本文關(guān)鍵詞：貝伐單抗通過內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激機制誘導(dǎo)肺癌A549細胞凋亡

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【摘要】：目的:觀察貝伐單抗對肺癌A549細胞的影響,探索其作用機制。方法:1.貝伐單抗處理A549細胞,A549細胞用含量為10%胎牛血清的RPMI-1640培養(yǎng),培養(yǎng)在溫度37°C,CO2濃度5%的細胞培養(yǎng)箱中。貝伐單抗用滅菌注射用水稀釋。細胞用濃度為0μM、1μM、5μM、25μM的貝伐單抗處理12、24、48或72小時。2.CCK-8法檢測A549細胞增殖抑制,A549細胞接種到96孔板中(100μL/孔),用不同濃度(0μM、1μM、5μM、25μM)的貝伐單抗處理12、24、48、72小時后,每孔加入10μL的CCK-8溶液。在培養(yǎng)箱中繼續(xù)孵育4小時,用酶標儀測定在450nm處的吸光值。每次處理重復(fù)三次,計算平均值。3.流式細胞技術(shù)檢測A549細胞凋亡,A549細胞接種在60-mm平板過夜,用不同濃度(0μM、1μM、5μM、25μM)貝伐單抗處理24小時,PBS緩沖液洗滌三次,0.25%tryptan-EDTA消化。離心后,將細胞在0.5ml PBS中的懸浮。細胞用膜聯(lián)蛋白V(Annexin V)和碘化丙啶(PI)染色,RNA酶和0.1%Triton X-100室溫處理30分鐘。用熒光激活細胞分選儀進行流式細胞分析。4.熒光實時定量PCR檢測RNA表達,總m RNA的提取來自經(jīng)不同濃度(0μM、1μM、5μM、25μM)貝伐單抗處理的細胞,使用Ambion RNA-queous試劑盒。高容量c DNA Archive試劑盒用來獲得的m RNA的第一鏈c DNA。CHOP、caspase-4、IRE1、XBP-1的m RNA水平檢測通過特異性基因表達測定試劑盒、實時聚合酶鏈式反應(yīng)(Real-time PCR)檢測系統(tǒng)完成。5.蛋白免疫印跡技術(shù)檢測蛋白表達,將細胞溶解,收集上清液,用已知的方法萃取胞漿蛋白或核蛋白。在電壓為120m V的三鹽酸聚丙烯酰胺凝膠,將蛋白轉(zhuǎn)移到聚偏二氟乙烯印跡膜,膜上用特異性多克隆抗體做探針。從蛋白裂解液中取得相同的蛋白量進行電泳分析,β-actin做為內(nèi)參。結(jié)果:1.貝伐單抗處理肺癌A549細胞12小時,表現(xiàn)出對細胞增殖的抑制作用輕微,但處理24小時后則顯著誘導(dǎo)細胞凋亡,并呈劑量依賴性。與此相反,作為對照組的貝伐單抗(0μM)在對任一時間處理過的細胞系中沒有顯著抑制作用。這些數(shù)據(jù)表明,貝伐單抗可抑制A549細胞增殖。2.我們采用流式細胞儀評估貝伐單抗對A549細胞凋亡的影響。結(jié)果表明,在使用貝伐單抗處理24小時后,可顯著誘導(dǎo)細胞凋亡,這表明貝伐單抗參與了導(dǎo)致細胞凋亡的信號通路。3.我們進一步研究了貝伐單抗通過內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激(endoplasmic reticulum stress,ERS)介導(dǎo)的途徑誘導(dǎo)A549細胞凋亡的可能性。細胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激導(dǎo)致的未折疊蛋白反應(yīng)((unfolded protein response,UPR)中,我們選取內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激上游肌醇需求酶1(inositol requiring enzyme 1,IRE-1)、X盒結(jié)合蛋白1(X-box binding protein 1,XBP1)作為檢測指標,內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激誘導(dǎo)性凋亡(endoplasmic reticulum stress-induced apoptosis,ERSIA)信號通路中選取C/EBP同源蛋白(C/EBP-homologous protein,CHOP)、半胱天冬氨酸4(caspase-4)作為檢測指標。結(jié)果表明,在RNA水平較對照組(0μM)而言,XBP-1在濃度為1μM、5μM、25μM各組的表達均明顯增加,為2.196±0.101,4.605±0.413,2.532±0.185(p0.01);CHOP(25μM)組及caspase-4(5μM)組的表達也有小幅增加,為2.191±0.112,1.588±0.167(p0.05)。在蛋白水平,CHOP的表達水平較對照組(0μM)0.33±0.08而言,濃度為1μM、5μM、25μM各組的表達均明顯增加,為0.67±0.08,1.52±0.24,1.32±0.31(p0.05);caspase-4的表達較對照組(0μM)0.24±0.08而言,濃度為5μM、25μM兩組的表達均有增加,為0.65±0.15,0.63±0.23(p0.05)。我們的數(shù)據(jù)顯示貝伐單抗激活了內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激誘導(dǎo)性凋亡級聯(lián)反應(yīng)。結(jié)論:1.貝伐單抗在體外可抑制肺癌A549細胞增殖2.貝伐單抗在體外可促進肺癌A549細胞凋亡3.貝伐單抗在抑制肺癌A549細胞增殖以及在促進肺癌A549細胞凋亡過程中,出現(xiàn)了內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)通路的活化。4.貝伐單抗通過加重細胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激程度誘導(dǎo)肺癌A549細胞凋亡。
【關(guān)鍵詞】：貝伐單抗 內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激 A549細胞 凋亡
【學位授予單位】：南華大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R734.2
【目錄】：

• 摘要4-8
• Abstract8-13
• 主要縮略詞簡表13-14
• 第1章 前言14-16
• 第2章 材料與方法16-28
• 第3章 實驗結(jié)果28-32
• 第4章 討論32-36
• 第5章 結(jié)論36-38
• 參考文獻38-42
• 附圖42-50
• 綜述50-60
• 參考文獻56-60
• 攻讀碩士學位期間撰寫論文60-62
• 致謝62

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1 王東生,袁肇凱,郭志華;細胞凋亡與中醫(yī)藥[J];中國中醫(yī)藥信息雜志;2000年12期

2 萬曉艷,于蘇國,郭玉芹,何慶;細胞凋亡與自身免疫性甲狀腺疾病的研究進展[J];中國地方病防治雜志;2002年06期

3 祝偉民,林建棣,馬曉東,段小平;運動與細胞凋亡[J];中國臨床康復(fù);2004年27期

4 王會玲,景文莉,張小紅,高維娟;細胞凋亡與心肌缺血-再灌注損傷[J];承德醫(yī)學院學報;2005年04期

5 梁薇;細胞凋亡的中藥調(diào)節(jié)機制[J];四川中醫(yī);2005年11期

6 張松彪;細胞凋亡與細胞養(yǎng)生[J];中國科技產(chǎn)業(yè);2005年01期

7 楊竹林,伍漢文;細胞凋亡調(diào)控因素有關(guān)基因的研究[J];國外醫(yī)學(生理、病理科學與臨床分冊);1997年02期

8 劉恩梅,楊錫強;細胞凋亡及其影響因素[J];重慶醫(yī)學;1998年01期

9 ;美開發(fā)調(diào)控細胞凋亡藥物[J];中國腫瘤;1999年07期

10 管孝鞠,廖明陽;細胞凋亡在致畸中的作用[J];衛(wèi)生毒理學雜志;2000年02期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 陳穎麗;李前忠;;不同亞細胞位置的細胞凋亡蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)特性分析[A];第十一次中國生物物理學術(shù)大會暨第九屆全國會員代表大會摘要集[C];2009年

2 孫英麗;趙允;朱山;翟中和;;植物細胞凋亡及其機理的研究[A];中國細胞生物學學會第七次會議論文摘要匯編[C];1999年

3 劉二龍;袁慧;;鋅與細胞凋亡[A];2003全國家畜內(nèi)科學學術(shù)研討會論文專輯[C];2003年

4 邱潔;高海青;;鋅在細胞凋亡中的作用研究進展[A];山東省微量元素科學研究會第三屆學術(shù)研討會論文匯編[C];2006年

5 俞雅萍;;細胞凋亡的機制及途徑和影響因素[A];華東六省一市生物化學與分子生物學學會2006年學術(shù)交流會論文集[C];2006年

6 于青;袁偉杰;姚建;;晚期糖基化終末產(chǎn)物引起足細胞凋亡的機制[A];2007年浙滬兩地腎臟病學術(shù)年會資料匯編[C];2007年

7 季宇彬;尹立;汲晨鋒;;調(diào)控細胞凋亡的線粒體因素[A];腫瘤病因?qū)W研究與中西醫(yī)結(jié)合腫瘤綜合診療交流研討會論文集[C];2009年

8 吳經(jīng)緯;湯長發(fā);;運動中細胞凋亡的線粒體變化特征[A];湖南省生理科學會2006年度學術(shù)年會論文摘要匯編[C];2007年

9 蒲小平;李長齡;屠鵬飛;宋志宏;;中藥肉叢蓉成分抗神經(jīng)細胞凋亡的實驗研究[A];第七屆全國生化藥理學術(shù)討論會論文摘要集[C];2000年

10 江鍵;宋誠榮;崔黎麗;方影;王小平;;靜電場對細胞凋亡作用的初步探討[A];中國物理學會第九屆靜電學術(shù)年會論文集[C];2000年

中國重要報紙全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 商東;“細胞凋亡”與臨床醫(yī)學[N];中國醫(yī)藥報;2001年

2 張志軍;細胞凋亡與中醫(yī)藥[N];中國醫(yī)藥報;2002年

3 ;“細胞凋亡療法”正逐步成為治療癌癥的新途徑[N];中國高新技術(shù)產(chǎn)業(yè)導(dǎo)報;2002年

4 記者張建松;治療癌癥新途徑：細胞凋亡療法[N];科技日報;2002年

5 李明輝;“細胞凋亡”治癌癥[N];醫(yī)藥導(dǎo)報;2002年

6 洪敏;細胞凋亡研究引人關(guān)注[N];中國醫(yī)藥報;2008年

7 陶春祥;細胞凋亡對心臟疾病的影響[N];中國醫(yī)藥報;2003年

8 本報實習記者 梁媛媛;薛定：發(fā)現(xiàn)癌癥“開關(guān)”[N];北京科技報;2010年

9 高書明;誘導(dǎo)癌細胞凋亡[N];中國醫(yī)藥報;2004年

10 勇匯;中藥誘導(dǎo)癌細胞凋亡研究進展[N];中國醫(yī)藥報;2002年

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1 楊利;系列多氮類化合物的抗腫瘤活性研究[D];武漢大學;2012年

2 張浩;從分子、細胞和動物水平研究鉛誘發(fā)氧化損傷及細胞凋亡的效應(yīng)與機理[D];山東大學;2015年

3 何欣怡;家蠶微孢子蟲（Nosema bombycis）抑制家蠶BmN細胞凋亡的功能研究[D];浙江大學;2015年

4 馮全服;從線粒體途徑研究川芎嗪誘導(dǎo)HepG2細胞凋亡效應(yīng)機制[D];南京中醫(yī)藥大學;2015年

5 張曉倩;高糖誘導(dǎo)Bim蛋白高表達而促腎近曲小管上皮細胞凋亡的機制探討[D];山東大學;2015年

6 孫健瑋;PTEN基因負調(diào)控Raf1磷酸化的作用及其對PC3細胞凋亡的影響[D];昆明醫(yī)科大學;2014年

7 徐林艷;腫瘤細胞凋亡過程中TNFRSF10B和CFLAR調(diào)控機制研究[D];山東大學;2015年

8 樊慶端;生物調(diào)控網(wǎng)絡(luò)的建模與動力學行為研究[D];上海大學;2015年

9 王德選;WNK_3對鈉氯協(xié)調(diào)轉(zhuǎn)運子的調(diào)節(jié)及在胚腎細胞凋亡中的保護作用[D];南方醫(yī)科大學;2015年

10 葉嘉;Nogo-B在急性肺損傷肺泡上皮細胞凋亡中的作用[D];第二軍醫(yī)大學;2015年

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1 曹璐璐;2,2’,4,4’-四溴聯(lián)苯醚(BDE-47)對人胚腎細胞(HEK293)的毒理效應(yīng)及作用機制研究[D];中國科學院煙臺海岸帶研究所;2015年

2 張薇;蒜頭果蛋白誘導(dǎo)HepG-2細胞凋亡的研究[D];云南民族大學;2015年

3 唐建國;視黃醇X受體出核抑制對神經(jīng)元細胞凋亡的影響[D];福建醫(yī)科大學;2015年

4 安璐;3-氯-1,2-丙二醇細胞毒性及其誘導(dǎo)HEK293細胞凋亡途徑探究[D];江南大學;2015年

5 楊翔;Procaspase-8的異常表達抑制TRAIL誘導(dǎo)腫瘤細胞凋亡[D];昆明理工大學;2015年

6 張昌明;I3C通過調(diào)控p53泛素化對喉癌Hep-2細胞凋亡的影響[D];延邊大學;2015年

7 彭涵;共軛亞油酸對仔豬脂肪細胞凋亡的影響[D];西南大學;2015年

8 李立輝;ΔFosB通過MMP-9調(diào)控山羊乳腺上皮細胞凋亡的分子機制[D];西北農(nóng)林科技大學;2015年

9 楊鑫鋮;Hedgehog信號通路在大鼠急性胰腺炎腺泡細胞凋亡中的作用[D];河北醫(yī)科大學;2015年

10 賈瓊瓊;MicroRNA-214對H_2O_2損傷L6骨骼肌成肌細胞增殖和凋亡的影響[D];河北醫(yī)科大學;2015年

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