本文關(guān)鍵詞：葉酸缺乏聯(lián)合PLK1 siRNA對(duì)胃癌細(xì)胞多態(tài)性的影響

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【摘要】：目的:觀察PLK1 siRNA、葉酸缺乏及其二者聯(lián)合聯(lián)合后對(duì)胃癌細(xì)胞SGC-7901、BGC-823、N87和胃粘膜細(xì)胞GES-1 FR-α表達(dá)、MTHFR多態(tài)性和腫瘤基因Bcl-2、P53的影響,以及在葉酸缺乏環(huán)境得以糾正后,上述影響可否消失;方法:將胃癌細(xì)胞株SGC-7901、BGC-823、N87和胃粘膜細(xì)胞株GES-1分別放置于PLK1 siRNA干擾、葉酸缺乏、PLK1 siRNA干擾聯(lián)合葉酸缺乏以及葉酸缺乏環(huán)境恢復(fù)后再進(jìn)行PLK1 siRNA干擾的條件下培養(yǎng)一段時(shí)間,先通過Real-time PCR檢測各細(xì)胞株FR-α、Bcl-2、P53 m RNA表達(dá);再通過Western blot檢測各細(xì)胞株FR-α、Bcl-2、P53蛋白表達(dá);最后將實(shí)驗(yàn)細(xì)胞采用PCR-RFLP法以及基因芯片技術(shù)檢測MTHFR多態(tài)性;結(jié)果:1、經(jīng)過Real-time PCR檢測,PLK1 siRNA干擾后,實(shí)驗(yàn)細(xì)胞FR-α、Bcl-2m RNA表達(dá)較對(duì)照組明顯降低,而P53 m RNA表達(dá)較對(duì)照組明顯升高(p0.05);而當(dāng)葉酸缺乏時(shí),實(shí)驗(yàn)細(xì)胞FR-αm RNA表達(dá)較對(duì)照組明顯升高(p0.05),但P53、Bcl-2 m RNA表達(dá)無明顯變化;當(dāng)葉酸缺乏聯(lián)合PLK1 siRNA干擾后,二者表現(xiàn)出拮抗作用,但傾向于單獨(dú)PLK1 siRNA干擾時(shí)作用;當(dāng)葉酸缺乏環(huán)境恢復(fù)后,二者的拮抗作用隨之消失。2、經(jīng)Western blot檢測,PLK1 siRNA干擾后,實(shí)驗(yàn)細(xì)胞FR-α、Bcl-2蛋白表達(dá)較對(duì)照組明顯降低,而P53蛋白表達(dá)較對(duì)照組明顯升高(p0.05),當(dāng)葉酸缺乏時(shí),結(jié)果相反;當(dāng)葉酸缺乏聯(lián)合PLK1 siRNA干擾后,二者表現(xiàn)出拮抗作用,但傾向于單獨(dú)PLK1 siRNA干擾時(shí)作用;當(dāng)葉酸缺乏環(huán)境恢復(fù)后,二者的拮抗作用隨之消失;3、成功擴(kuò)增出MTHFR基因含677位點(diǎn)和含1298位點(diǎn)的兩個(gè)片段,通過基因直接測序,在677位點(diǎn)除細(xì)胞N87沒有突變,其余細(xì)胞均由C突變成T,而在1298位點(diǎn),實(shí)驗(yàn)細(xì)胞均未發(fā)生基因突變。結(jié)論:1、PLK1 siRNA以及葉酸缺乏可能通過Bcl-2、P53以及FR-α基因影響胃癌的發(fā)生發(fā)展;2、PLK1 siRNA干擾與葉酸缺乏聯(lián)合時(shí)有拮抗作用,但短暫葉酸缺乏的影響是可逆的,補(bǔ)充葉酸后可能會(huì)阻止正常胃粘膜細(xì)胞的癌性轉(zhuǎn)化、抑制胃癌細(xì)胞的進(jìn)展;3、FR-α是一個(gè)潛在的腫瘤標(biāo)志物,可能與癌基因Bcl-2相類似,而與抑癌基因P53相反,是一個(gè)潛在的癌基因;4、MTHFR具有多種變異型,MTHFR C677T位點(diǎn)多態(tài)性可能是胃癌的遺傳易感因素。
【關(guān)鍵詞】：葉酸 PLK1 siRNA 胃癌細(xì)胞 葉酸受體-α 腫瘤基因 MTHFR多態(tài)性
【學(xué)位授予單位】：上海交通大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R735.2
【目錄】：

• 中文摘要5-7
• Abstract7-11
• 符號(hào)說明11-12
• 1、緒論12-14
• 2、材料與方法14-33
• 2.1 Real-time PCR檢測各基因表達(dá)14-21
• 2.1.1 主要試劑14-15
• 2.1.2 主要儀器15
• 2.1.3 細(xì)胞與細(xì)胞株培養(yǎng)15
• 2.1.4 PLK1 siRNA干擾15-16
• 2.1.5 葉酸缺乏16-17
• 2.1.6 PLK1 siRNA干擾和葉酸缺乏聯(lián)合17-18
• 2.1.7 葉酸缺乏環(huán)境恢復(fù)正常后，，進(jìn)行 PLK1 siRNA 干擾18-19
• 2.1.8 Real-time PCR檢測mRNA表達(dá)19-21
• 2.1.9 統(tǒng)計(jì)分析21
• 2.2 Western blot檢測各蛋白的表達(dá)21-28
• 2.2.1 主要試劑21-22
• 2.2.2 主要試劑的配制22-23
• 2.2.3 Western Blot主要儀器設(shè)備23-24
• 2.2.4 實(shí)驗(yàn)原理24
• 2.2.5 實(shí)驗(yàn)步驟24-28
• 2.2.6 統(tǒng)計(jì)分析28
• 2.3 MTHFR基因多態(tài)性檢測28-33
• 2.3.1 主要試劑28-29
• 2.3.2 細(xì)胞株與細(xì)胞培養(yǎng)29
• 2.3.3 DNA提取29
• 2.3.4 引物設(shè)計(jì)29-30
• 2.3.5 PCR擴(kuò)增30-31
• 2.3.6 MTHFR基因酶切驗(yàn)證31-32
• 2.3.7 MTHFR基因直接測序32-33
• 3、結(jié)果33-44
• 3.1 Real-time PCR檢測FR-α、BCL-2、P53基因表達(dá)結(jié)果33-38
• 3.2 Western blot檢測FR-α、BCL-2、P53蛋白的表達(dá)結(jié)果38-42
• 3.3 MTHFR基因多態(tài)性檢測結(jié)果42-44
• 4、討論44-49
• 5、結(jié)論49
• 參考文獻(xiàn)49-58
• 致謝58-59
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文59

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前3條

1 Elisa Fabbri;Lisa Rustignoli;Antonio Muscari;Giovanni M Puddu;Maria Guarino;Rita Rinaldi;Elena Minguzzi;Giacomo Caio;Marco Zoli;Umberto Volta;;Recurrent ischemic strokes in a young celiac woman with MTHFR gene mutation[J];World Journal of Gastroenterology;2012年26期

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本文編號(hào)：618151