本文關(guān)鍵詞：MiR-138通過下調(diào)ISG15的表達(dá)增強(qiáng)TRAIL誘導(dǎo)肝癌細(xì)胞凋亡的作用

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【摘要】：目的:研究肝癌細(xì)胞系對TRAIL耐藥的機(jī)制,探究ISG15及miR-138在TRAIL耐藥機(jī)制中的作用,進(jìn)一步提高TRAIL對腫瘤細(xì)胞的殺傷作用。方法:首先選取四種肝癌細(xì)胞系LH86、SMMC-7721、HLC-Z01、Huh7細(xì)胞,以不同濃度TRAIL(1ng/ml、5ng/ml、10ng/ml、20ng/ml)處理四種的肝癌細(xì)胞系(4h、6h、8h、12h),MTT實(shí)驗(yàn)檢測細(xì)胞活力,篩選出對TRAIL敏感的肝癌細(xì)胞系及對TRAIL耐藥的肝癌細(xì)胞系。通過定量PCR及western blot實(shí)驗(yàn)檢測ISG15及miR-138在TRAIL敏感細(xì)胞及與TRAIL耐藥細(xì)胞中的表達(dá)差異。利用真核載體構(gòu)建及細(xì)胞轉(zhuǎn)染技術(shù)在TRAIL敏感細(xì)胞中沉默ISG15且在TRAIL耐藥細(xì)胞中過表達(dá)ISG15,通過western blot實(shí)驗(yàn)分析其對TRAIL誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的影響。通過TargetScan預(yù)測分析,ISG15可能是miR-138的靶基因。利用細(xì)胞轉(zhuǎn)染技術(shù)在TRAIL敏感細(xì)胞及耐藥細(xì)胞中過表達(dá)miR-138,通過定量PCR及western blot實(shí)驗(yàn)檢測過表達(dá)miR-138對ISG15表達(dá)的影響,并通過western blot實(shí)驗(yàn)分析其對TRAIL誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的影響。結(jié)果:1.TRAIL有肝癌細(xì)胞凋亡的作用,LH86、SMMC-7721細(xì)胞對TRAIL敏感,Huh7、HLC-Z01細(xì)胞對TRAIL耐藥。當(dāng)TRAIL濃度為10ng/ml,處理時間為8h時效果最佳。2.在TRAIL敏感細(xì)胞中ISG15的表達(dá)水平較TRAIL耐藥細(xì)胞低,而TRAIL敏感細(xì)胞miR-138的本底表達(dá)水平較耐藥細(xì)胞高。3.在敏感細(xì)胞中過表達(dá)ISG15能抑制TRAIL誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的作用,相反,在耐藥細(xì)胞中沉默ISG15能增強(qiáng)TRAIL誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的作用,提示ISG15在TRAIL誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的過程中起調(diào)控作用,能抑制細(xì)胞凋亡。4.在敏感細(xì)胞及耐藥細(xì)胞中過表達(dá)miR-138能夠抑制ISG15的表達(dá),表明ISG15為miR-138的靶基因。5.在敏感細(xì)胞及耐藥細(xì)胞中過表達(dá)miR-138能夠增強(qiáng)TRAIL誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的作用。表明miR-138能調(diào)節(jié)TRAIL誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的作用。6.當(dāng)同時過表達(dá)ISG15及miR-138時,TRAIL誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的效果較本底水平降低。表明miR-138是通過調(diào)控ISG15的表達(dá)增強(qiáng)TRAIL誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的作用。結(jié)論:1.ISG15在TRAIL誘導(dǎo)肝癌細(xì)胞凋亡過程中起重要的調(diào)控作用。2.miR-138通過調(diào)節(jié)ISG15的表達(dá)增強(qiáng)TRAIL誘導(dǎo)肝癌細(xì)胞凋亡的作用。
【關(guān)鍵詞】：肝癌 腫瘤壞死因子相關(guān)誘導(dǎo)凋亡配體 干擾素刺激基因ISG15 微小RNA(miR-138) 腫瘤耐藥
【學(xué)位授予單位】：南華大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R735.7
【目錄】：

• 摘要4-6
• Abstract6-9
• 主要縮略詞中英文對照索引9-12
• 第1章 前言12-18
• 1.1 肝癌概述12-13
• 1.2 TRAIL介紹13-14
• 1.3 ISG15與腫瘤14-15
• 1.4 MiRNA與腫瘤15-18
• 第2章 材料與方法18-28
• 2.1 實(shí)驗(yàn)細(xì)胞18
• 2.2 抗體與其他主要試劑18
• 2.3 溶液配制18
• 2.4 主要實(shí)驗(yàn)儀器18-19
• 2.5 實(shí)驗(yàn)方法19-28
• 2.5.1 細(xì)胞培養(yǎng)凍存及復(fù)蘇19-20
• 2.5.2 MTT實(shí)驗(yàn)檢測細(xì)胞活性20
• 2.5.3 Western Blot實(shí)驗(yàn)20-22
• 2.5.4 RNA提取及定量PCR檢測22-24
• 2.5.5 載體構(gòu)建24-25
• 2.5.6 細(xì)胞轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)25-26
• 2.5.7 數(shù)據(jù)分析26-28
• 第3章 結(jié)果28-34
• 3.1 TRAIL對肝癌細(xì)胞殺傷作用的檢測28-29
• 3.2 ISG15對TRAIL誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的影響29-30
• 3.3 MiR-138與ISG15的關(guān)系30-32
• 3.4 MiR-138對TRAIL誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的影響32-34
• 第4章 討論34-40
• 4.1 分析與討論34-37
• 4.2 本實(shí)驗(yàn)的意義及展望37-40
• 第5章 結(jié)論40-42
• 參考文獻(xiàn)42-48
• 綜述 Micro RNA 在肝癌中的作用48-58
• 參考文獻(xiàn)54-58
• 附錄58-60
• 致謝60

【相似文獻(xiàn)】

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本文編號：618913