本T檢驗(yàn)得P0.001,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。2、組3與組4活體成像比較:組3小鼠活體成像顯示隨著低氧飼養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng),小鼠顱內(nèi)腫瘤體積逐漸增大,而組4顱內(nèi)成瘤不明顯,使用配對(duì)樣本T檢驗(yàn)得P0.001。3、生存期分析:30天觀察期內(nèi)組1小鼠生存率低于組2小鼠,組3小鼠生存率低于組4小鼠,P0.0001,結(jié)果具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。4、大體標(biāo)本觀察:組1、組3小鼠顱內(nèi)有明顯腫瘤形成,HE染色證實(shí)。而組2、組4顱內(nèi)無(wú)明顯成瘤。5、腫瘤干細(xì)胞標(biāo)志物檢測(cè):(1)免疫組化顯示組3腫瘤內(nèi)SOX-2、OCT-4、KLF-4、Nanog、CD133高表達(dá);(2)RT-PCR檢測(cè)得正常C57小鼠、組3小鼠、組4小鼠的SOX-2、OCT-4、KLF-4、Nanog、CD133的RNA表達(dá)量,組3小鼠高于其余兩組小鼠,單因素方差分析得P≤0.001,結(jié)果具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,而正常C57小鼠、組4小鼠差異P0.05,結(jié)果無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;(3)WB檢測(cè)顯示與正常C57小鼠、組4小鼠相比,組3小鼠腫瘤標(biāo)本SOX-2、OCT-4、KLF-4、Nanog、CD133蛋白表達(dá)高,單因素方差分析得P0.05,而正常C57小鼠與組4小鼠相較無(wú)明顯差異。結(jié)論1、體外缺氧培養(yǎng)細(xì)胞小鼠顱內(nèi)荷瘤后有腫瘤形成且生存率較對(duì)照組明顯降低,提示體外缺氧培養(yǎng)可以誘導(dǎo)膠質(zhì)瘤干樣細(xì)胞的形成。2、體外常氧培養(yǎng)細(xì)胞顱內(nèi)荷瘤后小鼠行低氧飼養(yǎng)顱內(nèi)可以成瘤,腫瘤干細(xì)胞標(biāo)志物SOX-2、OCT-4、KLF-4、Nanog、CD133表達(dá)陽(yáng)性,與對(duì)照組相比低氧飼養(yǎng)組小鼠生存率明顯降低,證明體內(nèi)缺氧環(huán)境可以誘導(dǎo)膠質(zhì)瘤干樣細(xì)胞的形成。3、綜上,膠質(zhì)瘤缺氧微環(huán)境可以促使膠質(zhì)瘤細(xì)胞逆分化形成膠質(zhì)瘤干樣細(xì)胞,進(jìn)一步加重膠質(zhì)瘤惡性進(jìn)展。
【關(guān)鍵詞】：缺氧 膠質(zhì)瘤細(xì)胞 膠質(zhì)瘤干樣細(xì)胞 逆分化
【學(xué)位授予單位】：第三軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R739.41
【目錄】：

• 英文縮略詞表4-6
• 英文摘要6-9
• 中文摘要9-11
• 1. 前言11-13
• 2. 材料與方法13-26
• 3. 結(jié)果26-38
• 4. 討論38-42
• 全文結(jié)論42-43
• 參考文獻(xiàn)43-46
• 文獻(xiàn)綜述 膠質(zhì)瘤治療的未來(lái)展望46-52
• 參考文獻(xiàn)50-52
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表的文章52-53
• 致謝53

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