本文關(guān)鍵詞：MPDZ基因在肺癌中的甲基化和表達(dá)分析

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【摘要】：背景:肺癌是最常見的嚴(yán)重威脅人類健康的惡性腫瘤,在全世界范圍內(nèi)肺癌也是主要的死亡原因之一。由于大部分肺癌病人確診時(shí)已為腫瘤中晚期,因此肺癌的5年存活率仍然不足15%。越來越多的研究表明,DNA甲基化在腫瘤抑制基因的轉(zhuǎn)錄沉默調(diào)控中具有重要作用。抑癌基因啟動(dòng)子區(qū)域DNA甲基化改變與肺癌的發(fā)生密切相關(guān)。因此,通過尋找肺癌發(fā)生過程中DNA甲基化的變化規(guī)律,將為其早期診斷和改進(jìn)治療方式提供新的思路。MPDZ基因是我們前期在肺癌組織中新篩選出的一個(gè)甲基化基因,但是其在肺癌以及其他腫瘤中的甲基化及其功能還不清楚,因此本課題擬通過對(duì)MPDZ基因在肺癌組織、癌旁正常組織以及腫瘤細(xì)胞株中的甲基化、表達(dá)分析,初步評(píng)價(jià)其在肺癌發(fā)生中的意義,為后續(xù)深入研究該基因在腫瘤發(fā)生中的作用及機(jī)制提供資料。目的:1.分析MPDZ基因在肺癌細(xì)胞、癌旁組織和肺癌組織及相應(yīng)血漿和痰液中的甲基化發(fā)生情況以及甲基化發(fā)生率與患者臨床病理資料的關(guān)系;2.分析MPDZ基因在肺癌細(xì)胞和肺癌組織中的表達(dá)與其甲基化調(diào)控之間的關(guān)系;3.分析MPDZ基因在肺癌組織的蛋白表達(dá)與臨床病理學(xué)、患者生存時(shí)間的關(guān)系。方法:1.采用甲基化特異性PCR(Methylation specific PCR,MSP)和亞硫酸氫鹽修飾測(cè)序PCR(Bisulfite sequencing PCR,BSP)相結(jié)合的方法檢測(cè)肺癌細(xì)胞、癌旁組織和肺癌組織及相應(yīng)血漿和痰液中MPDZ基因的甲基化情況;2.采用逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)(Reverse transcription-Polymerase Chain Reaction,RT-PCR)和免疫組織化學(xué)(Immunohistochemistry,IHC)染色的方法檢測(cè)肺癌細(xì)胞、肺癌組織和癌旁組織中MPDZ基因表達(dá)情況以及去甲基化藥物5-aza-2′-deoxycytidine(5-aza-d C)處理前后肺癌細(xì)胞中MPDZ基因的表達(dá)變化情況;3.采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件,通過卡方檢驗(yàn)分析MPDZ基因的甲基化或表達(dá)與患者臨床病理資料之間的相關(guān)性,通過Kaplan-Meier和Cox-regression生存分析方法分析mpdz表達(dá)與患者生存時(shí)間之間的關(guān)聯(lián)。結(jié)果:1.mpdz基因在70%(7/10)的肺癌細(xì)胞株、61.2%(60/98)的肺癌組織、55.6%(70/126)的肺癌患者血漿標(biāo)本和48.1%(50/104)的肺癌患者痰液標(biāo)本中發(fā)生了高甲基化,而在正常肺上皮細(xì)胞株hbe和20例癌旁正常組織中均沒有發(fā)生甲基化;經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,肺癌細(xì)胞和正常細(xì)胞以及肺癌組織和癌旁組織間甲基化差異具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.01)。2.mpdz基因在62例具有對(duì)應(yīng)的血漿和痰液標(biāo)本的肺癌組織中43例都檢測(cè)出甲基化,甲基化發(fā)生率達(dá)到69.4%(43/62),在43例發(fā)生了甲基化的肺癌組織相對(duì)應(yīng)血漿標(biāo)本中有33例發(fā)生了甲基化,甲基化率為76.7%(33/43);在43例發(fā)生了甲基化的肺癌組織相對(duì)應(yīng)的痰液標(biāo)本中有20例發(fā)生了甲基化,甲基化率為46.5%(20/43)。提示血漿與痰液標(biāo)本中mpdz基因甲基化有較高的檢出率,是一個(gè)候選的診斷標(biāo)志物。3.mpdz基因的甲基化發(fā)生率與肺癌患者的臨床分期明顯相關(guān)(p=0.047),而與患者的年齡(p=0.156)、性別(p=0.950)、是否吸煙(p=0.455)、腫瘤的分化程度(p=0.445)以及腫瘤病理類型(p=0.100)不相關(guān),且mpdz基因甲基化發(fā)生率在iii+iv期(15/17,88.2%)患者顯著高于i+ii期(28/45,62.2%)患者。4.mpdz蛋白在大部分高甲基化的肺癌細(xì)胞和大部分的肺癌組織中呈現(xiàn)低表達(dá)或不表達(dá),與該基因在這些細(xì)胞和肺癌組織中的高甲基化密切相關(guān),而且肺癌細(xì)胞進(jìn)行去甲基化藥物5-aza-dc處理后mpdz基因的表達(dá)明顯得到恢復(fù)。這些結(jié)果表明,mpdz基因在肺癌中是一個(gè)受dna甲基化調(diào)控的基因。5.mpdz蛋白表達(dá)與肺癌患者的病理分級(jí)(χ2=7.250,p=0.027)和臨床分期(χ2=5.773,p=0.016)密切關(guān)聯(lián),而與肺癌患者的年齡、性別、腫瘤大小、淋巴結(jié)總數(shù)、淋巴結(jié)狀態(tài)和病理分型不相關(guān)(p0.05)。6.mpdz蛋白表達(dá)與總肺癌(p0.001)、肺腺癌(p0.001)和肺鱗癌(p=0.001)患者的生存期長(zhǎng)短均呈正相關(guān),且該蛋白表達(dá)是一個(gè)獨(dú)立的預(yù)后因素。mpdz蛋白在臨床tnm分期i+ii期患者及iii+iv期患者中的預(yù)后意義存在明顯差異,在i+ii期患者mpdz蛋白表達(dá)與患者生存時(shí)間正相關(guān),是一個(gè)獨(dú)立的預(yù)后因素,而在iii+iv期患者mpdz蛋白表達(dá)與患者生存時(shí)間不相關(guān)。結(jié)論:MPDZ基因在肺癌中是一個(gè)受DNA甲基化調(diào)控的基因,其在肺癌組織中甲基化發(fā)生率與肺癌患者的臨床分期明顯相關(guān),其表達(dá)與肺癌患者的病理分級(jí)和臨床分期密切關(guān)聯(lián),最重要的是MPDZ蛋白表達(dá)與肺癌患者的生存期長(zhǎng)短均呈正相關(guān),且該基因的蛋白表達(dá)是一個(gè)獨(dú)立的預(yù)后因素。這些結(jié)果提示,MPDZ基因在肺癌的發(fā)生過程中可能起著重要作用,且其甲基化或表達(dá)可以作為肺癌診斷和預(yù)后判定的一個(gè)潛在的標(biāo)志物。
【關(guān)鍵詞】：MPDZ 肺癌 DNA甲基化 基因表達(dá) 生存分析 預(yù)后因素
【學(xué)位授予單位】：第三軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R734.2
【目錄】：

• 英文縮略詞4-5
• 英文摘要5-8
• 中文摘要8-11
• 第一章 前言11-13
• 第二章 MPDZ基因在肺癌組織及相應(yīng)癌旁組織、外周血漿、痰液和肺癌細(xì)胞株中的甲基化狀態(tài)分析13-28
• 2.1 材料和方法13-20
• 2.2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果20-26
• 2.3 討論26-28
• 第三章 MPDZ基因在肺癌中的表達(dá)及甲基化對(duì)表達(dá)的調(diào)控分析28-43
• 3.1 材料和方法28-31
• 3.2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果31-40
• 3.3 討論40-43
• 全文總結(jié)43-44
• 參考文獻(xiàn)44-48
• 文獻(xiàn)綜述 DNA甲基化與肺癌研究進(jìn)展48-58
• 參考文獻(xiàn)52-58
• 學(xué)位期間發(fā)表論文58-59
• 致謝59

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前2條

1 ;Methylation profile of the promoter CpG islands of 14 “drug-resistance”genes in hepatocellular carcinoma[J];World Journal of Gastroenterology;2004年23期

2 沈洪兵,俞順章;我國(guó)肺癌流行現(xiàn)狀及其預(yù)防對(duì)策[J];中國(guó)腫瘤;2004年05期

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本文編號(hào)：614952