本文關(guān)鍵詞：14-3-3θ對(duì)乳腺癌惡性生物學(xué)行為的影響及其機(jī)制研究

  更多相關(guān)文章： 14-3-3θ 乳腺癌 耐藥性 惡性生物學(xué)

【摘要】：研究背景近幾年,隨著人們生活水平的提高,乳腺癌的發(fā)病率也迅速的增長(zhǎng)著,目前乳腺癌已逐步成為女性發(fā)病率最高的惡性腫瘤之一,對(duì)女性的健康造成嚴(yán)重危害[1]。乳腺癌的治療模式隨著循證醫(yī)學(xué)和分子生物學(xué)的飛速發(fā)展,已經(jīng)從傳統(tǒng)的手術(shù)治療轉(zhuǎn)變?yōu)楝F(xiàn)在的多種方式綜治療治療,乳腺癌患者的預(yù)后得到顯著改善。但是由于乳腺癌細(xì)胞的侵襲遷移和對(duì)靶向藥物及化療藥物的耐藥,導(dǎo)致乳腺癌患者最終復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移。所以尋找乳腺癌有效的治療靶點(diǎn)和預(yù)后預(yù)測(cè)因子,將會(huì)為乳腺癌的治療提供新的策略。14-3-3蛋白家族廣泛表達(dá)于真核生物細(xì)胞,是一類(lèi)高度保守的小分子多功能酸性二聚體蛋白。14-3-3蛋白家族包括由七個(gè)不同基因編碼而成的七個(gè)亞型(β、γ、ε、σ、ε、ζ和δ),它們?cè)谡{(diào)控細(xì)胞內(nèi)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、新陳代謝、細(xì)胞周期與凋亡等方面發(fā)揮作用[2]。現(xiàn)有研究表明,14-3-3蛋白家族的七個(gè)亞型中唯有14-3-3θ可以通過(guò)減少真核細(xì)胞核輸出核轉(zhuǎn)錄因子kappa B(NF-κB)從而發(fā)揮對(duì)腫瘤的抑制作用[3],其他亞型分別與不同腫瘤細(xì)胞的侵襲、增殖、遷移正相關(guān)[4]。腦膜瘤中14-3-3θ亞型高表達(dá),并隨著腦膜瘤的惡性程度升高其表達(dá)水平逐步增加,14-3-3θ與腦膜瘤的惡化相關(guān)[5]。有研究提示14-3-3θ的表達(dá)與乳腺癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移正相關(guān),推測(cè)14-3-3θ可能是乳腺癌侵襲轉(zhuǎn)移的一個(gè)潛在預(yù)測(cè)分子[6]。但是14-3-3θ對(duì)乳腺癌生物學(xué)行為的影響及其潛在的分子機(jī)制仍不明確。那么14-3-3θ對(duì)乳腺癌細(xì)胞的增殖、周期和凋亡有何影響?14-3-3θ與乳腺癌的預(yù)后有無(wú)關(guān)聯(lián)?14-3-3θ能否成為乳腺癌新的治療靶點(diǎn)?帶著這些問(wèn)題,我們首先構(gòu)建并篩選了過(guò)表達(dá)14-3-3θ的乳腺癌細(xì)胞,然后進(jìn)行了14-3-3θ對(duì)乳腺癌細(xì)胞生物學(xué)行為影響及其機(jī)制的探索。研究方法和結(jié)果1.構(gòu)建并篩選過(guò)表達(dá)14-3-3θ的乳腺癌細(xì)胞系:將訂購(gòu)的p ENTR 3C DUAL載體中14-3-3θ基因重組至真核表達(dá)質(zhì)粒載體pc DNA4.0中,用重組后的真核過(guò)表達(dá)載體pc DNA4.0-14-3-3θ轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞,western blot進(jìn)行鑒定,將重組成功的真核表達(dá)載體pc DNA4.0-14-3-3θ轉(zhuǎn)染AU-565、MCF-7和BT-474,抗生素篩選,經(jīng)過(guò)篩選的乳腺癌細(xì)胞通過(guò)western blot鑒定,成功構(gòu)建過(guò)表達(dá)14-3-3θ的乳腺癌細(xì)胞系。2.14-3-3θ對(duì)乳腺癌細(xì)胞生物學(xué)行為影響的研究:(1)western blot實(shí)驗(yàn)檢測(cè)14-3-3θ在五株乳腺癌細(xì)胞系中的表達(dá)水平(2)MTT實(shí)驗(yàn)分別檢測(cè)MCF-7和AU-565過(guò)表達(dá)14-3-3ζ后的細(xì)胞增殖活性的變化;(3)平板克隆實(shí)驗(yàn)分別檢測(cè)MCF-7和AU-565過(guò)表達(dá)14-3-3θ后克隆形成能力的變化;(4)流式細(xì)胞儀分別檢測(cè)MCF-7和AU-565過(guò)表達(dá)14-3-3θ后細(xì)胞凋亡的差異變化;(5)劃痕實(shí)驗(yàn)分別檢測(cè)MCF-7和AU-565過(guò)表達(dá)14-3-3θ后細(xì)胞遷移能力的變化;(6)分別通過(guò)用過(guò)表達(dá)14-3-3θ的乳腺癌細(xì)胞MCF-7和AU-565荷瘤裸鼠,觀察實(shí)驗(yàn)14-3-3θ表達(dá)升高與否對(duì)裸鼠移植瘤生長(zhǎng)的作用,取瘤體行免疫組織化學(xué)染色,觀察相應(yīng)指標(biāo)的變化。結(jié)果:14-3-3θ在五株乳腺癌細(xì)胞系中表達(dá)存在差異,這種差異可能和乳腺癌細(xì)胞的惡性程度相關(guān)。14-3-3θ的表達(dá)升高可以促進(jìn)乳腺癌細(xì)胞增殖、遷移、克隆形成能力、減少乳腺癌細(xì)胞的凋亡以及促進(jìn)裸鼠移植瘤的生長(zhǎng),綜上所述,14-3-3θ可以促進(jìn)乳腺癌的惡性生物學(xué)行為。MCF-7和AU-565過(guò)表達(dá)14-3-3θ后對(duì)阿霉素,他莫昔芬,赫賽汀敏感性的變化研究:細(xì)胞殺傷曲線分別檢測(cè)MCF-7和AU-565過(guò)表達(dá)14-3-3θ后對(duì)不同濃度梯度阿霉素,他莫昔芬,赫賽汀敏感性的變化。結(jié)果:14-3-3θ表達(dá)升高可以降低MCF-7對(duì)阿霉素的敏感性,能夠降低ER陽(yáng)性乳腺癌細(xì)胞MCF-7對(duì)他莫昔芬的敏感性,還可以降低HER-2陽(yáng)性乳腺癌細(xì)胞AU-565對(duì)赫賽汀的耐藥性。14-3-3θ過(guò)表達(dá)引起HER-2陽(yáng)性乳腺癌細(xì)胞AU-565對(duì)赫賽汀的敏感性差異最為明顯。3.14-3-3θ表達(dá)升高引起乳腺癌對(duì)阿霉素、他莫昔芬及赫賽汀敏感性降低的機(jī)制初探:(1)western blot檢測(cè)14-3-3ζ表達(dá)升高與否對(duì)AU-565和MCF-7對(duì)m TOR、p-m TOR、Akt、p-Akt等蛋白表達(dá)水平的影響。用赫賽汀分別處理表達(dá)不同水平14-3-3θ的AU-565,western blot檢測(cè)Bcl-2、Bax和PARP等相關(guān)蛋白表達(dá)的變化;(2)分別用表達(dá)不同水平14-3-3ζ的HER-2陽(yáng)性乳腺癌細(xì)胞BT-474注射裸鼠成瘤,然后給予裸鼠赫賽汀處理,觀兩組裸鼠瘤體對(duì)赫賽汀治療的敏感性,取瘤體免疫組織化學(xué)染色觀察相應(yīng)蛋白的表達(dá)差異。結(jié)果:14-3-3θ降低乳腺癌細(xì)胞對(duì)阿霉素、他莫昔芬及赫賽汀的敏感性作用可能與Akt和m TOR的活化增多有關(guān),其中14-3-3θ的過(guò)表達(dá)能夠下調(diào)HER-2陽(yáng)性乳腺癌對(duì)赫賽汀的敏感性很可能與Akt和m TOR的活化增多,凋亡相關(guān)蛋白Bcl-2與PARP的表達(dá)升高,Bax表達(dá)下降有關(guān)。結(jié)論1.五株乳腺癌細(xì)胞系14-3-3θ的表達(dá)水平存在差異,這可能與乳腺癌細(xì)胞的惡性程度相關(guān),有待進(jìn)一步研究。2.14-3-3ζ可以促進(jìn)乳腺癌細(xì)胞的惡性生物學(xué)行為。3.14-3-3θ表達(dá)升高可以在一定程度上降低乳腺癌細(xì)胞對(duì)阿霉素、他莫昔芬及赫賽汀抗治療的敏感性,其中赫賽汀最為明顯,14-3-3ζ這一作用機(jī)制可能與Akt-m TOR通路的活化增加有關(guān)。
【關(guān)鍵詞】：14-3-3θ 乳腺癌 耐藥性 惡性生物學(xué)
【學(xué)位授予單位】：第四軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類(lèi)號(hào)】：R737.9
【目錄】：

• 縮略語(yǔ)表5-7
• 中文摘要7-10
• 英文摘要10-13
• 前言13-15
• 文獻(xiàn)回顧15-21
• 1 14-3-3 蛋白的分子結(jié)構(gòu)15-17
• 2 14-3-3 蛋白的生物學(xué)功能17
• 3 14-3-3 與腫瘤17-21
• 實(shí)驗(yàn)一 14-3-3θ 基因過(guò)表達(dá)載體的構(gòu)建及其過(guò)表達(dá)乳腺癌細(xì)胞株的建立21-33
• 引言21-22
• 1 材料22-23
• 2 方法23-27
• 3 結(jié)果27-31
• 4 討論31-33
• 實(shí)驗(yàn)二 14-3-3θ 過(guò)表達(dá)對(duì)乳腺癌惡性生物學(xué)行為的影響33-50
• 引言33-34
• 1 材料34-35
• 2 方法35-39
• 3 結(jié)果39-48
• 4 討論48-50
• 實(shí)驗(yàn)三 初探 14-3-3θ 表達(dá)升高引起乳腺癌細(xì)胞對(duì)赫賽汀敏感性降低的分子機(jī)制50-59
• 引言50-51
• 1 材料51-52
• 2 方法52-55
• 3 結(jié)果55-57
• 4 討論57-59
• 全文總結(jié)59-61
• 1. 14-3-3θ 基因過(guò)表達(dá)載體的構(gòu)建及其過(guò)表達(dá)乳腺癌細(xì)胞株的建立。59
• 2. 14-3-3θ 過(guò)表達(dá)對(duì)乳腺癌惡性生物學(xué)行為的影響59
• 3. 初探 14-3-3θ表達(dá)升高引起乳腺癌細(xì)胞對(duì)赫賽汀敏感性降低的分子機(jī)制59-61
• 參考文獻(xiàn)61-68
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷和研究成果68-69
• 致謝69

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中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 黃嘯原;用“印度閱兵”形容乳腺癌合適嗎?[J];診斷病理學(xué)雜志;2001年02期

2 張嘉慶,王殊,喬新民;乳腺癌的現(xiàn)狀和遠(yuǎn)景[J];中華外科雜志;2002年03期

3 張維彬,汪波,石靈春;中醫(yī)藥在現(xiàn)代乳腺癌治療中的運(yùn)用[J];中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合急救雜志;2002年01期

4 薛志勇;食物與乳腺癌[J];山東食品科技;2002年04期

5 王旬果,王建軍,鄭國(guó)華;乳腺癌相關(guān)標(biāo)志物的研究進(jìn)展[J];山東醫(yī)藥;2002年33期

6 陸尚聞;;男人也患乳腺癌[J];環(huán)境;2003年12期

7 ;新技術(shù)清晰拍攝早期乳腺癌細(xì)胞[J];上海生物醫(yī)學(xué)工程;2005年04期

8 田富國(guó);郭向陽(yáng);張華一;;乳腺癌診治研究新進(jìn)展[J];腫瘤研究與臨床;2005年S1期

9 馬濤,谷俊朝;血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子與乳腺癌的臨床研究進(jìn)展[J];國(guó)外醫(yī)學(xué)(外科學(xué)分冊(cè));2005年01期

10 郭慶良,谷俊朝;乳腺癌和瘦素相關(guān)性研究進(jìn)展[J];國(guó)外醫(yī)學(xué).外科學(xué)分冊(cè);2005年03期

中國(guó)重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 于永利;;抗乳腺癌免疫治療融合蛋白[A];中國(guó)免疫學(xué)會(huì)第四屆學(xué)術(shù)大會(huì)會(huì)議議程及論文摘要集[C];2002年

2 郭紅飛;;中醫(yī)治療乳腺癌的策略[A];江西省中醫(yī)、中西醫(yī)結(jié)合腫瘤學(xué)術(shù)交流會(huì)論文集[C];2012年

3 龐朋沙;伍會(huì)健;;乳腺癌治療靶標(biāo)的研究進(jìn)展[A];北方遺傳資源的保護(hù)與利用研討會(huì)論文匯編[C];2010年

4 陸勁松;邵志敏;吳炅;韓企夏;沈鎮(zhèn)宙;;新型維甲酸抑制乳腺癌細(xì)胞的生長(zhǎng)及誘導(dǎo)凋亡的機(jī)制研究[A];2000全國(guó)腫瘤學(xué)術(shù)大會(huì)論文集[C];2000年

5 劉愛(ài)國(guó);胡冰;;乳腺癌臨床治療進(jìn)展[A];安徽省抗癌協(xié)會(huì)第四次代表大會(huì)暨乳腺癌、肺癌專(zhuān)業(yè)委員會(huì)成立會(huì)議、安徽省腫瘤防治進(jìn)展學(xué)術(shù)研討會(huì)論文匯編[C];2001年

6 張嘉慶;王殊;喬新民;;乳腺癌的現(xiàn)狀和遠(yuǎn)景[A];第一屆全國(guó)中西醫(yī)結(jié)合乳腺疾病學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2002年

7 劉清俊;;乳腺癌綜合治療的新進(jìn)展[A];山西省抗癌協(xié)會(huì)第六屆腫瘤學(xué)術(shù)交流會(huì)論文匯編[C];2003年

8 邵志敏;;21世紀(jì)乳腺癌治療的展望[A];第三屆中國(guó)腫瘤學(xué)術(shù)大會(huì)教育論文集[C];2004年

9 陳松旺;張明;;乳腺癌治療的回顧與展望[A];西部地區(qū)腫瘤學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2004年

10 白霞;傅建新;丁凱陽(yáng);王兆鉞;阮長(zhǎng)耿;;組織因子途徑抑制物-2在乳腺癌細(xì)胞中的表達(dá)研究[A];第10屆全國(guó)實(shí)驗(yàn)血液學(xué)會(huì)議論文摘要匯編[C];2005年

中國(guó)重要報(bào)紙全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 ;血檢有望揭示乳腺癌治療效果[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報(bào);2004年

2 記者 鄭曉春;乳腺癌細(xì)胞擴(kuò)散基因被找到[N];科技日?qǐng)?bào);2007年

3 中國(guó)軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院腫瘤中心主任 宋三泰;乳腺癌有了新療法[N];中國(guó)婦女報(bào);2002年

4 王艷紅;抑制ＤＮＡ修補(bǔ)可消滅乳腺癌細(xì)胞[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報(bào);2005年

5 詹建;乳腺癌飲食 兩個(gè)時(shí)期不一樣[N];中國(guó)中醫(yī)藥報(bào);2006年

6 辛君;乳腺癌擴(kuò)散基因“浮出水面”[N];大眾衛(wèi)生報(bào);2009年

7 記者 毛黎;美發(fā)現(xiàn)有效抑制乳腺癌細(xì)胞生長(zhǎng)的分子[N];科技日?qǐng)?bào);2010年

8 記者 吳春燕　通訊員 王麗霞;乳腺癌治療將有新途徑[N];光明日?qǐng)?bào);2011年

9 王樂(lè)　沈基飛;我科學(xué)家發(fā)現(xiàn)導(dǎo)致乳腺癌耐藥的新標(biāo)志物[N];科技日?qǐng)?bào);2011年

10 劉霞;一種天然分子能阻止乳腺癌惡化[N];科技日?qǐng)?bào);2011年

中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 柴紅燕;疾病狀態(tài)下CYP4Z1和4A的生物學(xué)行為及其藥物干預(yù)研究[D];武漢大學(xué);2012年

2 李凱;ID(inhibitor of DNA binding)家族蛋白調(diào)控乳腺細(xì)胞的分化并影響乳腺癌的預(yù)后[D];復(fù)旦大學(xué);2014年

3 江一舟;乳腺癌新輔助化療前后基因變異檢測(cè)及其功能論證[D];復(fù)旦大學(xué);2014年

4 馬邵;酪氨酸去磷酸化增強(qiáng)表皮生長(zhǎng)因子受體在乳腺癌治療中靶向性的研究[D];山東大學(xué);2015年

5 姚若斯;精氨酸甲基轉(zhuǎn)移酶PRMT7誘導(dǎo)乳腺癌細(xì)胞發(fā)生表皮—間質(zhì)轉(zhuǎn)換及轉(zhuǎn)移的作用機(jī)制研究[D];東北師范大學(xué);2015年

6 侯培鋒;α-酮戊二酸二甲酯(DM-2KG)上調(diào)缺氧誘導(dǎo)因子-1α(HIF-1α)誘發(fā)高致瘤性干細(xì)胞樣乳腺癌細(xì)胞機(jī)制研究[D];福建醫(yī)科大學(xué);2014年

7 李麗麗;分泌蛋白SHON調(diào)控乳腺癌細(xì)胞EMT的分子機(jī)制研究[D];東北師范大學(xué);2015年

8 陳麗艷;PI3K抑制劑聯(lián)合組蛋白去乙�；敢种苿⿲�(duì)乳腺癌協(xié)同殺傷作用的分子機(jī)制研究[D];延邊大學(xué);2015年

9 樸俊杰;乳腺癌差異基因篩選及PAIP1對(duì)其生物學(xué)行為的影響[D];延邊大學(xué);2015年

10 余科達(dá);功能性論證雌醌代謝酶基因多態(tài)性與乳腺癌發(fā)生易感性的關(guān)聯(lián)[D];復(fù)旦大學(xué);2009年

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 杜文英;乳腺癌分子亞型的臨床與病理特點(diǎn)[D];鄭州大學(xué);2011年

2 賈曉菲;彩色多普勒超聲與乳腺癌病理及免疫組化指標(biāo)的相關(guān)性研究[D];內(nèi)蒙古大學(xué);2015年

3 靳文;乳腺癌全基因組DNA甲基化修飾的研究[D];內(nèi)蒙古大學(xué);2015年

4 吳坤琳;TLR4/MyD88信號(hào)通路對(duì)乳腺癌侵襲性影響的實(shí)驗(yàn)研究[D];福建醫(yī)科大學(xué);2015年

5 葛廣哲;樹(shù)，

本文編號(hào)：620631