本文關(guān)鍵詞：骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞向甲狀腺濾泡上皮細(xì)胞的誘導(dǎo)分化

  更多相關(guān)文章： 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞 誘導(dǎo) 分化 甲狀腺濾泡細(xì)胞 甲狀腺功能減低 膠原海綿

【摘要】：近年來甲狀腺腫瘤發(fā)病率明顯上升,甲狀腺全切或次全切手術(shù)易導(dǎo)致術(shù)后甲狀腺功能減退癥。如何避免這類永久性甲狀腺功能減低患者長(zhǎng)期服用甲狀腺激素替代治療,成為亟待解決的問題。近年來干細(xì)胞治療成果顯著,且部分研究成果已經(jīng)在臨床試驗(yàn)中得到很好的應(yīng)用,這為治療甲狀腺疾病提供了全新思路。骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(bone mesenchymal stem cells, BMSCs)具有取材方便、體外增殖能力強(qiáng)、可自體回輸從而避免了免疫排斥反應(yīng)等特點(diǎn),是再生醫(yī)學(xué)應(yīng)用前景較為廣泛的種子細(xì)胞。體外研究表明,BMSCs具有多向分化潛能,在特定的誘導(dǎo)條件下可向內(nèi)胚層、中胚層、外胚層三個(gè)胚層的細(xì)胞分化。本實(shí)驗(yàn)利用不同培養(yǎng)條件體外誘導(dǎo)SD大鼠BMSCs分化成甲狀腺濾泡細(xì)胞,探討其對(duì)BMSCs向甲狀腺濾泡細(xì)胞方向分化的誘導(dǎo)作用,為干細(xì)胞源性甲狀腺濾泡細(xì)胞誘導(dǎo)分化研究提供新的實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ?并為探索影響B(tài)MSCs向甲狀腺濾泡細(xì)胞分化的關(guān)鍵因素奠定實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。在誘導(dǎo)分化的基礎(chǔ)上,將BMSCs源性甲狀腺細(xì)胞種植到三維支架材料中,初步探討體外構(gòu)建甲狀腺組織的可行性,以期后期通過移植手段植入大鼠甲狀腺功能減退模型中,檢測(cè)其對(duì)甲狀腺功能減退癥的可能療效。方法：(1)SD大鼠BMSCs分離、純化、培養(yǎng),流式細(xì)胞儀檢測(cè)P3代BMSCs表面標(biāo)記物CD44、CD90及CD34的表達(dá)情況,并檢驗(yàn)其成骨分化及成脂分化能力。(2) FRTL-5 (Fisher Rat Thyroid Cell Line,大鼠甲狀腺細(xì)胞系)凍存、復(fù)蘇及培養(yǎng),細(xì)胞免疫熒光法鑒定轉(zhuǎn)錄因子TTF1、PAX8及甲狀腺特有蛋白質(zhì)NIS、TPO、Tg的表達(dá)。(3) 按不同培養(yǎng)條件進(jìn)行實(shí)驗(yàn)分組。C+F組(共培養(yǎng)+誘導(dǎo)因素組)：將BMSCs與FRTL-5通過transwells小室進(jìn)行間接接觸共培養(yǎng),添加含誘導(dǎo)因子TSH、胰島素、轉(zhuǎn)鐵蛋白、生長(zhǎng)抑素及氫化可的松的誘導(dǎo)分化培養(yǎng)基；C組(共培養(yǎng)組)：將BMSCs與FRTL-5通過transwells小室進(jìn)行間接接觸共培養(yǎng),添加不含誘導(dǎo)因子的培養(yǎng)基；F組(誘導(dǎo)因子組)：將BMSCs直接暴露于含誘導(dǎo)因子TSH、胰島素、轉(zhuǎn)鐵蛋白、生長(zhǎng)抑素及氫化可的松的誘導(dǎo)分化培養(yǎng)基；陰性對(duì)照組：BMSCs;陽性對(duì)照組：FRTL-5。(4) 觀察各實(shí)驗(yàn)組BMSCs向甲狀腺細(xì)胞的分化情況：倒置顯微鏡下觀察共培+誘導(dǎo)因素組、共培組及誘導(dǎo)因素組誘導(dǎo)一周后細(xì)胞形態(tài)的變化；細(xì)胞免疫染色分子層面檢測(cè)甲狀腺特有標(biāo)記物的表達(dá)情況；RT-PCR分析從基因水平檢測(cè)誘導(dǎo)后細(xì)胞內(nèi)甲狀腺細(xì)胞相關(guān)基因水平；電化學(xué)發(fā)光法鑒定誘導(dǎo)后細(xì)胞分泌功能。(5) 用誘導(dǎo)后所得BMSCs源性甲狀腺濾泡細(xì)胞作為種子細(xì)胞,接種于膠原海綿三維支架材料,探索適宜誘導(dǎo)后細(xì)胞生長(zhǎng)的實(shí)驗(yàn)條件。結(jié)果：1、SD大鼠BMSCs (P3)誘導(dǎo)后一周,有如下發(fā)現(xiàn)：(1)免疫熒光分析顯示各實(shí)驗(yàn)組TTF1、PAX8、NIS、TPO、Tg表達(dá)情況不同,其中以共培養(yǎng)+誘導(dǎo)因子組表達(dá)效果較顯著；(2) RT-PCR分析各實(shí)驗(yàn)組檢測(cè)到不同水平的TTF1、PAX8、TSHR、NIS、Tg、 TPO基因,其中以共培養(yǎng)+誘導(dǎo)因子組Tg基因水平最佳；(3)經(jīng)電化學(xué)發(fā)光法檢測(cè),發(fā)現(xiàn)各實(shí)驗(yàn)組可檢測(cè)到的T3、T4水平不同,以共培養(yǎng)+誘導(dǎo)因子組為優(yōu)。2、將該共培養(yǎng)+誘導(dǎo)因子組細(xì)胞移植入膠原海綿支架,發(fā)現(xiàn)膠原海綿有利于該細(xì)胞生長(zhǎng),其接種密度為106個(gè)/ml時(shí),培養(yǎng)時(shí)間以十天為宜。結(jié)論：在體外BMSCs與FRTL-5間接接觸共培養(yǎng)體系中添加TSH、胰島素、轉(zhuǎn)鐵蛋白、生長(zhǎng)抑素及氫化可的松等誘導(dǎo)因子,更有利于誘導(dǎo)產(chǎn)生BMSCs源性甲狀腺濾泡細(xì)胞。膠原海綿三維支架材料適合BMSCs源性甲狀腺濾泡細(xì)胞生長(zhǎng)。
【關(guān)鍵詞】：骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞 誘導(dǎo) 分化 甲狀腺濾泡細(xì)胞 甲狀腺功能減低 膠原海綿
【學(xué)位授予單位】：第二軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R581;R736.1
【目錄】：

• 摘要6-8
• Abstract8-11
• 縮略詞表11-12
• 研究背景12-14
• 一、干細(xì)胞及骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的研究現(xiàn)狀12
• 二、干細(xì)胞體外誘導(dǎo)分化為甲狀腺濾泡細(xì)胞的研究現(xiàn)狀12-14
• 第一部分 大鼠BMSCs、FRTL-5細(xì)胞的培養(yǎng)及鑒定14-25
• 一、前言14-15
• 二、材料和設(shè)備15-17
• 三、實(shí)驗(yàn)方法17-20
• 四、結(jié)果20-23
• 五、討論23-25
• 第二部分 BMSCs向甲狀腺濾泡細(xì)胞方向的誘導(dǎo)分化25-46
• 一、前言25-28
• 二、材料和設(shè)備28-31
• 三、方法31-34
• 四、結(jié)果34-42
• 五、討論42-46
• 第三部分 甲狀腺組織體外構(gòu)建的初步嘗試46-55
• 一、前言46-47
• 二、材料和設(shè)備47-48
• 三、方法48-50
• 四、結(jié)果50-53
• 五、討論53-55
• 全文小結(jié)55-56
• 創(chuàng)新點(diǎn)56-57
• 參考文獻(xiàn)57-64
• 綜述一64-72
• 參考文獻(xiàn)70-72
• 綜述二72-81
• 參考文獻(xiàn)78-81
• 在讀期間發(fā)表論文及獲獎(jiǎng)情況81-82
• 致謝82

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 張弘;蔣寧一;劉生;劉雄英;胡瑩瑩;;小鼠胚胎干細(xì)胞誘導(dǎo)為甲狀腺細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)研究[J];中國(guó)熱帶醫(yī)學(xué);2008年12期

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本文編號(hào)：620871