發(fā)布時(shí)間：2017-08-04 06:22

  本文關(guān)鍵詞：bFGF單抗聯(lián)合Lobaplatin抑制肺腺癌細(xì)胞增殖、轉(zhuǎn)移和誘導(dǎo)凋亡的機(jī)制研究

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【摘要】：目的:(1)探討堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子單克隆抗體(b FGF單抗)聯(lián)合Lobaplatin(LBP)對(duì)肺癌細(xì)胞系A(chǔ)549細(xì)胞增殖、凋亡和轉(zhuǎn)移的影響及其可能的作用機(jī)制。(2)系統(tǒng)評(píng)價(jià)Lobaplatin聯(lián)合化療治療晚期非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)的療效和安全性。方法:制備腹水型bFGF單抗,體外培養(yǎng)肺腺癌A549細(xì)胞,將細(xì)胞分為四組(control組、b FGF單抗組、LBP組及b FGF單抗+LBP組)處理48h。(1)CCK-8法測(cè)定其對(duì)A549細(xì)胞增殖的影響;流式細(xì)胞儀檢測(cè)藥物作用后細(xì)胞周期分布的變化,Western blot法檢測(cè)細(xì)胞周期相關(guān)蛋白CDK4和cyclin D的表達(dá)水平。(2)流式細(xì)胞儀檢測(cè)藥物作用A549細(xì)胞凋亡,DAPI染色激光共聚焦顯微鏡下觀察細(xì)胞凋亡過程中細(xì)胞核的變化,western blot法檢測(cè)細(xì)胞凋亡PI3K/Akt信號(hào)通路有關(guān)蛋白bcl-2、caspase-3、caspase-9、PARP及BAX、cleave-caspase-3、cleave-caspase-9、cleave-PARP的表達(dá)變化。(3)劃痕實(shí)驗(yàn)及Transwell小室檢測(cè)不同藥物分組對(duì)A549細(xì)胞侵襲及遷移能力的影響,Western blot法檢測(cè)細(xì)胞侵襲遷移相關(guān)蛋白MMP-2和MMP-9的表達(dá)。(4)計(jì)算機(jī)檢索Cochrane Library、Pub Med、EMBase、中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù)(CNKI)、中國(guó)生物醫(yī)學(xué)文獻(xiàn)數(shù)據(jù)庫(kù)(CBM)、維普中文期刊數(shù)據(jù)庫(kù)、萬方數(shù)據(jù)庫(kù),納入LBP聯(lián)合化療對(duì)比順鉑聯(lián)合化療治療晚期NSCLC的隨機(jī)對(duì)照試驗(yàn)(PCT),根據(jù)納入與排除標(biāo)準(zhǔn)篩選后,運(yùn)用改良后的Jadad量表評(píng)價(jià)納入文獻(xiàn)的方法學(xué)質(zhì)量,并采用Cochrane協(xié)作網(wǎng)提供的Rev Man5.2統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行Meta分析。結(jié)果:(1)CCK-8結(jié)果顯示不同的藥物分組可抑制A549細(xì)胞的增殖,并以bFGF單抗+LBP對(duì)肺癌A549細(xì)胞增殖作用最為明顯,流式細(xì)胞儀檢測(cè)結(jié)果發(fā)現(xiàn)b FGF單抗聯(lián)合LBP可抑制A549細(xì)胞周期的進(jìn)行,阻止細(xì)胞周期在G0/GI期。Western blot檢測(cè)結(jié)果表明b FGF單抗和LBP可下調(diào)細(xì)胞內(nèi)CDK4和cyclin D的表達(dá)。(2)流式細(xì)胞儀檢測(cè)結(jié)果顯示b FGF單抗,LBP單獨(dú)及聯(lián)合可誘導(dǎo)A549細(xì)胞凋亡。DAPI染色激光共聚焦顯微鏡下發(fā)現(xiàn)可引起細(xì)胞核固縮、核裂解。Western blot結(jié)果表明b FGF單抗聯(lián)合LBP通過下調(diào)bcl-2、casepase-3、casepase-9、PARP的表達(dá),上調(diào)BAX、cleave-casepase-3、cleave-casepase-9、cleave-PARP的表達(dá)來誘導(dǎo)A549細(xì)胞的凋亡。(3)劃痕實(shí)驗(yàn)和Transwell小室基質(zhì)膠實(shí)驗(yàn)顯示b FGF單抗,LBP單獨(dú)及聯(lián)合可抑制A549細(xì)胞侵襲遷移能力。Western blot檢測(cè)結(jié)果發(fā)現(xiàn)藥物作用后可下調(diào)MMP-2和MMP-9蛋白表達(dá)來阻斷細(xì)胞的侵襲遷移。(4)共納入11項(xiàng)RCT,合計(jì)724例患者。Meta分析結(jié)果顯示,試驗(yàn)組患者的客觀緩解率[RR=0.96,95%CI(0.79,1.16),P=0.65]、白細(xì)胞減少發(fā)生率[RR=0.95.,95%CI(0.83,1.08),P=0.42]和血小板減少發(fā)生率[RR=0.96,95%CI(0.80,1.15),P=0.68]與對(duì)照組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;但試驗(yàn)組患者惡心嘔吐發(fā)生率[RR=0.55,95%CI(0.46,0.64),P0.05]、腹瀉發(fā)生率[RR=0.43,95%CI(0.31,0.61),P0.05]顯著低于對(duì)照組,兩組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)論:(1)b FGF單抗聯(lián)合LBP作用于細(xì)胞48h后可抑制肺腺癌A549細(xì)胞的增殖,阻止細(xì)胞由G1期進(jìn)入S期、G2期進(jìn)入M期,其作用機(jī)制可能是下調(diào)細(xì)胞內(nèi)CDK4和cyclin D的表達(dá)發(fā)揮生物學(xué)作用。(2)b FGF單抗聯(lián)合LBP作用于細(xì)胞48h后可促進(jìn)肺腺癌A549細(xì)胞的凋亡,形態(tài)學(xué)觀察可以看到引起細(xì)胞核固縮、核裂解,其機(jī)制可能與改變細(xì)胞內(nèi)PI3K/Akt信號(hào)通路,下調(diào)bcl-2、casepase-3、casepase-9、PARP的表達(dá),上調(diào)BAX、cleave-casepase-3、cleave-casepase-9、cleave-PARP的表達(dá)有關(guān)。(3)b FGF單抗和LBP單藥和聯(lián)合作用均可阻止肺腺癌A549細(xì)胞的轉(zhuǎn)移,兩藥聯(lián)合應(yīng)用對(duì)A549細(xì)胞具有協(xié)同作用。這一效應(yīng)可能與特異性的引起基質(zhì)金屬蛋白酶MMP-2和MMP-9表達(dá)變化有關(guān)。(4)LBP聯(lián)合化療治療NSCLC患者的療效與順鉑聯(lián)合化療相當(dāng),但安全性優(yōu)于后者。由于納入研究的樣本量偏小,質(zhì)量較低,該結(jié)果尚需大樣本、多中心的RCT進(jìn)一步驗(yàn)證。
【關(guān)鍵詞】：非小細(xì)胞肺癌 堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子單克隆抗體 LBP 增殖 凋亡
【學(xué)位授予單位】：暨南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R734.2
【目錄】：

• 摘要3-5
• Abstract5-10
• 前言10-16
• 第一部分 bFGF單抗的制備16-25
• 1.1 材料16-17
• 1.2 實(shí)驗(yàn)方法17-21
• 1.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果21-23
• 1.4 討論23-25
• 第二部分 bFGF單抗與Lobaplatin聯(lián)合抑制肺腺癌A549 細(xì)胞增殖的研究25-35
• 2.1 材料25-27
• 2.2 實(shí)驗(yàn)方法27-30
• 2.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果30-32
• 2.4 討論32-35
• 第三部分 bFGF單抗與Lobaplatin聯(lián)合誘導(dǎo)肺腺癌A549 細(xì)胞凋亡的研究35-48
• 3.1 材料35-37
• 3.2 實(shí)驗(yàn)方法37-39
• 3.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果39-45
• 3.4 討論45-48
• 第四部分 bFGF單抗與Lobaplatin聯(lián)合抑制肺腺癌A549 細(xì)胞侵襲遷移作用的研究48-56
• 4.1 材料48-50
• 4.2 實(shí)驗(yàn)方法50-52
• 4.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果52-54
• 4.4 討論54-56
• 參考文獻(xiàn)56-62
• 第五部分 Lobaplatin對(duì)比順鉑治療晚期非小細(xì)胞肺癌的療效與安全性的Meta分析62-77
• 1 資料與方法62-63
• 2 結(jié)果63-73
• 3 討論73-75
• 參考文獻(xiàn)75-77
• 全文總結(jié)77-78
• 附錄78-80
• 碩士期間發(fā)表論文80-81
• 致謝81

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前5條

1 曾洪生;郭其森;傅玲;;吉西他濱聯(lián)合洛鉑治療晚期非小細(xì)胞肺癌療效分析[J];山東醫(yī)藥;2011年19期

2 潘蘭紅;徐萌;曾世彬;陳文慧;李漢初;盛良翮;朱新海;向軍儉;鄧寧;;堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子單克隆抗體在小鼠體內(nèi)藥代動(dòng)力學(xué)研究[J];中國(guó)藥理學(xué)通報(bào);2011年11期

3 向軍儉,劉小青,廖俊珊,林劍;抗堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子單克隆抗體的制備及特異性分析[J];中國(guó)免疫學(xué)雜志;1998年05期

4 ;ShRNA-mediated gene silencing of β-catenin inhibits growth of human colon cancer cells[J];World Journal of Gastroenterology;2007年48期

5 趙延江;;紫杉醇加洛鉑治療晚期非小細(xì)胞肺癌的療效及安全性評(píng)價(jià)[J];中國(guó)實(shí)用醫(yī)藥;2013年13期

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本文編號(hào)：618097