本文關(guān)鍵詞：DOX可誘導(dǎo)的PENK基因在293T細(xì)胞中的表達(dá)

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【摘要】：目的:以前期實(shí)驗(yàn)的載體PMT155(p LVX-TRE3G-MCS-PGK-3Gtransactivator-EGFP)構(gòu)建含有DOX誘導(dǎo)基因PENK表達(dá)的慢病毒載體PSB2034(p LVX-TRE3G-PENK-PGK-3Gtransactivator-EGFP,含開(kāi)關(guān)調(diào)控和靶基因),使其感染293T細(xì)胞,獲得能在DOX存在的情況下穩(wěn)定表達(dá)腦啡肽的293T細(xì)胞,后續(xù)的研究可以以此作依據(jù),臨床疼痛管理也可以此擴(kuò)寬思路,尋求新療法。方法:1.含有PENK基因的可調(diào)控載體的構(gòu)建在GENE BANK上查找目的基因,確定編碼區(qū)和非編碼區(qū),由吉?jiǎng)P基因設(shè)計(jì)引物用于釣取PENK基因和鑒定轉(zhuǎn)化子。PCR反應(yīng)體系進(jìn)行擴(kuò)增目的基因,之后使用瓊膠試劑盒進(jìn)行目的基因片段切割、回收。把回收的目的基因同源重組入表達(dá)載體構(gòu)建出載體PSB2034,進(jìn)行轉(zhuǎn)化,取轉(zhuǎn)化子菌落進(jìn)行PCR鑒定和基因測(cè)序。2.293T細(xì)胞的包裝復(fù)融并培養(yǎng)293T細(xì)胞使其細(xì)胞融合約80~90%。實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組加入質(zhì)粒(實(shí)驗(yàn)組p SB2034對(duì)照組p MT155)d R8.9包裝質(zhì)粒和VSVG包裝質(zhì)粒進(jìn)行慢病毒的包裝,而后包裝293T,并用DOX誘導(dǎo),QPCR檢測(cè)出PENK過(guò)表達(dá),WB檢出條帶反應(yīng)。結(jié)果:對(duì)產(chǎn)物PSB2034進(jìn)行測(cè)序與目的基因比證明無(wú)誤;感染過(guò)程中,用熒光顯微鏡觀察細(xì)胞,發(fā)現(xiàn)多于95%的細(xì)胞都帶有熒光,滴度檢測(cè)證明轉(zhuǎn)染成功,DOX誘導(dǎo)后可檢測(cè)出PENK基因過(guò)表達(dá)。結(jié)論:本實(shí)驗(yàn)已經(jīng)構(gòu)建出DOX誘導(dǎo)后能穩(wěn)定表達(dá)腦啡肽的293T細(xì)胞。
【關(guān)鍵詞】：慢病毒 293T細(xì)胞 可誘導(dǎo) 前腦啡肽
【學(xué)位授予單位】：山西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R614;R730.5
【目錄】：

• 摘要5-7
• Abstract7-9
• 常用縮寫詞中英文對(duì)照表9-10
• 前言10-11
• 1 材料與方法11-22
• 1.1 實(shí)驗(yàn)材料11-14
• 1.2 實(shí)驗(yàn)方法14-22
• 2 結(jié)果22-30
• 2.1 PCR擴(kuò)增PENK結(jié)果22-23
• 2.2 陽(yáng)性克隆序列檢測(cè)結(jié)果分析23-25
• 2.3 293T細(xì)胞的感染照片25
• 2.4 滴度檢測(cè)結(jié)果及照片25-28
• 2.5 DOX誘導(dǎo) 293T細(xì)胞后PENK表達(dá)情況檢測(cè)28-30
• 3 討論30-31
• 4 結(jié)論31-32
• 參考文獻(xiàn)32-35
• 綜述35-43
• 參考文獻(xiàn)40-43
• 致謝43-44
• 在學(xué)期間承擔(dān)/參與的科研課題與研究成果44-45
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷45

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本文編號(hào)：588328