發(fā)布時(shí)間：2017-07-31 22:32

  本文關(guān)鍵詞：HIPK2抑制非小細(xì)胞肺癌上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化及遷移侵襲的作用及機(jī)制研究

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【摘要】：[背景]隨著我國(guó)環(huán)境問(wèn)題的不斷惡化,肺癌的發(fā)病率逐年上升,已經(jīng)被國(guó)家列為需要重點(diǎn)防治的惡性腫瘤之一。根據(jù)肺癌的細(xì)胞類型,通�？梢詫⑵浞譃榉切〖�(xì)胞肺癌(non-small cell lung cancer, NSCLC)及小細(xì)胞肺癌(small cell lung cancer, SCLC)兩類,其中非小細(xì)胞肺癌約占總數(shù)的80%～85%。目前針對(duì)肺癌的治療,臨床上主要以外科手術(shù)為主,結(jié)合化療、放療以及免疫治療等方法。然而據(jù)統(tǒng)計(jì)顯示,約有85%的患者在首次確診時(shí)原發(fā)病灶已發(fā)生轉(zhuǎn)移,侵犯周圍淋巴結(jié)或器官,此時(shí)手術(shù)治療效果非常差。因此,研究肺癌發(fā)生轉(zhuǎn)移的原因及機(jī)制,將有利于肺癌的早期診斷和綜合治療。上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化(epithelial-mesenchymal transitions, EMT)在肺癌發(fā)生發(fā)展過(guò)程中發(fā)揮著重要作用�；贓MT的過(guò)程,細(xì)胞獲得更強(qiáng)的遷移和侵襲能力,促使腫瘤發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移。尋找參與調(diào)節(jié)肺癌細(xì)胞EMT進(jìn)程的相關(guān)基因,深入研究其分子機(jī)制,是當(dāng)前針對(duì)肺癌分子靶向治療的研究熱點(diǎn)。1998年,由Kim等研究人員,通過(guò)酵母雙雜交技術(shù)發(fā)現(xiàn)了一類蛋白,它們包含一個(gè)保守的蛋白激酶結(jié)構(gòu)域,使其能夠從同源異型蛋白中分離出來(lái),因此被命名為同源結(jié)構(gòu)域相互作用蛋白激酶(Homeodomain-interacting protein kinases, HIPKs), HIPKs分為HIPK1、HIPK2、HIPK3。其中HIPK2是一種主要定位于細(xì)胞核內(nèi)的絲氨酸／蘇氨酸蛋白激酶。HIPK2可以誘導(dǎo)或抑制轉(zhuǎn)錄從而調(diào)節(jié)細(xì)胞分化、增殖及凋亡。DNA損傷或氧化應(yīng)激反應(yīng)時(shí),HIPK2能夠激活腫瘤抑制基因p53,促進(jìn)細(xì)胞凋亡。作為腫瘤抑制基因,HIPK2在多種腫瘤的發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)移過(guò)程中發(fā)揮著重要作用,但關(guān)于HIPK2在非小細(xì)胞肺癌中的具體作用尚不清楚。[目的]探討同源結(jié)構(gòu)域相互作用蛋白激酶2(HIPK2)在人非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)細(xì)胞中對(duì)上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化(EMT)及遷移侵襲的影響,并初步探討其可能的作用機(jī)制。[方法]應(yīng)用Lipofectamine 2000在NSCLC細(xì)胞株A549、H520中轉(zhuǎn)染HIPK2高表達(dá)質(zhì)粒及其對(duì)照質(zhì)粒；應(yīng)用慢病毒感染在A549細(xì)胞中構(gòu)建HIPK2穩(wěn)定沉默細(xì)胞系(A549-shHIPK2)及其對(duì)照細(xì)胞系；應(yīng)用Lipofectamine 2000在A549-shHIPK2細(xì)胞系中轉(zhuǎn)染轉(zhuǎn)錄因子ZEB1的干擾質(zhì)粒及其對(duì)照質(zhì)粒；Western blotting檢測(cè)HIPK2表達(dá)水平及其對(duì)EMT標(biāo)記蛋白的影響；應(yīng)用細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)、Transwell實(shí)驗(yàn)、Matrigel實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞遷移、侵襲能力。[結(jié)果]高表達(dá)HIPK2能夠增強(qiáng)NSCLC細(xì)胞上皮標(biāo)記蛋白的表達(dá)、抑制間質(zhì)標(biāo)記蛋白的表達(dá),對(duì)EMT起抑制作用；同時(shí),高表達(dá)HIPK2也能夠抑制細(xì)胞的遷移和侵襲能力。沉默HIPK2則促進(jìn)EMT發(fā)生、促進(jìn)細(xì)胞的遷移和侵襲。干擾轉(zhuǎn)錄因子ZEB1的表達(dá)可以緩解HIPK2沉默引起的EMT和遷移侵襲現(xiàn)象。[結(jié)論]HIPK2具有抑制NSCLC細(xì)胞EMT和遷移侵襲的作用,其發(fā)生機(jī)制可能與轉(zhuǎn)錄因子ZEB1有關(guān)。
【關(guān)鍵詞】：同源結(jié)構(gòu)域相互作用蛋白激酶2 非小細(xì)胞肺癌 上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化 遷移 侵襲
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R734.2
【目錄】：

• 中文摘要6-8
• 英文摘要8-10
• 符號(hào)說(shuō)明10-12
• 前言12-17
• 實(shí)驗(yàn)材料17-22
• 實(shí)驗(yàn)方法22-32
• 實(shí)驗(yàn)結(jié)果32-36
• 討論36-39
• 結(jié)論39-40
• 附圖40-49
• 參考文獻(xiàn)49-53
• 致謝53-54
• 碩士期間發(fā)表論文情況54-55
• 學(xué)位論文評(píng)閱及答辯情況表55

【相似文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：601440