本文關鍵詞：小分子TRKs抑制劑對膠質(zhì)瘤細胞生物學行為的影響

  更多相關文章： 原肌球蛋白受體激酶(TRKs)抑制劑 抗腫瘤 分子靶向治療

【摘要】：背景:膠質(zhì)瘤是威脅人類健康和生命的重大疾病,由于其較高的致死率,抗膠質(zhì)瘤藥物的研究一直是腫瘤治療研究的難點,而新型抗腫瘤藥物因其特異性高且毒副作用小更是備受關注。分子靶向治療是通過靶向抑制腫瘤發(fā)生發(fā)展的重要信號通路來阻止腫瘤細胞的生長并降低對正常細胞的毒性。原肌球蛋白受體激酶家族(tropomyosin receptor kinase,TRKs)是酪氨酸激酶家族的一員,是神經(jīng)生長因子受體。其與神經(jīng)生長因子結(jié)合后可以激活細胞內(nèi)包括PI3K/AKT/m TOR、MAPK/ERK等在內(nèi)的一系列信號通路級聯(lián)反應,進而引起細胞表型轉(zhuǎn)變。原肌球蛋白受體激酶抑制劑在多種腫瘤中發(fā)揮抗腫瘤作用。有報道稱TRKs家族在膠質(zhì)瘤細胞中表達異常,是治療膠質(zhì)瘤的潛在靶點。目的:對新合成的原肌球蛋白受體激酶(tropomyosin receptor kinase,TRKs)抑制劑進行初步的活性篩選,進一步探討候選化合物對膠質(zhì)瘤細胞生物學行為產(chǎn)生影響的分子機理。方法:用不同濃度TRKs抑制劑處理細胞,通過膠質(zhì)瘤U251、U87細胞及人臍帶血上皮細胞HUVEC的增殖實驗對合成的原肌球蛋白受體激酶抑制劑進行初步的藥物活性篩選,分析并篩選出抗腫瘤活性高、細胞毒性低的候選化合物。選取抗腫瘤增殖活性較好的化合物采用ADP-Glo Kinase Assay的方法對其做進一步TRKA激酶抑制活性的評價。采用細胞化學染色法分析細胞形態(tài)學和凋亡的變化;克隆形成實驗觀察TRKs抑制劑對腫瘤增殖能力的影響;用候選化合物處理膠質(zhì)瘤細胞,Hoechst33258/PI雙染及TUNEL染色法檢測其細胞死亡及DNA斷裂情況,流式細胞術檢測細胞周期分布及早期凋亡AnnexinⅤ-FITC水平的變化;Western Blot分析藥物處理后膠質(zhì)瘤細胞內(nèi)抗凋亡蛋白(pro-Caspase3、Bcl-2)、凋亡蛋白(BAD)及AKT磷酸化水平,初步探討抗腫瘤機制。結(jié)果:成功篩選出特異性好、抗腫瘤活性高的化合物,并評價了其對TRKA激酶的抑制活性。細胞增殖實驗及克隆形成實驗表明TRKs抑制劑候選化合物(6號化合物)能顯著抑制膠質(zhì)瘤細胞的增殖,在濃度約為9μM時抑制率達到50%,且對正常細胞的毒副作用低于陽性對照組;Hoechst33258/PI雙染及TUNEL染色法分析發(fā)現(xiàn)膠質(zhì)瘤細胞出現(xiàn)明顯的凋亡特征:胞質(zhì)皺縮,核膜裂解、邊緣化,DNA斷裂等;流式檢測AnnexinⅤ-FITC的水平及細胞周期分布的結(jié)果表明此化合物可以阻滯膠質(zhì)瘤的細胞周期、促進凋亡蛋白的表達,隨后的Western Blot分析也證實了候選化合物處理后,抗凋亡蛋白pro-Caspase3和Bcl-2的表達降低,凋亡蛋白BAD的表達顯著升高,而TRKs受體介導的下游信號通路AKT磷酸化水平降低,提示6號候選化合物有可能是通過抑制AKT介導的下游信號通路途徑來發(fā)揮抗腫瘤作用的。結(jié)論:6號化合物是一種特異性好、抗腫瘤活性較高的小分子TRKs抑制劑,通過抑制TRKs激酶活性,調(diào)節(jié)PI3K-AKT信號通路、降低AKT的磷酸化水平,進而抑制抗凋亡蛋白表達水平并增加促凋亡蛋白表達水平,最終阻滯細胞周期、促進細胞凋亡,從而發(fā)揮抗腫瘤作用。研究結(jié)果有望為臨床治療膠質(zhì)瘤提供新的思路。
【關鍵詞】：原肌球蛋白受體激酶(TRKs)抑制劑 抗腫瘤 分子靶向治療
【學位授予單位】：中國人民解放軍軍事醫(yī)學科學院
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R739.41
【目錄】：

• 英文縮略詞表5-7
• 摘要7-9
• Abstract9-11
• 前言11-14
• 第一章 原肌球蛋白受體激酶抑制劑抗腫瘤活性的篩選14-29
• 一、實驗材料14-15
• 1.1 細胞和藥物14
• 1.2 主要儀器與試劑14-15
• 1.3 試劑的配制15
• 二、實驗方法15-21
• 2.1 細胞培養(yǎng)與傳代15-16
• 2.2 化合物的設計合成16-19
• 2.3 TRKs抑制劑抗腫瘤活性的篩選19
• 2.4 TRKA激酶抑制活性的篩選19-21
• 2.5 統(tǒng)計學分析21
• 三、實驗結(jié)果21-27
• 3.1 MTT法檢測12個TRKs抑制劑及陽性對照藥對膠質(zhì)瘤細胞生長的影響21-24
• 3.2 TRKs抑制劑對TRKA激酶的抑制活性影響24-27
• 四、討論27-29
• 第二章 候選化合物對膠質(zhì)瘤增殖作用的影響29-38
• 一、實驗材料29-30
• 1.1 細胞和藥物29
• 1.2 主要儀器與試劑29-30
• 1.3 試劑的配制30
• 二、實驗方法30-31
• 2.1 細胞化學染色法分析候選化合物對細胞活力的影響30
• 2.2 MTT檢測細胞增殖30-31
• 2.3 克隆形成實驗31
• 2.4 候選化合物干預細胞后對周期分布的影響31
• 2.5 統(tǒng)計學分析31
• 三、實驗結(jié)果31-36
• 3.1 候選化合物對細胞形態(tài)的影響31-32
• 3.2 MTT檢測候選化合物對細胞增殖的影響32-33
• 3.3 克隆形成實驗33-34
• 3.4 藥物處理后對細胞周期的影響34-36
• 四、討論36-38
• 第三章 候選化合物對U251膠質(zhì)瘤凋亡作用的研究38-52
• 一、實驗材料38-40
• 1.1 細胞和藥物38
• 1.2 主要儀器與試劑38-39
• 1.3 試劑配制39-40
• 二、實驗方法40-44
• 2.1 Hoechst33258及PI雙染色觀察細胞凋亡變化40
• 2.2 AnnexinⅤ-FITC凋亡檢測40-41
• 2.3 TUNEL檢測細胞DNA斷裂41
• 2.4 Western Blot檢測凋亡蛋白41-44
• 2.5 統(tǒng)計學分析44
• 三、實驗結(jié)果44-48
• 3.1 Hoechst33258及PI雙染觀察U251細胞的形態(tài)學變化44-45
• 3.2 AnnexinⅤ-FITC標記檢測候選化合物處理的U251細胞凋亡45-46
• 3.3 TUNEL檢測候選化合物作用后U251細胞DNA斷裂情況46-47
• 3.4 Western Blot檢測凋亡相關蛋白的表達水平47-48
• 四、討論48-52
• 第四章 總結(jié)52-53
• 參考文獻53-59
• 個人簡歷59-62
• 致謝62

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1 徐俊杰;于洪泉;國巍;趙偉;金宏;溫娜;齊玲;;西蘭花多肽對大鼠C6膠質(zhì)瘤細胞生長的影響[J];中風與神經(jīng)疾病雜志;2012年11期

2 徐俊杰;于洪泉;趙偉;金宏;溫娜;齊玲;劉興吉;;西蘭花多肽對C6膠質(zhì)瘤細胞的誘導凋亡作用[J];吉林大學學報(醫(yī)學版);2013年01期

3 仝海波,江澄川,唐鎮(zhèn)生,金一尊;膠質(zhì)瘤細胞化學增敏作用實驗研究[J];山西臨床醫(yī)藥;2000年07期

4 李嗍,王楓,繆珊,駱文靜;過量鋅對鼠膠質(zhì)瘤細胞體外生長的影響[J];解放軍預防醫(yī)學雜志;2001年04期

5 梁一鳴,郭國慶,鄭少俊,沈偉哉;膠質(zhì)瘤血管內(nèi)皮生長因子表達的調(diào)節(jié)[J];臨床與實驗病理學雜志;2001年02期

6 曲元明,韓韜,李桂林,王成偉;血管內(nèi)皮細胞生長因子抗體對膠質(zhì)瘤生長的影響[J];山東醫(yī)科大學學報;2001年02期

7 黃強,董軍;膠質(zhì)瘤的分子外科治療[J];中國微侵襲神經(jīng)外科雜志;2001年04期

8 葉明,周岱,周幽心,王瑋,傅建新,黃煜倫;血管內(nèi)皮生長因子在膠質(zhì)瘤中的表達[J];腫瘤;2002年06期

9 顧宇翔,陳銜城,王宇倩;膠質(zhì)瘤對親細胞非均質(zhì)分子脂質(zhì)和幾種藥物敏感性的比較[J];復旦學報(醫(yī)學版);2003年02期

10 王成偉 ,劉福生 ,曲元明 ,李桂林;血管內(nèi)皮生長因子抗體抑制膠質(zhì)瘤生長的實驗研究[J];中華神經(jīng)外科雜志;2003年01期

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1 李飛;李梅;盧佳友;朱剛;林江凱;孟輝;吳南;陳志;馮華;;脂質(zhì)微區(qū)干擾劑甲基-β-環(huán)糊精影響C6膠質(zhì)瘤細胞侵襲和遷移的體外實驗研究[A];中國醫(yī)師協(xié)會神經(jīng)外科醫(yī)師分會第四屆全國代表大會論文匯編[C];2009年

2 吳安華;王運杰;Ohlfest JR;Wei Chen;Low WC;;膠質(zhì)瘤的生物治療-從實驗室到臨床[A];中華醫(yī)學會神經(jīng)外科學分會第九次學術會議論文匯編[C];2010年

3 徐宏;韓楊云;孫中書;李新軍;;與膠質(zhì)瘤代謝通路相關的候選基因篩選[A];中華醫(yī)學會神經(jīng)外科學分會第九次學術會議論文匯編[C];2010年

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5 俞文華;車志豪;張祖勇;許培源;陸鏞民;傅林;朱強;陳鋒;杜權;;骨橋蛋白在膠質(zhì)瘤細胞中的表達及其信號傳導途徑[A];2005年浙江省神經(jīng)外科學術會議論文匯編[C];2005年

6 張震;徐克;;低強度超聲誘導C6膠質(zhì)瘤細胞凋亡的體外實驗研究[A];中華醫(yī)學會第十三次全國超聲醫(yī)學學術會議論文匯編[C];2013年

7 蔣偉峰;高方友;尹浩;;白細胞介素-17及其受體在膠質(zhì)瘤中的表達及臨床意義[A];2013年貴州省神經(jīng)外科年會論文集[C];2013年

8 徐慶生;張小兵;周永慶;;膠質(zhì)瘤干細胞及其放療敏感性[A];2011年浙江省神經(jīng)外科學學術年會論文匯編[C];2011年

9 楊孔賓;趙世光;劉炳學;陳曉豐;戴欽舜;;K~+通道阻斷劑四乙胺對大鼠膠質(zhì)瘤細胞的增殖和凋亡影響[A];中國醫(yī)師協(xié)會神經(jīng)外科醫(yī)師分會第四屆全國代表大會論文匯編[C];2009年

10 黃強;;膠質(zhì)瘤生成細胞研究[A];第三屆中國腫瘤學術大會教育論文集[C];2004年

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1 衣曉峰　馮宇曦;中藥三氧化二砷有望成為治療膠質(zhì)瘤新藥[N];中國醫(yī)藥報;2011年

2 記者 匡遠深;讓膠質(zhì)瘤干細胞不再“繁殖”[N];健康報;2011年

3 張獻懷　張文;瘤區(qū)埋雷 持續(xù)殺傷[N];健康報;2007年

4 白毅;人腦膠質(zhì)瘤基礎與應用研究喜結(jié)“九大碩果”[N];中國醫(yī)藥報;2006年

5 王德江；劉藏；王貴懷；曹勇；王新生；肖新如;交流最新進展 提高診治水平[N];中國醫(yī)藥報;2005年

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1 董軍;CUL4B在神經(jīng)膠質(zhì)細胞瘤中的作用研究[D];山東大學;2015年

2 張睿;循環(huán)miR-221/222在膠質(zhì)瘤診斷與預后中的價值與基于CED的中樞神經(jīng)系統(tǒng)給藥新方法的研究[D];山東大學;2015年

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5 廖紅展;鋅指轉(zhuǎn)錄因子SNAI2在miR-203的影響下通過上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化參與膠質(zhì)瘤耐藥機制的調(diào)節(jié)[D];南方醫(yī)科大學;2015年

6 潘俊;IRG1促進膠質(zhì)瘤增殖的作用機制及臨床意義[D];南方醫(yī)科大學;2015年

7 鄭傳宜;膠質(zhì)瘤中GLUT3基因異常表達的意義及其相關調(diào)控機制[D];南方醫(yī)科大學;2015年

8 徐紅超;氬氦冷凍消融聯(lián)合GM-CSF治療膠質(zhì)瘤小鼠的療效及其對小鼠脾臟樹突狀細胞免疫功能影響[D];南方醫(yī)科大學;2015年

9 黃素寧;TNFRSF6B在膠質(zhì)瘤中的表達及對膠質(zhì)瘤細胞增殖及凋亡的作用研究[D];南方醫(yī)科大學;2015年

10 熊偉;GBE1在人腦膠質(zhì)細胞瘤中的表達及干預實驗研究[D];第四軍醫(yī)大學;2015年

中國碩士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 張大慶;單核細胞趨化蛋白-1在骨髓間充質(zhì)干細胞向膠質(zhì)瘤細胞趨化中的作用研究[D];大連醫(yī)科大學;2012年

2 張靜文;T細胞過繼免疫治療小鼠腦膠質(zhì)瘤原位模型的研究[D];河北醫(yī)科大學;2015年

3 洪宇;膠質(zhì)瘤瘤周水腫、病理級別、Ki-67表達三者相關性研究[D];石河子大學;2015年

4 姬云翔;磷酸化Cx43蛋白在人膠質(zhì)瘤細胞中表達及其與腫瘤細胞增殖相關性研究[D];石河子大學;2015年

5 朱峰;OPN的異常表達與膠質(zhì)瘤的相關性研究[D];河北醫(yī)科大學;2015年

6 劉兵;SENP1表達水平對人腦膠質(zhì)瘤發(fā)生發(fā)展的作用機制及其相關性[D];河北醫(yī)科大學;2015年

7 李文華;Slit2/Robo1在人腦膠質(zhì)瘤中的表達及臨床意義[D];河北醫(yī)科大學;2015年

8 楊睿;組蛋白去乙�；窰DAC9在膠質(zhì)瘤細胞增殖中的作用及機制研究[D];西南大學;2015年

9 李鵬存;膠質(zhì)瘤患者血漿中microRNAs的異常表達及臨床意義[D];天津醫(yī)科大學;2013年

10 梁英;三株海洋細菌抗膠質(zhì)瘤活性成分的研究[D];浙江大學;2016年

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