發(fā)布時(shí)間：2017-08-03 06:10

  本文關(guān)鍵詞：凝集素化量子點(diǎn)的制備表征及其在肝癌診斷中的應(yīng)用

  更多相關(guān)文章： 量子點(diǎn) 凝集素 熒光標(biāo)記 糖類復(fù)合物 肝癌診斷

【摘要】：目的:制備并表征光學(xué)性能優(yōu)良的凝集素化量子點(diǎn)熒光探針并研究其在肝癌診斷中的應(yīng)用。方法:1.量子點(diǎn)的合成與表征:水相兩步合成一系列粒徑不同的水溶性量子點(diǎn),采用紫外、熒光光譜表征量子點(diǎn)的光學(xué)特性并從制備的水溶性量子點(diǎn)中選取光學(xué)性能良好的呈現(xiàn)綠色和紅色的量子點(diǎn)(QD550和QD618)做后續(xù)研究;同時(shí)采用MTT法評(píng)價(jià)量子點(diǎn)的細(xì)胞毒性和篩選后續(xù)實(shí)驗(yàn)安全的量子點(diǎn)濃度。2.凝集素化量子點(diǎn)的制備表征:利用量子點(diǎn)表面的羧基和凝集素上的氨基通過(guò)共價(jià)偶聯(lián)的方式制備凝集素化量子點(diǎn)熒光探針;采用瓊脂糖凝膠電泳表征曼陀羅凝集素(DSA)和扁豆凝集素(LCA)兩種凝集素是否分別與量子點(diǎn)QD550和QD618偶聯(lián)成功;利用紫外和熒光光譜考察凝集素化量子點(diǎn)熒光探針的光學(xué)性質(zhì);采用兔血紅細(xì)胞凝集試驗(yàn)、糖-凝集素抑制實(shí)驗(yàn)考察DSA和LCA與QD550和QD618偶聯(lián)前、后的生物活性;采用MTT法評(píng)價(jià)凝集素化量子點(diǎn)對(duì)HepG2和LO2細(xì)胞的毒性。3.兩種凝集素化量子點(diǎn)熒光探針特異性靶向標(biāo)記HepG2細(xì)胞表面糖類復(fù)合物的研究:選取人肝癌細(xì)胞HepG2為細(xì)胞模型,熒光顯微鏡下成像,直觀定性表征兩種凝集素化量子點(diǎn)對(duì)HepG2細(xì)胞的標(biāo)記情況;同時(shí)結(jié)合對(duì)照實(shí)驗(yàn)和凝集素競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合實(shí)驗(yàn)考察兩種凝集素化量子點(diǎn)熒光探針特異性靶向標(biāo)記Hep G2細(xì)胞表面不同糖類復(fù)合物表達(dá)情況。選取hepg2細(xì)胞和正常肝細(xì)胞lo2細(xì)胞為細(xì)胞模型,運(yùn)用流式細(xì)胞術(shù)定量分析上述兩種細(xì)胞表面表達(dá)的糖復(fù)合物,并比較hepg2細(xì)胞和lo2細(xì)胞表面表達(dá)的糖復(fù)合物的差異,從而評(píng)價(jià)兩種凝集素化量子點(diǎn)熒光探針對(duì)肝癌細(xì)胞的診斷效力。結(jié)果:優(yōu)化的量子點(diǎn)的合成條件是:反應(yīng)原料的最佳比例是cd2+:te:nabh4=1:0.5:10,最適溫度為98℃,ph值為10.5。在優(yōu)化的反應(yīng)條件下合成了量子產(chǎn)率是28.9%,粒徑分布均勻,直徑約2~3nm,熒光穩(wěn)定性較好的水溶性量子點(diǎn);將綠色量子點(diǎn)(qd550)和紅色量子點(diǎn)(qd618)分別與dsa和lca共價(jià)結(jié)合成功制得兩種凝集素化量子點(diǎn)熒光探針qd550-dsa和qd618-lca;經(jīng)紫外和熒光光譜結(jié)果表明量子點(diǎn)和凝集素共價(jià)結(jié)合后,凝集素化量子點(diǎn)基本保持了原有量子點(diǎn)的光學(xué)性質(zhì);兔血紅細(xì)胞凝集實(shí)驗(yàn)證實(shí),凝集素的生物活性也沒(méi)有受到影響,且mtt結(jié)果表明qd550-dsa和qd618-lca對(duì)正常肝細(xì)胞和肝癌細(xì)胞的毒性均較低;熒光顯微鏡結(jié)果顯示:凝集素化量子點(diǎn)熒光探針能直觀熒光標(biāo)記hepg2細(xì)胞上特異性表達(dá)的糖類復(fù)合物;流式細(xì)胞術(shù)分析結(jié)果表明,凝集素化量子點(diǎn)熒光探針與hepg2細(xì)胞表面的結(jié)合較裸量子點(diǎn)顯著性增高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.01),且當(dāng)hepg2細(xì)胞被加入的凝集素預(yù)飽和后,探針與hepg2細(xì)胞表面的結(jié)合較沒(méi)有被凝集素飽和的高,有顯著性差異(p0.05),說(shuō)明兩種凝集素化量子點(diǎn)熒光探針與肝癌細(xì)胞的結(jié)合是具有特異性的,且hepg2細(xì)胞表面的n-乙酰葡糖胺的含量是lo2細(xì)胞的1.64倍有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05),甘露糖的含量是lo2細(xì)胞的1.82倍,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.01),說(shuō)明正常肝細(xì)胞和肝癌細(xì)胞表面的糖類復(fù)合物表達(dá)存在顯著性差異,制備的兩種凝集素化量子點(diǎn)熒光探針可以用于肝癌的輔助診斷。結(jié)論:在優(yōu)化的反應(yīng)條件下合成兩種光學(xué)性能優(yōu)良、光穩(wěn)定好和生物活性高的凝集素化量子點(diǎn)熒光探針;制備的兩種凝集素化量子點(diǎn)熒光探針成功用于肝癌相關(guān)兩種糖類復(fù)合物的定性定量同時(shí)檢測(cè),且在正常肝細(xì)胞和肝癌細(xì)胞中這兩種糖類復(fù)合物的表達(dá)量存在顯著差異。因此,這兩種凝集素化量子點(diǎn)熒光探針具有用于肝癌的輔助診斷的潛力。
【關(guān)鍵詞】：量子點(diǎn) 凝集素 熒光標(biāo)記 糖類復(fù)合物 肝癌診斷
【學(xué)位授予單位】：南華大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R735.7
【目錄】：

• 英文縮寫(xiě)詞索引4-5
• 摘要5-8
• Abstract8-15
• 第1章 緒論15-21
• 第2章 水溶性量子點(diǎn)的合成與表征21-31
• 2.1 主要材料與試劑21-23
• 2.1.1 細(xì)胞株21-22
• 2.1.2 主要試劑與耗材22-23
• 2.2 主要儀器23
• 2.3 實(shí)驗(yàn)方法23-27
• 2.3.1 CdTe量子點(diǎn)的合成23-24
• 2.3.2 量子點(diǎn)的表征24-25
• 2.3.3 細(xì)胞培養(yǎng)主要溶液的配制25
• 2.3.4 細(xì)胞培養(yǎng)25-26
• 2.3.5 量子點(diǎn)的毒性研究26-27
• 2.4 結(jié)果與討論27-30
• 2.4.1 巰基乙酸修飾的CdTe量子點(diǎn)的紫外吸收光譜27
• 2.4.2 巰基乙酸修飾的CdTe量子點(diǎn)的熒光發(fā)射光譜27-28
• 2.4.3 CdTe量子點(diǎn)量子產(chǎn)率、尺寸28
• 2.4.4 量子點(diǎn)的細(xì)胞毒性研究28-30
• 2.5 小結(jié)30-31
• 第3章 凝集素化量子點(diǎn)熒光探針的制備及表征31-41
• 3.1 主要材料與試劑31-32
• 3.2 主要儀器32
• 3.3 實(shí)驗(yàn)方法32-35
• 3.3.1 QD550-DSA的制備及純化32
• 3.3.2 QD618-LCA的制備及純化32-33
• 3.3.3 凝集素化量子點(diǎn)熒光探針的表征33-35
• 3.4 結(jié)果與討論35-40
• 3.4.1 瓊脂糖凝膠電泳表征結(jié)果35
• 3.4.2 量子點(diǎn)與凝集素偶聯(lián)對(duì)量子點(diǎn)光學(xué)特性的影響35-36
• 3.4.3 量子點(diǎn)與凝集素偶聯(lián)對(duì)凝集素生物活性的影響36-37
• 3.4.4 凝集素化量子點(diǎn)與糖的特異性結(jié)合情況37-38
• 3.4.5 凝集素化量子點(diǎn)作用細(xì)胞后的熒光穩(wěn)定性考察38-39
• 3.4.6 凝集素化量子點(diǎn)熒光探針的毒性評(píng)價(jià)39-40
• 3.5 小結(jié)40-41
• 第4章 凝集素化量子點(diǎn)應(yīng)用于肝癌相關(guān)的糖復(fù)合物的檢測(cè)41-53
• 4.1 主要材料與試劑41
• 4.1.1 細(xì)胞株41
• 4.1.2 主要試劑與耗材41
• 4.2 主要實(shí)驗(yàn)儀器41-42
• 4.3 實(shí)驗(yàn)方法42-43
• 4.3.1 細(xì)胞成像定性檢測(cè)42
• 4.3.2 流式細(xì)胞儀定量分析檢測(cè)42-43
• 4.4 結(jié)果與討論43-51
• 4.4.1 兩種凝集素化量子點(diǎn)對(duì)HepG2細(xì)胞表面糖復(fù)合物的定性檢測(cè)43-44
• 4.4.2 流式細(xì)胞儀檢測(cè)分析44-51
• 4.5 小結(jié)51-53
• 第5章 結(jié)論53-55
• 參考文獻(xiàn)55-63
• 文獻(xiàn)綜述 Functional quantum dots for promising cancer diagnosis and therapy63-83
• References76-83
• 作者攻讀學(xué)位期間的科研成果83-85
• 致謝85

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前3條

1 Jong Young Choi;Seung Won Jung;Hee Yeon Kim;Myungshin Kim;Yonggoo Kim;Dong Goo Kim;Eun-Jee Oh;;Diagnostic value of AFP-L3 and PIVKA-Ⅱin hepatocellular carcinoma according to total-AFP[J];World Journal of Gastroenterology;2013年03期

2 ;Specific molecular markers in hepatocellular carcinoma[J];Hepatobiliary & Pancreatic Diseases International;2007年03期

3 ;Detection of Tumor Marker CA125 in Ovarian Carcinoma Using Quantum Dots[J];Acta Biochimica et Biophysica Sinica;2004年10期

，

本文編號(hào)：612955