本文關鍵詞：Fer-siRNA轉(zhuǎn)染對膀胱癌細胞株T24生物學特性的影響及分子機制的初步研究

  更多相關文章： 膀胱癌 貓肉瘤相關蛋白 小干擾 RNA MAPK/AP-1 信號通路

【摘要】：[背景和目的]膀胱癌是我國男性發(fā)生率最高的泌尿系統(tǒng)惡性腫瘤,2012年,大約73510個新病例被確診,并導致約14880人死亡。由于膀胱癌具有復發(fā)性和遠處轉(zhuǎn)移性等特點,其發(fā)生發(fā)展的確切機制不明確,故治療效果往往并不理想。因此,我們必須要了解膀胱癌的生物學特性,尋找可行的生物學標志物并探討研究其治療的靶點。貓肉瘤相關蛋白(Feline sarcoma-related protein,Fer)是在人類的細胞核及細胞質(zhì)中廣泛表達的一種非受體酪氨酸蛋白激酶,Fer基因已被報道在多種惡性腫瘤中呈高表達,并與腫瘤細胞生物學特性相關,如細胞增殖、遷移及侵襲作用,而且可以通過某些生長因子受體來調(diào)節(jié)細胞信號的傳導。然而,沒有任何文獻報道Fer表達與膀胱癌病理學特征的關系及其分子機制。絲裂原活化蛋白激酶/激活蛋白-1(MAPK/AP-1)信號通路是經(jīng)典的細胞信號轉(zhuǎn)導途徑,具有調(diào)節(jié)細胞增殖、分化、存活、轉(zhuǎn)化及凋亡等多重功能,與膀胱癌的發(fā)生、發(fā)展、侵潤、轉(zhuǎn)移及預后等相關密切。本實驗研究中,首先明確了Fer基因在膀胱癌中呈高表達狀態(tài),再利用RNAi技術(shù)沉默膀胱癌T24細胞中的Fer基因,進而研究Fer基因?qū)24細胞株的增殖、周期、遷移及侵襲等生物學特性的影響以及MAPK/AP-1信號通路相關分子的變化,為臨床治療膀胱癌提供了新的途徑并奠定了一定的理論基礎。[方法]運用Western blot、q RT-PCR及免疫組化技術(shù)檢測膀胱癌細胞水平和組織水平Fer的表達,化學合成針對Fer的小干擾RNA,通過質(zhì)脂體轉(zhuǎn)染法轉(zhuǎn)染進膀胱癌T24細胞中,利用q RT-PCR及Western blot技術(shù)檢測細胞中Fer在RNAi前后的變化,然后用MTT法、流式細胞技術(shù)、細胞劃痕實驗及transwell實驗觀察RNAi前后膀胱癌細胞在增殖、周期、遷移和侵襲能力方面的變化,進一步用q RT-PCR及Western blot方法檢測RNAi前后MAPK/AP-1信號通路有關分子的變化。[結(jié)果]與正常膀胱組織及細胞相比,膀胱癌組織和癌細胞中Fer均呈高表達狀態(tài),其表達水平與腫瘤分期、組織學分級以及淋巴結(jié)狀態(tài)等有相關性(P0.05)。特異性si RNA可顯著抑制T24細胞Fer的表達,MTT實驗揭示RNA干擾(Si)組細胞在24、48、72h增殖抑制率分別為22.9%、24.4%和42.5%,較空白組及陰性對照組細胞增殖明顯抑制(P0.05);流式細胞儀揭示RNA干擾(Si)組細胞G0/G1和S期細胞比例分別為(52.34±2.049)%和(35.04±3.810)%,均與空白組及陰性對照(Nc)組比較有統(tǒng)計學意義(P0.05);si RNA組細胞的遷移及侵襲能力同樣較空白組及陰性對照組明顯降低。同時,轉(zhuǎn)染后MAPK/AP-1信號通路有關分子的磷酸化水平較空白組及陰性對照組明顯降低。[結(jié)論]Fer在膀胱癌組織和細胞中高表達,且與腫瘤的臨床及病理學分期分級密切相關,在膀胱癌發(fā)生、發(fā)展中起重要作用,可作為判斷預后的指標;沉默F(xiàn)er基因能有效抑制T24細胞的增殖、遷移及侵襲能力,抑制膀胱癌細胞G1/S期轉(zhuǎn)化,Fer有望成為膀胱癌基因治療的新靶點;MAPK/AP-1信號通路的失活可能是Fer-si RNA對T24細胞生物學特性產(chǎn)生影響的分子機制之一。
【關鍵詞】：膀胱癌 貓肉瘤相關蛋白 小干擾 RNA MAPK/AP-1 信號通路
【學位授予單位】：安徽醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R737.14
【目錄】：

• 中英文縮略詞5-6
• 中文摘要6-8
• 英文摘要8-11
• 引言11-14
• 第一部分 膀胱癌中Fer的表達及其臨床意義14-28
• 1 材料與設備14-15
• 2 實驗方法15-23
• 3 結(jié)果23-26
• 4 討論26-28
• 第二部分Fer siRNA對膀胱癌T24細胞生物學特性的影響28-36
• 1 材料與設備28
• 2 實驗方法28-30
• 3 結(jié)果30-34
• 4 討論34-36
• 第三部分Fer siRNA對膀胱癌細胞的MAPK/AP-1 信號通路的影響36-41
• 1 材料與設備36-37
• 2 實驗方法37
• 3 結(jié)果37-38
• 4 討論38-41
• 第四部分 結(jié)論41-42
• 參考文獻42-46
• 附錄46-47
• 致謝47-48
• 綜述48-56
• 參考文獻53-56

【相似文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 青云;英國科學家辨別出與膀胱癌有關的基因[J];中國處方藥;2004年08期

2 ;特殊激素可導致男性患膀胱癌幾率升高[J];中國社區(qū)醫(yī)師(綜合版);2007年11期

3 肖建利;張麗芳;劉巧莉;;白花蛇舌草治療膀胱癌1例[J];臨床合理用藥雜志;2009年08期

4 丁虹彬，余雪軒;培養(yǎng)膀胱癌細胞的新方法[J];南京醫(yī)學院學報;1994年01期

5 張曉峰;劉訓勤;;一種新型膀胱癌快速診斷裝置[J];醫(yī)療衛(wèi)生裝備;2013年10期

6 孫宏志,凡杰,唐孝達;自穩(wěn)定反義IGF1R基因片段對膀胱癌細胞的影響[J];中華泌尿外科雜志;2000年05期

7 章小平,楊紅枚,魯功成;膀胱癌穩(wěn)定表達多藥耐受相關蛋白亞克隆的生物學特征[J];中華實驗外科雜志;2000年03期

8 漆少廷,徐錫坤,王心如;膀胱癌的分子生物學研究進展[J];國外醫(yī)學.泌尿系統(tǒng)分冊;2000年04期

9 章小平,楊紅枚,魯功成;流式細胞儀在膀胱癌多藥耐受研究中的應用[J];臨床泌尿外科雜志;2000年09期

10 楊莉,汪少娟,楊業(yè)金,陳忠,吳燕麗;抗腫瘤藥對膀胱癌細胞產(chǎn)生的免疫抑制因子作用的影響[J];藥物流行病學雜志;2000年03期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 張永春;谷江;孫發(fā);石家齊;;傳統(tǒng)醫(yī)學在膀胱癌治療中的意義[A];2010年貴州省泌尿外科學術(shù)會議論文集[C];2010年

2 潘春武;沈周俊;唐小瑩;王e，

本文編號：614854