本文關(guān)鍵詞：bFGF單抗聯(lián)合Lobaplatin抑制肺腺癌細胞增殖、轉(zhuǎn)移和誘導凋亡的機制研究

  更多相關(guān)文章： 非小細胞肺癌 堿性成纖維細胞生長因子單克隆抗體 LBP 增殖 凋亡

【摘要】：目的:(1)探討堿性成纖維細胞生長因子單克隆抗體(b FGF單抗)聯(lián)合Lobaplatin(LBP)對肺癌細胞系A(chǔ)549細胞增殖、凋亡和轉(zhuǎn)移的影響及其可能的作用機制。(2)系統(tǒng)評價Lobaplatin聯(lián)合化療治療晚期非小細胞肺癌(NSCLC)的療效和安全性。方法:制備腹水型bFGF單抗,體外培養(yǎng)肺腺癌A549細胞,將細胞分為四組(control組、b FGF單抗組、LBP組及b FGF單抗+LBP組)處理48h。(1)CCK-8法測定其對A549細胞增殖的影響;流式細胞儀檢測藥物作用后細胞周期分布的變化,Western blot法檢測細胞周期相關(guān)蛋白CDK4和cyclin D的表達水平。(2)流式細胞儀檢測藥物作用A549細胞凋亡,DAPI染色激光共聚焦顯微鏡下觀察細胞凋亡過程中細胞核的變化,western blot法檢測細胞凋亡PI3K/Akt信號通路有關(guān)蛋白bcl-2、caspase-3、caspase-9、PARP及BAX、cleave-caspase-3、cleave-caspase-9、cleave-PARP的表達變化。(3)劃痕實驗及Transwell小室檢測不同藥物分組對A549細胞侵襲及遷移能力的影響,Western blot法檢測細胞侵襲遷移相關(guān)蛋白MMP-2和MMP-9的表達。(4)計算機檢索Cochrane Library、Pub Med、EMBase、中國期刊全文數(shù)據(jù)庫(CNKI)、中國生物醫(yī)學文獻數(shù)據(jù)庫(CBM)、維普中文期刊數(shù)據(jù)庫、萬方數(shù)據(jù)庫,納入LBP聯(lián)合化療對比順鉑聯(lián)合化療治療晚期NSCLC的隨機對照試驗(PCT),根據(jù)納入與排除標準篩選后,運用改良后的Jadad量表評價納入文獻的方法學質(zhì)量,并采用Cochrane協(xié)作網(wǎng)提供的Rev Man5.2統(tǒng)計學軟件進行Meta分析。結(jié)果:(1)CCK-8結(jié)果顯示不同的藥物分組可抑制A549細胞的增殖,并以bFGF單抗+LBP對肺癌A549細胞增殖作用最為明顯,流式細胞儀檢測結(jié)果發(fā)現(xiàn)b FGF單抗聯(lián)合LBP可抑制A549細胞周期的進行,阻止細胞周期在G0/GI期。Western blot檢測結(jié)果表明b FGF單抗和LBP可下調(diào)細胞內(nèi)CDK4和cyclin D的表達。(2)流式細胞儀檢測結(jié)果顯示b FGF單抗,LBP單獨及聯(lián)合可誘導A549細胞凋亡。DAPI染色激光共聚焦顯微鏡下發(fā)現(xiàn)可引起細胞核固縮、核裂解。Western blot結(jié)果表明b FGF單抗聯(lián)合LBP通過下調(diào)bcl-2、casepase-3、casepase-9、PARP的表達,上調(diào)BAX、cleave-casepase-3、cleave-casepase-9、cleave-PARP的表達來誘導A549細胞的凋亡。(3)劃痕實驗和Transwell小室基質(zhì)膠實驗顯示b FGF單抗,LBP單獨及聯(lián)合可抑制A549細胞侵襲遷移能力。Western blot檢測結(jié)果發(fā)現(xiàn)藥物作用后可下調(diào)MMP-2和MMP-9蛋白表達來阻斷細胞的侵襲遷移。(4)共納入11項RCT,合計724例患者。Meta分析結(jié)果顯示,試驗組患者的客觀緩解率[RR=0.96,95%CI(0.79,1.16),P=0.65]、白細胞減少發(fā)生率[RR=0.95.,95%CI(0.83,1.08),P=0.42]和血小板減少發(fā)生率[RR=0.96,95%CI(0.80,1.15),P=0.68]與對照組比較差異無統(tǒng)計學意義;但試驗組患者惡心嘔吐發(fā)生率[RR=0.55,95%CI(0.46,0.64),P0.05]、腹瀉發(fā)生率[RR=0.43,95%CI(0.31,0.61),P0.05]顯著低于對照組,兩組比較差異有統(tǒng)計學意義。結(jié)論:(1)b FGF單抗聯(lián)合LBP作用于細胞48h后可抑制肺腺癌A549細胞的增殖,阻止細胞由G1期進入S期、G2期進入M期,其作用機制可能是下調(diào)細胞內(nèi)CDK4和cyclin D的表達發(fā)揮生物學作用。(2)b FGF單抗聯(lián)合LBP作用于細胞48h后可促進肺腺癌A549細胞的凋亡,形態(tài)學觀察可以看到引起細胞核固縮、核裂解,其機制可能與改變細胞內(nèi)PI3K/Akt信號通路,下調(diào)bcl-2、casepase-3、casepase-9、PARP的表達,上調(diào)BAX、cleave-casepase-3、cleave-casepase-9、cleave-PARP的表達有關(guān)。(3)b FGF單抗和LBP單藥和聯(lián)合作用均可阻止肺腺癌A549細胞的轉(zhuǎn)移,兩藥聯(lián)合應(yīng)用對A549細胞具有協(xié)同作用。這一效應(yīng)可能與特異性的引起基質(zhì)金屬蛋白酶MMP-2和MMP-9表達變化有關(guān)。(4)LBP聯(lián)合化療治療NSCLC患者的療效與順鉑聯(lián)合化療相當,但安全性優(yōu)于后者。由于納入研究的樣本量偏小,質(zhì)量較低,該結(jié)果尚需大樣本、多中心的RCT進一步驗證。
【關(guān)鍵詞】：非小細胞肺癌 堿性成纖維細胞生長因子單克隆抗體 LBP 增殖 凋亡
【學位授予單位】：暨南大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R734.2
【目錄】：

• 摘要3-5
• Abstract5-10
• 前言10-16
• 第一部分 bFGF單抗的制備16-25
• 1.1 材料16-17
• 1.2 實驗方法17-21
• 1.3 實驗結(jié)果21-23
• 1.4 討論23-25
• 第二部分 bFGF單抗與Lobaplatin聯(lián)合抑制肺腺癌A549 細胞增殖的研究25-35
• 2.1 材料25-27
• 2.2 實驗方法27-30
• 2.3 實驗結(jié)果30-32
• 2.4 討論32-35
• 第三部分 bFGF單抗與Lobaplatin聯(lián)合誘導肺腺癌A549 細胞凋亡的研究35-48
• 3.1 材料35-37
• 3.2 實驗方法37-39
• 3.3 實驗結(jié)果39-45
• 3.4 討論45-48
• 第四部分 bFGF單抗與Lobaplatin聯(lián)合抑制肺腺癌A549 細胞侵襲遷移作用的研究48-56
• 4.1 材料48-50
• 4.2 實驗方法50-52
• 4.3 實驗結(jié)果52-54
• 4.4 討論54-56
• 參考文獻56-62
• 第五部分 Lobaplatin對比順鉑治療晚期非小細胞肺癌的療效與安全性的Meta分析62-77
• 1 資料與方法62-63
• 2 結(jié)果63-73
• 3 討論73-75
• 參考文獻75-77
• 全文總結(jié)77-78
• 附錄78-80
• 碩士期間發(fā)表論文80-81
• 致謝81

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前5條

1 曾洪生;郭其森;傅玲;;吉西他濱聯(lián)合洛鉑治療晚期非小細胞肺癌療效分析[J];山東醫(yī)藥;2011年19期

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3 向軍儉,劉小青,廖俊珊,林劍;抗堿性成纖維細胞生長因子單克隆抗體的制備及特異性分析[J];中國免疫學雜志;1998年05期

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本文編號：618097