本文關鍵詞：骨髓間充質(zhì)干細胞向甲狀腺濾泡上皮細胞的誘導分化

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【摘要】：近年來甲狀腺腫瘤發(fā)病率明顯上升,甲狀腺全切或次全切手術易導致術后甲狀腺功能減退癥。如何避免這類永久性甲狀腺功能減低患者長期服用甲狀腺激素替代治療,成為亟待解決的問題。近年來干細胞治療成果顯著,且部分研究成果已經(jīng)在臨床試驗中得到很好的應用,這為治療甲狀腺疾病提供了全新思路。骨髓間充質(zhì)干細胞(bone mesenchymal stem cells, BMSCs)具有取材方便、體外增殖能力強、可自體回輸從而避免了免疫排斥反應等特點,是再生醫(yī)學應用前景較為廣泛的種子細胞。體外研究表明,BMSCs具有多向分化潛能,在特定的誘導條件下可向內(nèi)胚層、中胚層、外胚層三個胚層的細胞分化。本實驗利用不同培養(yǎng)條件體外誘導SD大鼠BMSCs分化成甲狀腺濾泡細胞,探討其對BMSCs向甲狀腺濾泡細胞方向分化的誘導作用,為干細胞源性甲狀腺濾泡細胞誘導分化研究提供新的實驗模型,并為探索影響B(tài)MSCs向甲狀腺濾泡細胞分化的關鍵因素奠定實驗基礎。在誘導分化的基礎上,將BMSCs源性甲狀腺細胞種植到三維支架材料中,初步探討體外構(gòu)建甲狀腺組織的可行性,以期后期通過移植手段植入大鼠甲狀腺功能減退模型中,檢測其對甲狀腺功能減退癥的可能療效。方法：(1)SD大鼠BMSCs分離、純化、培養(yǎng),流式細胞儀檢測P3代BMSCs表面標記物CD44、CD90及CD34的表達情況,并檢驗其成骨分化及成脂分化能力。(2) FRTL-5 (Fisher Rat Thyroid Cell Line,大鼠甲狀腺細胞系)凍存、復蘇及培養(yǎng),細胞免疫熒光法鑒定轉(zhuǎn)錄因子TTF1、PAX8及甲狀腺特有蛋白質(zhì)NIS、TPO、Tg的表達。(3) 按不同培養(yǎng)條件進行實驗分組。C+F組(共培養(yǎng)+誘導因素組)：將BMSCs與FRTL-5通過transwells小室進行間接接觸共培養(yǎng),添加含誘導因子TSH、胰島素、轉(zhuǎn)鐵蛋白、生長抑素及氫化可的松的誘導分化培養(yǎng)基；C組(共培養(yǎng)組)：將BMSCs與FRTL-5通過transwells小室進行間接接觸共培養(yǎng),添加不含誘導因子的培養(yǎng)基；F組(誘導因子組)：將BMSCs直接暴露于含誘導因子TSH、胰島素、轉(zhuǎn)鐵蛋白、生長抑素及氫化可的松的誘導分化培養(yǎng)基；陰性對照組：BMSCs;陽性對照組：FRTL-5。(4) 觀察各實驗組BMSCs向甲狀腺細胞的分化情況：倒置顯微鏡下觀察共培+誘導因素組、共培組及誘導因素組誘導一周后細胞形態(tài)的變化；細胞免疫染色分子層面檢測甲狀腺特有標記物的表達情況；RT-PCR分析從基因水平檢測誘導后細胞內(nèi)甲狀腺細胞相關基因水平；電化學發(fā)光法鑒定誘導后細胞分泌功能。(5) 用誘導后所得BMSCs源性甲狀腺濾泡細胞作為種子細胞,接種于膠原海綿三維支架材料,探索適宜誘導后細胞生長的實驗條件。結(jié)果：1、SD大鼠BMSCs (P3)誘導后一周,有如下發(fā)現(xiàn)：(1)免疫熒光分析顯示各實驗組TTF1、PAX8、NIS、TPO、Tg表達情況不同,其中以共培養(yǎng)+誘導因子組表達效果較顯著；(2) RT-PCR分析各實驗組檢測到不同水平的TTF1、PAX8、TSHR、NIS、Tg、 TPO基因,其中以共培養(yǎng)+誘導因子組Tg基因水平最佳；(3)經(jīng)電化學發(fā)光法檢測,發(fā)現(xiàn)各實驗組可檢測到的T3、T4水平不同,以共培養(yǎng)+誘導因子組為優(yōu)。2、將該共培養(yǎng)+誘導因子組細胞移植入膠原海綿支架,發(fā)現(xiàn)膠原海綿有利于該細胞生長,其接種密度為106個/ml時,培養(yǎng)時間以十天為宜。結(jié)論：在體外BMSCs與FRTL-5間接接觸共培養(yǎng)體系中添加TSH、胰島素、轉(zhuǎn)鐵蛋白、生長抑素及氫化可的松等誘導因子,更有利于誘導產(chǎn)生BMSCs源性甲狀腺濾泡細胞。膠原海綿三維支架材料適合BMSCs源性甲狀腺濾泡細胞生長。
【關鍵詞】：骨髓間充質(zhì)干細胞 誘導 分化 甲狀腺濾泡細胞 甲狀腺功能減低 膠原海綿
【學位授予單位】：第二軍醫(yī)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R581;R736.1
【目錄】：

• 摘要6-8
• Abstract8-11
• 縮略詞表11-12
• 研究背景12-14
• 一、干細胞及骨髓間充質(zhì)干細胞的研究現(xiàn)狀12
• 二、干細胞體外誘導分化為甲狀腺濾泡細胞的研究現(xiàn)狀12-14
• 第一部分 大鼠BMSCs、FRTL-5細胞的培養(yǎng)及鑒定14-25
• 一、前言14-15
• 二、材料和設備15-17
• 三、實驗方法17-20
• 四、結(jié)果20-23
• 五、討論23-25
• 第二部分 BMSCs向甲狀腺濾泡細胞方向的誘導分化25-46
• 一、前言25-28
• 二、材料和設備28-31
• 三、方法31-34
• 四、結(jié)果34-42
• 五、討論42-46
• 第三部分 甲狀腺組織體外構(gòu)建的初步嘗試46-55
• 一、前言46-47
• 二、材料和設備47-48
• 三、方法48-50
• 四、結(jié)果50-53
• 五、討論53-55
• 全文小結(jié)55-56
• 創(chuàng)新點56-57
• 參考文獻57-64
• 綜述一64-72
• 參考文獻70-72
• 綜述二72-81
• 參考文獻78-81
• 在讀期間發(fā)表論文及獲獎情況81-82
• 致謝82

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 張弘;蔣寧一;劉生;劉雄英;胡瑩瑩;;小鼠胚胎干細胞誘導為甲狀腺細胞的實驗研究[J];中國熱帶醫(yī)學;2008年12期

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本文編號：620871