本文關(guān)鍵詞：小分子TRKs抑制劑對膠質(zhì)瘤細(xì)胞生物學(xué)行為的影響

  更多相關(guān)文章： 原肌球蛋白受體激酶(TRKs)抑制劑 抗腫瘤 分子靶向治療

【摘要】：背景:膠質(zhì)瘤是威脅人類健康和生命的重大疾病,由于其較高的致死率,抗膠質(zhì)瘤藥物的研究一直是腫瘤治療研究的難點(diǎn),而新型抗腫瘤藥物因其特異性高且毒副作用小更是備受關(guān)注。分子靶向治療是通過靶向抑制腫瘤發(fā)生發(fā)展的重要信號通路來阻止腫瘤細(xì)胞的生長并降低對正常細(xì)胞的毒性。原肌球蛋白受體激酶家族(tropomyosin receptor kinase,TRKs)是酪氨酸激酶家族的一員,是神經(jīng)生長因子受體。其與神經(jīng)生長因子結(jié)合后可以激活細(xì)胞內(nèi)包括PI3K/AKT/m TOR、MAPK/ERK等在內(nèi)的一系列信號通路級聯(lián)反應(yīng),進(jìn)而引起細(xì)胞表型轉(zhuǎn)變。原肌球蛋白受體激酶抑制劑在多種腫瘤中發(fā)揮抗腫瘤作用。有報道稱TRKs家族在膠質(zhì)瘤細(xì)胞中表達(dá)異常,是治療膠質(zhì)瘤的潛在靶點(diǎn)。目的:對新合成的原肌球蛋白受體激酶(tropomyosin receptor kinase,TRKs)抑制劑進(jìn)行初步的活性篩選,進(jìn)一步探討候選化合物對膠質(zhì)瘤細(xì)胞生物學(xué)行為產(chǎn)生影響的分子機(jī)理。方法:用不同濃度TRKs抑制劑處理細(xì)胞,通過膠質(zhì)瘤U251、U87細(xì)胞及人臍帶血上皮細(xì)胞HUVEC的增殖實(shí)驗(yàn)對合成的原肌球蛋白受體激酶抑制劑進(jìn)行初步的藥物活性篩選,分析并篩選出抗腫瘤活性高、細(xì)胞毒性低的候選化合物。選取抗腫瘤增殖活性較好的化合物采用ADP-Glo Kinase Assay的方法對其做進(jìn)一步TRKA激酶抑制活性的評價。采用細(xì)胞化學(xué)染色法分析細(xì)胞形態(tài)學(xué)和凋亡的變化;克隆形成實(shí)驗(yàn)觀察TRKs抑制劑對腫瘤增殖能力的影響;用候選化合物處理膠質(zhì)瘤細(xì)胞,Hoechst33258/PI雙染及TUNEL染色法檢測其細(xì)胞死亡及DNA斷裂情況,流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞周期分布及早期凋亡AnnexinⅤ-FITC水平的變化;Western Blot分析藥物處理后膠質(zhì)瘤細(xì)胞內(nèi)抗凋亡蛋白(pro-Caspase3、Bcl-2)、凋亡蛋白(BAD)及AKT磷酸化水平,初步探討抗腫瘤機(jī)制。結(jié)果:成功篩選出特異性好、抗腫瘤活性高的化合物,并評價了其對TRKA激酶的抑制活性。細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)及克隆形成實(shí)驗(yàn)表明TRKs抑制劑候選化合物(6號化合物)能顯著抑制膠質(zhì)瘤細(xì)胞的增殖,在濃度約為9μM時抑制率達(dá)到50%,且對正常細(xì)胞的毒副作用低于陽性對照組;Hoechst33258/PI雙染及TUNEL染色法分析發(fā)現(xiàn)膠質(zhì)瘤細(xì)胞出現(xiàn)明顯的凋亡特征:胞質(zhì)皺縮,核膜裂解、邊緣化,DNA斷裂等;流式檢測AnnexinⅤ-FITC的水平及細(xì)胞周期分布的結(jié)果表明此化合物可以阻滯膠質(zhì)瘤的細(xì)胞周期、促進(jìn)凋亡蛋白的表達(dá),隨后的Western Blot分析也證實(shí)了候選化合物處理后,抗凋亡蛋白pro-Caspase3和Bcl-2的表達(dá)降低,凋亡蛋白BAD的表達(dá)顯著升高,而TRKs受體介導(dǎo)的下游信號通路AKT磷酸化水平降低,提示6號候選化合物有可能是通過抑制AKT介導(dǎo)的下游信號通路途徑來發(fā)揮抗腫瘤作用的。結(jié)論:6號化合物是一種特異性好、抗腫瘤活性較高的小分子TRKs抑制劑,通過抑制TRKs激酶活性,調(diào)節(jié)PI3K-AKT信號通路、降低AKT的磷酸化水平,進(jìn)而抑制抗凋亡蛋白表達(dá)水平并增加促凋亡蛋白表達(dá)水平,最終阻滯細(xì)胞周期、促進(jìn)細(xì)胞凋亡,從而發(fā)揮抗腫瘤作用。研究結(jié)果有望為臨床治療膠質(zhì)瘤提供新的思路。
【關(guān)鍵詞】：原肌球蛋白受體激酶(TRKs)抑制劑 抗腫瘤 分子靶向治療
【學(xué)位授予單位】：中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R739.41
【目錄】：

• 英文縮略詞表5-7
• 摘要7-9
• Abstract9-11
• 前言11-14
• 第一章 原肌球蛋白受體激酶抑制劑抗腫瘤活性的篩選14-29
• 一、實(shí)驗(yàn)材料14-15
• 1.1 細(xì)胞和藥物14
• 1.2 主要儀器與試劑14-15
• 1.3 試劑的配制15
• 二、實(shí)驗(yàn)方法15-21
• 2.1 細(xì)胞培養(yǎng)與傳代15-16
• 2.2 化合物的設(shè)計合成16-19
• 2.3 TRKs抑制劑抗腫瘤活性的篩選19
• 2.4 TRKA激酶抑制活性的篩選19-21
• 2.5 統(tǒng)計學(xué)分析21
• 三、實(shí)驗(yàn)結(jié)果21-27
• 3.1 MTT法檢測12個TRKs抑制劑及陽性對照藥對膠質(zhì)瘤細(xì)胞生長的影響21-24
• 3.2 TRKs抑制劑對TRKA激酶的抑制活性影響24-27
• 四、討論27-29
• 第二章 候選化合物對膠質(zhì)瘤增殖作用的影響29-38
• 一、實(shí)驗(yàn)材料29-30
• 1.1 細(xì)胞和藥物29
• 1.2 主要儀器與試劑29-30
• 1.3 試劑的配制30
• 二、實(shí)驗(yàn)方法30-31
• 2.1 細(xì)胞化學(xué)染色法分析候選化合物對細(xì)胞活力的影響30
• 2.2 MTT檢測細(xì)胞增殖30-31
• 2.3 克隆形成實(shí)驗(yàn)31
• 2.4 候選化合物干預(yù)細(xì)胞后對周期分布的影響31
• 2.5 統(tǒng)計學(xué)分析31
• 三、實(shí)驗(yàn)結(jié)果31-36
• 3.1 候選化合物對細(xì)胞形態(tài)的影響31-32
• 3.2 MTT檢測候選化合物對細(xì)胞增殖的影響32-33
• 3.3 克隆形成實(shí)驗(yàn)33-34
• 3.4 藥物處理后對細(xì)胞周期的影響34-36
• 四、討論36-38
• 第三章 候選化合物對U251膠質(zhì)瘤凋亡作用的研究38-52
• 一、實(shí)驗(yàn)材料38-40
• 1.1 細(xì)胞和藥物38
• 1.2 主要儀器與試劑38-39
• 1.3 試劑配制39-40
• 二、實(shí)驗(yàn)方法40-44
• 2.1 Hoechst33258及PI雙染色觀察細(xì)胞凋亡變化40
• 2.2 AnnexinⅤ-FITC凋亡檢測40-41
• 2.3 TUNEL檢測細(xì)胞DNA斷裂41
• 2.4 Western Blot檢測凋亡蛋白41-44
• 2.5 統(tǒng)計學(xué)分析44
• 三、實(shí)驗(yàn)結(jié)果44-48
• 3.1 Hoechst33258及PI雙染觀察U251細(xì)胞的形態(tài)學(xué)變化44-45
• 3.2 AnnexinⅤ-FITC標(biāo)記檢測候選化合物處理的U251細(xì)胞凋亡45-46
• 3.3 TUNEL檢測候選化合物作用后U251細(xì)胞DNA斷裂情況46-47
• 3.4 Western Blot檢測凋亡相關(guān)蛋白的表達(dá)水平47-48
• 四、討論48-52
• 第四章 總結(jié)52-53
• 參考文獻(xiàn)53-59
• 個人簡歷59-62
• 致謝62

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1 徐俊杰;于洪泉;國巍;趙偉;金宏;溫娜;齊玲;;西蘭花多肽對大鼠C6膠質(zhì)瘤細(xì)胞生長的影響[J];中風(fēng)與神經(jīng)疾病雜志;2012年11期

2 徐俊杰;于洪泉;趙偉;金宏;溫娜;齊玲;劉興吉;;西蘭花多肽對C6膠質(zhì)瘤細(xì)胞的誘導(dǎo)凋亡作用[J];吉林大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版);2013年01期

3 仝海波,江澄川,唐鎮(zhèn)生,金一尊;膠質(zhì)瘤細(xì)胞化學(xué)增敏作用實(shí)驗(yàn)研究[J];山西臨床醫(yī)藥;2000年07期

4 李嗍,王楓,繆珊,駱文靜;過量鋅對鼠膠質(zhì)瘤細(xì)胞體外生長的影響[J];解放軍預(yù)防醫(yī)學(xué)雜志;2001年04期

5 梁一鳴,郭國慶,鄭少俊,沈偉哉;膠質(zhì)瘤血管內(nèi)皮生長因子表達(dá)的調(diào)節(jié)[J];臨床與實(shí)驗(yàn)病理學(xué)雜志;2001年02期

6 曲元明,韓韜,李桂林,王成偉;血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子抗體對膠質(zhì)瘤生長的影響[J];山東醫(yī)科大學(xué)學(xué)報;2001年02期

7 黃強(qiáng),董軍;膠質(zhì)瘤的分子外科治療[J];中國微侵襲神經(jīng)外科雜志;2001年04期

8 葉明,周岱,周幽心,王瑋,傅建新,黃煜倫;血管內(nèi)皮生長因子在膠質(zhì)瘤中的表達(dá)[J];腫瘤;2002年06期

9 顧宇翔,陳銜城,王宇倩;膠質(zhì)瘤對親細(xì)胞非均質(zhì)分子脂質(zhì)和幾種藥物敏感性的比較[J];復(fù)旦學(xué)報(醫(yī)學(xué)版);2003年02期

10 王成偉 ,劉福生 ,曲元明 ,李桂林;血管內(nèi)皮生長因子抗體抑制膠質(zhì)瘤生長的實(shí)驗(yàn)研究[J];中華神經(jīng)外科雜志;2003年01期

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1 李飛;李梅;盧佳友;朱剛;林江凱;孟輝;吳南;陳志;馮華;;脂質(zhì)微區(qū)干擾劑甲基-β-環(huán)糊精影響C6膠質(zhì)瘤細(xì)胞侵襲和遷移的體外實(shí)驗(yàn)研究[A];中國醫(yī)師協(xié)會神經(jīng)外科醫(yī)師分會第四屆全國代表大會論文匯編[C];2009年

2 吳安華;王運(yùn)杰;Ohlfest JR;Wei Chen;Low WC;;膠質(zhì)瘤的生物治療-從實(shí)驗(yàn)室到臨床[A];中華醫(yī)學(xué)會神經(jīng)外科學(xué)分會第九次學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2010年

3 徐宏;韓楊云;孫中書;李新軍;;與膠質(zhì)瘤代謝通路相關(guān)的候選基因篩選[A];中華醫(yī)學(xué)會神經(jīng)外科學(xué)分會第九次學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2010年

4 潘冬生;;多基因修飾膠質(zhì)瘤細(xì)胞疫苗的抗腫瘤免疫反應(yīng)[A];中國醫(yī)師協(xié)會神經(jīng)外科醫(yī)師分會第六屆全國代表大會論文匯編[C];2011年

5 俞文華;車志豪;張祖勇;許培源;陸鏞民;傅林;朱強(qiáng);陳鋒;杜權(quán);;骨橋蛋白在膠質(zhì)瘤細(xì)胞中的表達(dá)及其信號傳導(dǎo)途徑[A];2005年浙江省神經(jīng)外科學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2005年

6 張震;徐克;;低強(qiáng)度超聲誘導(dǎo)C6膠質(zhì)瘤細(xì)胞凋亡的體外實(shí)驗(yàn)研究[A];中華醫(yī)學(xué)會第十三次全國超聲醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2013年

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9 楊孔賓;趙世光;劉炳學(xué);陳曉豐;戴欽舜;;K~+通道阻斷劑四乙胺對大鼠膠質(zhì)瘤細(xì)胞的增殖和凋亡影響[A];中國醫(yī)師協(xié)會神經(jīng)外科醫(yī)師分會第四屆全國代表大會論文匯編[C];2009年

10 黃強(qiáng);;膠質(zhì)瘤生成細(xì)胞研究[A];第三屆中國腫瘤學(xué)術(shù)大會教育論文集[C];2004年

中國重要報紙全文數(shù)據(jù)庫 前5條

1 衣曉峰　馮宇曦;中藥三氧化二砷有望成為治療膠質(zhì)瘤新藥[N];中國醫(yī)藥報;2011年

2 記者 匡遠(yuǎn)深;讓膠質(zhì)瘤干細(xì)胞不再“繁殖”[N];健康報;2011年

3 張獻(xiàn)懷　張文;瘤區(qū)埋雷 持續(xù)殺傷[N];健康報;2007年

4 白毅;人腦膠質(zhì)瘤基礎(chǔ)與應(yīng)用研究喜結(jié)“九大碩果”[N];中國醫(yī)藥報;2006年

5 王德江；劉藏；王貴懷；曹勇；王新生；肖新如;交流最新進(jìn)展 提高診治水平[N];中國醫(yī)藥報;2005年

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1 董軍;CUL4B在神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞瘤中的作用研究[D];山東大學(xué);2015年

2 張睿;循環(huán)miR-221/222在膠質(zhì)瘤診斷與預(yù)后中的價值與基于CED的中樞神經(jīng)系統(tǒng)給藥新方法的研究[D];山東大學(xué);2015年

3 許森林;ALDH1A1在膠質(zhì)瘤侵襲和結(jié)直腸癌轉(zhuǎn)移中的作用和機(jī)制[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2015年

4 王嘯;靶向嵌段共聚物膠束在膠質(zhì)瘤磁共振成像、藥物輸送及治療的應(yīng)用[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2015年

5 廖紅展;鋅指轉(zhuǎn)錄因子SNAI2在miR-203的影響下通過上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化參與膠質(zhì)瘤耐藥機(jī)制的調(diào)節(jié)[D];南方醫(yī)科大學(xué);2015年

6 潘俊;IRG1促進(jìn)膠質(zhì)瘤增殖的作用機(jī)制及臨床意義[D];南方醫(yī)科大學(xué);2015年

7 鄭傳宜;膠質(zhì)瘤中GLUT3基因異常表達(dá)的意義及其相關(guān)調(diào)控機(jī)制[D];南方醫(yī)科大學(xué);2015年

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9 黃素寧;TNFRSF6B在膠質(zhì)瘤中的表達(dá)及對膠質(zhì)瘤細(xì)胞增殖及凋亡的作用研究[D];南方醫(yī)科大學(xué);2015年

10 熊偉;GBE1在人腦膠質(zhì)細(xì)胞瘤中的表達(dá)及干預(yù)實(shí)驗(yàn)研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2015年

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1 張大慶;單核細(xì)胞趨化蛋白-1在骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞向膠質(zhì)瘤細(xì)胞趨化中的作用研究[D];大連醫(yī)科大學(xué);2012年

2 張靜文;T細(xì)胞過繼免疫治療小鼠腦膠質(zhì)瘤原位模型的研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2015年

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9 李鵬存;膠質(zhì)瘤患者血漿中microRNAs的異常表達(dá)及臨床意義[D];天津醫(yī)科大學(xué);2013年

10 梁英;三株海洋細(xì)菌抗膠質(zhì)瘤活性成分的研究[D];浙江大學(xué);2016年

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本文編號：624688