本文關(guān)鍵詞：DADS對uPAR高表達(dá)SW480細(xì)胞遷移侵襲的影響

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【摘要】：目的:二烯丙基二硫(DADS)是大蒜中的主要有效成分,具有很高的開發(fā)潛力。我們之前工作證實(shí),DADS能在體內(nèi)外抑制人結(jié)腸癌細(xì)胞增殖與遷移侵襲。尿激酶型纖溶酶原激活物受體(uPAR)與腫瘤細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移及EMT密切相關(guān),阻斷uPAR信號傳導(dǎo)通路可逆轉(zhuǎn)腫瘤細(xì)胞EMT、抑制腫瘤細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移。迄今,鮮有DADS抑制腫瘤細(xì)胞EMT及侵襲轉(zhuǎn)移作用的相關(guān)報(bào)道。本課題在前期研究的基礎(chǔ)上,通過構(gòu)建uPAR高表達(dá)的SW480細(xì)胞系,研究DADS下調(diào)uPAR信號通路介導(dǎo)抑制人結(jié)腸細(xì)胞EMT與遷移侵襲,證實(shí)DADS在對腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移和EMT的抑制過程中,uPAR起到關(guān)鍵性作用,對DADS進(jìn)行臨床應(yīng)用開發(fā),提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。方法:pIRES2-EGFP-uPAR真核表達(dá)載體轉(zhuǎn)染SW480細(xì)胞,構(gòu)建穩(wěn)定uPAR高表達(dá)SW480細(xì)胞系。Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)與劃痕實(shí)驗(yàn)檢測DADS對uPAR高表達(dá)SW480細(xì)胞遷移侵襲的作用。RT-PCR和Western blot檢測DADS對uPAR高表達(dá)SW480細(xì)胞EMT及uPAR相關(guān)信號分子的影響。裸鼠移植瘤實(shí)驗(yàn)檢測DADS對uPAR高表達(dá)SW480細(xì)胞移植瘤生長的作用。結(jié)果:1.成功建立穩(wěn)定uPAR高表達(dá)的SW480細(xì)胞。將pIRES2-EGFP和pIRES2-EGFP-uPAR真核表達(dá)載體分別轉(zhuǎn)染SW480細(xì)胞,通過熒光顯微鏡,可以觀察到綠色熒光,證明pIRES2-EGFP/uPAR和pIRES2-EGFP已經(jīng)導(dǎo)入到SW480細(xì)胞當(dāng)中。RT-PCR與Western blot顯示,uPAR/SW480細(xì)胞uPAR mRNA和蛋白均具有較高的表達(dá)量,表明建立穩(wěn)定uPAR高表達(dá)的SW480細(xì)胞。2.DADS對uPAR高表達(dá)SW480細(xì)胞遷移的影響。劃痕實(shí)驗(yàn)顯示,uPAR高表達(dá)細(xì)胞的遷移距離明顯大于SW480細(xì)胞(P0.05)。DADS處理后,空載體細(xì)胞的遷移距離明顯低于SW480細(xì)胞和uPAR高表達(dá)細(xì)胞(P0.05)。uPAR高表達(dá)細(xì)胞的遷移距離明顯低于DADS處理前ii(p0.05)。表明upar高表達(dá)增強(qiáng)sw480細(xì)胞的遷移能力,dads可抑制upar高表達(dá)sw480細(xì)胞的遷移。3.dads對upar高表達(dá)sw480細(xì)胞侵襲的影響。侵襲實(shí)驗(yàn)顯示,upar高表達(dá)組穿膜細(xì)胞較sw480組明顯增加(p0.05)。dads作用24h后,空載體細(xì)胞穿膜細(xì)胞明顯少于sw480組與upar高表達(dá)組(p0.05)。upar高表達(dá)組較處理前穿膜細(xì)胞顯著減少(p0.05)。表明dads可抑制upar高表達(dá)sw480細(xì)胞的侵襲能力,upar高表達(dá)可增強(qiáng)侵襲作用。4.dads對upar高表達(dá)sw480細(xì)胞emt的影響rt-pcr和westernblot顯示,upar高表達(dá)組vimentin表達(dá)較sw480細(xì)胞明顯上調(diào),e-cadherin顯著下調(diào)(p0.05)。dads作用后,空載體細(xì)胞vimentin表達(dá)較sw480細(xì)胞與upar高表達(dá)組明顯下調(diào)和e-cadherin顯著上調(diào)(p0.05),upar高表達(dá)組較處理前vimentin明顯下調(diào)與e-cadherin上調(diào)(p0.05)。表明upar高表達(dá)可促進(jìn)emt,dads通過下調(diào)upar高表達(dá)sw480細(xì)胞vimentin與上調(diào)e-cadherin表達(dá)抑制emt。5.dads對upar相關(guān)分子的影響。rt-pcr和westernblot顯示,upar高表達(dá)組upar、upa與mmp-9較sw480細(xì)胞明顯上調(diào)(p0.05)。dads作用后,空載體細(xì)胞upar、upa與mmp-9表達(dá)較sw480細(xì)胞與upar高表達(dá)組明顯下調(diào)(p0.05),upar高表達(dá)組較處理前upar、upa與mmp-9明顯下調(diào)(p0.05)。6.dads與upar高表達(dá)對裸鼠成瘤能力的影響。裸鼠實(shí)驗(yàn)表明,dads處理組與相應(yīng)未處理組比較,腫瘤生長速度明顯減慢(p0.05),upar高表達(dá)組較sw480組移植瘤生長明顯增快(p0.05)。dads處理組的瘤重較相應(yīng)未處理組顯著性減少(p0.05),upar高表達(dá)組明顯重于sw480組(p0.05)。dads處理組較未處理組與upar高表達(dá)組移植瘤細(xì)胞異型性降低。dads處理后e-cadherin陽性表達(dá)明顯增強(qiáng),vimentin、ki-67、cd34陽性表達(dá)明顯降低;upar高表達(dá)組的ki-67、cd34、vimentin陽性表達(dá)均明顯增強(qiáng),e-cadherin陽性表達(dá)明顯降低。結(jié)論:1.upar高表達(dá)可促進(jìn)sw480細(xì)胞的emt、遷移侵襲及成瘤能力。2.dads可抑制upar高表達(dá)的sw480細(xì)胞的emt、遷移侵襲及成瘤能力。
【關(guān)鍵詞】：二烯丙基二硫 uPAR 遷移 侵襲 EMT
【學(xué)位授予單位】：南華大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R735.35
【目錄】：

• 中文摘要7-10
• 英文摘要10-13
• 第1章 前言13-15
• 第2章 材料與方法15-27
• 1 實(shí)驗(yàn)材料15-17
• 2. 實(shí)驗(yàn)方法17-27
• 第3章 結(jié)果27-49
• 1. 穩(wěn)定 u PAR 高表達(dá)的 SW480 細(xì)胞系的建立27-30
• 2. u PAR 高表達(dá)對 SW480 細(xì)胞生物學(xué)特性的影響30-33
• 3. DADS 與 uPAR 高表達(dá)對 SW480 細(xì)胞 EMT 的影響33-37
• 4. DADS 對 u PAR 相關(guān)分子的影響37-43
• 5. DADS 與 u PAR 高表達(dá)對 SW480 細(xì)胞裸鼠成瘤能力的影響43-49
• 第4章 討論49-53
• 結(jié)論53-55
• 參考文獻(xiàn)55-61
• 綜述61-67
• 參考文獻(xiàn)64-67
• 讀碩期間撰寫的論文67-69
• 致謝69

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 Ko Eun Lee;Pham Ngoc Khoi;Yong Xia;Jung Sun Park;Young Eun Joo;Kyung Keun Kim;Seok Yong Choi;Young Do Jung;;Helicobacter pylori and interleukin-8 in gastric cancer[J];World Journal of Gastroenterology;2013年45期

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本文編號：601547