本文關(guān)鍵詞：體外藥敏實(shí)驗(yàn)在優(yōu)化急性淋巴細(xì)胞白血病治療中的作用

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【摘要】：目的:白血病細(xì)胞耐藥性是制約化療成功的重要因素。特別是針對復(fù)發(fā)難治患者,常規(guī)化療方案效果往往不能令人滿意。如能在化療前預(yù)先對白血病細(xì)胞的藥物敏感性進(jìn)行檢測,并根據(jù)其結(jié)果優(yōu)化治療方案,可有效提高化療成功率,延長患者生存時間。對于急性淋巴細(xì)胞白血病(Acute Lymphoblastic Leukemia,ALL),現(xiàn)有國內(nèi)外研究提示,其對常規(guī)化療藥物的耐藥是非常普遍的,因此,尋找一些藥物增敏劑,減少白血病細(xì)胞對化療藥物的耐藥性將會極大地改善患者的預(yù)后。目前,臨床前腫瘤模型體內(nèi)試驗(yàn)已證實(shí)蛋白酶體抑制劑(硼替佐米)能夠顯著遏制包括多發(fā)性骨髓瘤、ALL在內(nèi)的多種腫瘤細(xì)胞的生長、誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡和抑制血管新生。此外,體外研究也顯示硼替佐米可以增加化療藥的敏感性,并能克服骨髓瘤細(xì)胞對地塞米松、阿霉素和馬法蘭等藥物的耐藥。但迄今為止,硼替佐米能否在體外有效減少ALL細(xì)胞對化療藥物的耐藥性,國內(nèi)外尚缺乏相關(guān)報道。本研究擬通過體外試驗(yàn)檢測原代ALL細(xì)胞對多種化療藥物的敏感性,來探討其與臨床化療療效的相關(guān)性,為臨床治療將體外藥敏試驗(yàn)做為預(yù)后判斷因素之一提供有力證據(jù)。同時結(jié)合現(xiàn)有的ALL預(yù)后分層指標(biāo)對ALL患者的總體療效和預(yù)后進(jìn)行預(yù)測。此外,對于復(fù)發(fā)難治ALL,本研究擬將硼替佐米作為潛在的化療增敏劑(一方面增加常規(guī)化療藥物的殺傷作用,另一方面逆轉(zhuǎn)白血病細(xì)胞對化療藥物的耐藥),來對比觀察硼替佐米單藥,硼替佐米+氟達(dá)拉濱+阿糖胞苷和硼替佐米+柔紅霉素對耐藥白血病細(xì)胞的作用,并探討硼替佐米增加化療藥物抗腫瘤效應(yīng)的具體作用機(jī)制,從而為臨床治療復(fù)發(fā)難治性ALL提供更多的聯(lián)合化療的選擇方案,甚至為開發(fā)新型治療策略提供相應(yīng)理論依據(jù)。方法:1首先對36例初治ALL患者應(yīng)用MTT法對單藥及臨床常用聯(lián)合方案進(jìn)行敏感性檢測,了解其增殖抑制作用。結(jié)合ALL預(yù)后分層指標(biāo)對ALL患者的化療療效和預(yù)后進(jìn)行分析預(yù)測。2選取急性T淋巴細(xì)胞白血病細(xì)胞株CEM/C1細(xì)胞(托泊替康耐藥)為研究對象,應(yīng)用不同濃度硼替佐米對CEM/C1細(xì)胞進(jìn)行增殖抑制檢測,并分別選�、�0.36ug/ml的硼替佐米②0.49ug/ml的柔紅霉素③0.36ug/ml的硼替佐米聯(lián)合0.49ug/ml的柔紅霉素對CEM/C1細(xì)胞進(jìn)行增殖抑制檢測。3選取急性T淋巴細(xì)胞白血病細(xì)胞株CEM/C1細(xì)胞(托泊替康耐藥)為研究對象,應(yīng)用①0.36ug/ml的硼替佐米②158.5ug/ml的氟達(dá)拉濱③19.5ug/ml的阿糖胞苷④158.5ug/ml的氟達(dá)拉濱、19.5ug/ml的阿糖胞苷兩藥聯(lián)合⑤0.36ug/ml的硼替佐米、158.5ug/ml的氟達(dá)拉濱、19.5ug/ml的阿糖胞苷三藥聯(lián)合對CEM/C1細(xì)胞進(jìn)行增殖抑制檢測。4選取難治性ALL患者的原代新鮮細(xì)胞,應(yīng)用不同濃度硼替佐米、硼替佐米單藥、氟達(dá)拉濱單藥、阿糖胞苷單藥、柔紅霉素單藥及氟達(dá)拉濱聯(lián)合阿糖胞苷、硼替佐米+氟達(dá)拉濱+阿糖胞苷三藥聯(lián)合、硼替佐米+柔紅霉素兩藥聯(lián)合對其進(jìn)行增殖抑制檢測,并對其相互間療效及與傳統(tǒng)化療方案療效進(jìn)行對比。5用SPSS 22.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析,所有數(shù)據(jù)用三次獨(dú)立實(shí)驗(yàn)的平均值表示,實(shí)驗(yàn)結(jié)果用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(X±S)表示;兩組均數(shù)比較采用t檢驗(yàn),方差分析方法進(jìn)行分析處理,多組均數(shù)比較用單因素方差分析,組間多重比較用SNK法。P0.05有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。單因素分析、兩個或多個率的比較采用卡方檢驗(yàn)。多因素分析采用Logistic回歸分析。以P0.05作為具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的標(biāo)準(zhǔn)。結(jié)果:1聯(lián)合藥物在初治ALL原代細(xì)胞中抑制作用及臨床療效相關(guān)性。1.1用苔盼藍(lán)拒染試驗(yàn)方法測定ALL原代新鮮細(xì)胞活細(xì)胞率為95%-99%之間,平均活細(xì)胞率為(97.16±1.31)%,而凍存復(fù)蘇后細(xì)胞活細(xì)胞率為67%-89.99%之間,平均活細(xì)胞率為(82.85±5.62)%,表明細(xì)胞凍存復(fù)蘇后細(xì)胞活性下降,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。1.2體外聯(lián)合藥敏與體內(nèi)敏感性關(guān)系,體外敏感者31例,體外耐藥者5例,體內(nèi)敏感者31例,體內(nèi)耐藥者5例。體外藥敏結(jié)果與體內(nèi)療效比較,S/S 30例,S/R 1例,R/S 1例,R/R 4例,總符合率為94.44%,陽性符合率為96.77%,陰性符合率為80%。ALL原代新鮮細(xì)胞單藥及聯(lián)合用藥抑制率與凍存復(fù)蘇后活細(xì)胞抑制率相比具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。1.3體外各聯(lián)合化療方案敏感組與耐藥組細(xì)胞抑制率比較,VCTD方案敏感組平均抑制率為(61.32±7.88)%,耐藥組平均抑制率為(28.65±1.81)%,VCID方案敏感組平均抑制率為(62.34±7.97)%,耐藥組平均抑制率為(27.24±2.24)%,VCILD方案敏感組平均抑制率為(63.07±7.39)%,耐藥組平均抑制率為(28.69±0.99)%,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。1.4將敏感組(S/S)和耐藥組(R/R)的完全緩解率進(jìn)行卡方檢驗(yàn),結(jié)果顯示兩組間的完全緩解率具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P=0.000),將敏感組(S/S)和耐藥組(R/R)的復(fù)發(fā)率進(jìn)行卡方檢驗(yàn),結(jié)果顯示兩組間的復(fù)發(fā)率具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P=0.011)。1.5將敏感組(S/S)和耐藥組(R/R)的年齡(≥40歲)、初治時白細(xì)胞計(jì)數(shù)(T-ALL WBC≥100×109/L,B-ALL WBC≥30×109/L)、是否存在髓外病變、是否有復(fù)雜核型、預(yù)后分層危度組別(低危、高危)、緩解率、復(fù)發(fā)率進(jìn)行單因素分析,結(jié)果提示年齡、初治時白細(xì)胞計(jì)數(shù)、預(yù)后分層危度組別、緩解率及復(fù)發(fā)率與化療敏感與否有關(guān)(P0.05)。將單因素分析結(jié)果有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的指標(biāo)進(jìn)行賦值,并進(jìn)行Logistic多因素回歸分析,結(jié)果提示:年齡、初治時白細(xì)胞計(jì)數(shù)、預(yù)后分層危度組別(P0.05)為患者化療是否敏感的獨(dú)立危險因素。2單藥或聯(lián)合用藥對急性T淋巴細(xì)胞白血病細(xì)胞株CEM/C1細(xì)胞(托泊替康耐藥)增殖的影響2.1試驗(yàn)中選取24.5ug/ml的托泊替康驗(yàn)證CEM/C1細(xì)胞耐藥性,實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,其抑制率為(15.02±2.46)%。2.2試驗(yàn)中選取不同濃度硼替佐米(0.025ug/ml、0.25ug/ml、2.5ug/ml)作用于CEM/C1細(xì)胞48h,各組抑制率分別為(24.51±1.98)%、(44.17±1.16)%、(55.02±2.46)%,實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明硼替佐米對急性T淋巴細(xì)胞白血病CEM/C1細(xì)胞株的增殖有抑制作用,且呈劑量依賴性,隨著作用濃度的升高,抑制率也升高,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.00)。2.3試驗(yàn)中選�、�0.36ug/ml的硼替佐米②0.49ug/ml的柔紅霉素③0.36ug/ml的硼替佐米聯(lián)合0.49ug/ml的柔紅霉素作用于CEM/C1細(xì)胞株48h,各組抑制率(44.46±1.61)%、(43.59±2.04)%、(54.94±1.06)%,三組具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。2.4試驗(yàn)中選�、�0.36ug/ml的硼替佐米②158.5ug/ml的氟達(dá)拉濱③19.5ug/ml的阿糖胞苷④158.5ug/ml的氟達(dá)拉濱、19.5ug/ml的阿糖胞苷兩藥聯(lián)合⑤0.36ug/ml的硼替佐米、158.5ug/ml的氟達(dá)拉濱、19.5ug/ml的阿糖胞苷三藥聯(lián)合作用于CEM/C1細(xì)胞株48h,各組抑制率(44.46±1.61)%、(38.02±1.29)%、(24.59±2.89)%、(45.64±1.08)%、(56.09±2.14)%,五組具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。3單藥或聯(lián)合用藥對難治性ALL原代細(xì)胞增殖的影響3.1試驗(yàn)中選取不同濃度硼替佐米(0.025ug/ml、0.25ug/ml、2.5ug/ml)作用于三組難治性ALL原代細(xì)胞48h,各組抑制率分別為A組(24.78±1.84)%、(44.98±1.04)%、(55.79±3.07)%,B組(26.26±2.91)%、(44.99±0.65)%、(55.40±3.19)%,C組(25.73±1.56)%、(45.34±1.28)%、(57.73±3.43)%,實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明硼替佐米對難治性ALL原代細(xì)胞的增殖有抑制作用,且呈劑量依賴性,隨著作用濃度的升高,抑制率也升高,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.00)。3.2硼替佐米組與非硼替佐米組對難治性ALL原代細(xì)胞增殖的影響3.2.1①0.36ug/ml的硼替佐米,②0.49ug/ml的柔紅霉素,③0.36ug/ml的硼替佐米聯(lián)合0.49ug/ml的柔紅霉素,分別作用于六組難治性ALL(A,B,C,D,E,F)原代細(xì)胞48h,實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明硼替佐米組較非硼替佐米組具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。3.2.2①0.36ug/ml的硼替佐米②158.5ug/ml的氟達(dá)拉濱③19.5ug/ml的阿糖胞苷④158.5ug/ml的氟達(dá)拉濱、19.5ug/ml的阿糖胞苷兩藥聯(lián)合⑤0.36ug/ml的硼替佐米、158.5ug/ml的氟達(dá)拉濱、19.5ug/ml的阿糖胞苷三藥聯(lián)合,分別作用于六組難治性ALL(A,B,C,D,E,F)原代細(xì)胞48h,實(shí)驗(yàn)結(jié)果也表明硼替佐米組較非硼替佐米組具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。3.3傳統(tǒng)用藥與新方案對難治性ALL原代細(xì)胞增殖的影響試驗(yàn)中選�、賄CTD,②VCID,③VCILD,④0.36ug/ml的硼替佐米、158.5ug/ml的氟達(dá)拉濱、19.5ug/ml的阿糖胞苷三藥聯(lián)合,⑤0.36ug/ml的硼替佐米聯(lián)合0.49ug/ml的柔紅霉素,分別作用于六組復(fù)發(fā)的難治性ALL(A,B,C,D,E,F)原代細(xì)胞48h,實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明傳統(tǒng)聯(lián)合化療方案與試驗(yàn)方案抑制率具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。結(jié)論:1進(jìn)行MTT體外藥敏試驗(yàn)選用的ALL患者的原代細(xì)胞需為新鮮細(xì)胞,凍存復(fù)蘇后的細(xì)胞活力差,抑制率較新鮮細(xì)胞有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,影響MTT試驗(yàn)結(jié)果。2 MTT體外藥敏試驗(yàn)與體內(nèi)療效的符合性較高,可以用于指導(dǎo)臨床ALL進(jìn)行個體化治療選擇聯(lián)合化療方案的手段。3對于體外藥敏實(shí)驗(yàn)敏感的ALL患者應(yīng)用常規(guī)化療方案治療效果較好,而體外藥敏實(shí)驗(yàn)?zāi)退幍腁LL患者應(yīng)用常規(guī)傳統(tǒng)化療治療效果差,臨床需調(diào)整治療方案。特別是對于初治時年齡大,白細(xì)胞計(jì)數(shù)高及預(yù)后危險度分層高的患者,化療敏感性可能較差,需優(yōu)化化療方案。4急性T淋巴細(xì)胞白血病細(xì)胞株CEM/C1細(xì)胞(托泊替康耐藥),硼替佐米聯(lián)合柔紅霉素,硼替佐米聯(lián)合氟達(dá)拉濱、阿糖胞苷應(yīng)用時均具有增敏效果。5硼替佐米為主的聯(lián)合化療方案可以提高難治復(fù)發(fā)ALL患者的緩解率。
【關(guān)鍵詞】：急性淋巴細(xì)胞白血病 MTT法 細(xì)胞增殖抑制 CEM/C1細(xì)胞株 硼替佐米 氟達(dá)拉濱 阿糖胞苷 柔紅霉素
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R733.7
【目錄】：

• 中文摘要4-9
• 英文摘要9-16
• 英文縮寫16-17
• 前言17
• 材料與方法17-24
• 結(jié)果24-28
• 附圖28-34
• 附表34-45
• 討論45-48
• 結(jié)論48-49
• 參考文獻(xiàn)49-52
• 綜述 急性淋巴細(xì)胞白血病分層治療52-67
• 參考文獻(xiàn)59-67
• 致謝67-68
• 個人簡歷68

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前5條

1 張濤;張永清;王一葦;梁蓉;白慶咸;楊嵐;王文清;顧宏濤;高廣勛;舒汨汨;陳協(xié)群;;FLAG方案治療復(fù)發(fā)及難治成人急性淋巴細(xì)胞白血病[J];現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學(xué);2010年11期

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本文編號：624863