本文關(guān)鍵詞：嵌合體抗原受體修飾的T細胞對血液惡性腫瘤細胞的殺傷

  更多相關(guān)文章： 嵌合抗原受體(CAR) T細胞 CD19/CD138 套式淋巴瘤 骨髓瘤

【摘要】：為了分別探討靶向CD19分子和CD138分子的嵌合抗原受體修飾的T細胞(CD19/CD138-CAR-T)與未被基因修飾的T細胞相比,是否可以提高對CD19+的套式淋巴瘤細胞和CD138+骨髓瘤的殺傷率。我們通過基因合成和分子克隆手段構(gòu)建CD19/CD138-CAR片段,將CD19/CD138-CAR片段分別克隆到慢病毒載體上,然后用慢病毒對T細胞進行轉(zhuǎn)染。利用PCR、蛋白免疫印跡術(shù)、流式細胞術(shù)檢測目的蛋白在T細胞上的表達。最后用流式細胞術(shù)檢測T細胞對腫瘤細胞的殺傷效果。結(jié)果發(fā)現(xiàn)未被CAR基因修飾的T細胞對CD19陽性的Jeko-1、Rec-1、Maver-1細胞的殺傷效率分別為30%、17%和32%,而CD19-CAR-T細胞對上述3種腫瘤細胞的殺傷效率分別為78%、60%和75%;未被基因修飾的T細胞對CD138陽性的U266和8226細胞的殺傷率分別為10%和38%,而CD138-CAR-T細胞對上述2種腫瘤細胞的殺傷率分別為43%和86%。得出結(jié)論為經(jīng)CD19/CD138嵌合抗原體受體修飾的T細胞可特異性識別CD19/CD138分子,對CD19/CD138陽性的腫瘤細胞的殺傷效率顯著高于未被基因修飾的T細胞,顯示出CAR-T在免疫治療中具有巨大潛力。為了得到兼具細胞毒殺傷毒性和在體外長期維持活性的中央記憶T細胞,我們選用Persongen aAPC以及IL-7對CAR-T細胞進行擴增。
【關(guān)鍵詞】：嵌合抗原受體(CAR) T細胞 CD19/CD138 套式淋巴瘤 骨髓瘤
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R730.51
【目錄】：

• 中文摘要4-5
• Abstract5-8
• 引言8-13
• 材料和方法13-20
• 1 實驗材料13-14
• 1.1 細胞系13
• 1.2 主要試劑與材料13
• 1.3 主要儀器與設(shè)備13-14
• 1.4 主要抗體14
• 2 實驗方法14-20
• 2.1 CD19-CAR-pCDH和CD138-CAR-pCDH載體的構(gòu)建14
• 2.2 細胞培養(yǎng)14-15
• 2.3 慢病毒包裝15-16
• 2.4 分離并制備淋巴細胞單細胞懸液16
• 2.5 T細胞體外激活16-17
• 2.6 慢病毒轉(zhuǎn)染T細胞17
• 2.7 PCR分析17-18
• 2.8 蛋白免疫印跡（Western blotting, WB）分析18-19
• 2.9 流式細胞術(shù)（Flow cytometry, FC）分析19
• 2.10 細胞毒性試驗19-20
• 結(jié)果20-30
• Part 1：CD19嵌合抗原受體修飾的T細胞對CD19+套式淋巴瘤細胞的殺傷20-25
• 1.1 CD19-CAR-PCDH重組質(zhì)粒構(gòu)建成功20-21
• 1.2 慢病毒包裝、濃縮、滴度測定結(jié)果21-22
• 1.3 PCR分析結(jié)果表明CD19-CAR片段在T細胞內(nèi)是正常表達的22
• 1.4 CD19-CAR片段的蛋白表達分析22-23
• 1.5 流式表型分析檢測到CD19-CAR片段有蛋白表達在T細胞膜外23-24
• 1.6 CD19-CAR修飾的T細胞對套式淋巴瘤有更高的殺傷率24-25
• Part 2：CD138嵌合抗原受體修飾的T細胞對CD138陽性骨髓瘤細胞的殺傷25-27
• 2.1 CD138-CAR-PCDH重組質(zhì)粒構(gòu)建成功25-26
• 2.2 CD138-CAR修飾的T細胞對骨髓瘤細胞有更高的殺傷率26-27
• Part 3：體外對嵌合抗原受體修飾的T細胞進行表型分析27-30
• 3.1 體外用IL-7 和IL-15刺激T細胞得到CD8+CD45RA+CD62L+亞群27-30
• 討論30-32
• 參考文獻32-36
• 綜述36-51
• 參考文獻43-51
• 致謝51-53

【共引文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

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本文編號：603752