發(fā)布時間：2017-07-29 09:00

  本文關(guān)鍵詞：DOX可誘導的PENK基因在293T細胞中的表達

  更多相關(guān)文章： 慢病毒 293T細胞 可誘導 前腦啡肽

【摘要】：目的:以前期實驗的載體PMT155(p LVX-TRE3G-MCS-PGK-3Gtransactivator-EGFP)構(gòu)建含有DOX誘導基因PENK表達的慢病毒載體PSB2034(p LVX-TRE3G-PENK-PGK-3Gtransactivator-EGFP,含開關(guān)調(diào)控和靶基因),使其感染293T細胞,獲得能在DOX存在的情況下穩(wěn)定表達腦啡肽的293T細胞,后續(xù)的研究可以以此作依據(jù),臨床疼痛管理也可以此擴寬思路,尋求新療法。方法:1.含有PENK基因的可調(diào)控載體的構(gòu)建在GENE BANK上查找目的基因,確定編碼區(qū)和非編碼區(qū),由吉凱基因設(shè)計引物用于釣取PENK基因和鑒定轉(zhuǎn)化子。PCR反應(yīng)體系進行擴增目的基因,之后使用瓊膠試劑盒進行目的基因片段切割、回收。把回收的目的基因同源重組入表達載體構(gòu)建出載體PSB2034,進行轉(zhuǎn)化,取轉(zhuǎn)化子菌落進行PCR鑒定和基因測序。2.293T細胞的包裝復(fù)融并培養(yǎng)293T細胞使其細胞融合約80~90%。實驗組和對照組加入質(zhì)粒(實驗組p SB2034對照組p MT155)d R8.9包裝質(zhì)粒和VSVG包裝質(zhì)粒進行慢病毒的包裝,而后包裝293T,并用DOX誘導,QPCR檢測出PENK過表達,WB檢出條帶反應(yīng)。結(jié)果:對產(chǎn)物PSB2034進行測序與目的基因比證明無誤;感染過程中,用熒光顯微鏡觀察細胞,發(fā)現(xiàn)多于95%的細胞都帶有熒光,滴度檢測證明轉(zhuǎn)染成功,DOX誘導后可檢測出PENK基因過表達。結(jié)論:本實驗已經(jīng)構(gòu)建出DOX誘導后能穩(wěn)定表達腦啡肽的293T細胞。
【關(guān)鍵詞】：慢病毒 293T細胞 可誘導 前腦啡肽
【學位授予單位】：山西醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R614;R730.5
【目錄】：

• 摘要5-7
• Abstract7-9
• 常用縮寫詞中英文對照表9-10
• 前言10-11
• 1 材料與方法11-22
• 1.1 實驗材料11-14
• 1.2 實驗方法14-22
• 2 結(jié)果22-30
• 2.1 PCR擴增PENK結(jié)果22-23
• 2.2 陽性克隆序列檢測結(jié)果分析23-25
• 2.3 293T細胞的感染照片25
• 2.4 滴度檢測結(jié)果及照片25-28
• 2.5 DOX誘導 293T細胞后PENK表達情況檢測28-30
• 3 討論30-31
• 4 結(jié)論31-32
• 參考文獻32-35
• 綜述35-43
• 參考文獻40-43
• 致謝43-44
• 在學期間承擔/參與的科研課題與研究成果44-45
• 個人簡歷45

【相似文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前4條

1 魏尉;李東正;李剛;顧榮民;明學志;陳環(huán)球;文旭;;DOX新輔助化療方案對進展期食管胃交界部癌和遠端胃癌的效果評價[J];中國腫瘤外科雜志;2013年05期

2 魏尉;李東正;顧榮民;陳環(huán)球;文旭;;DOX方案新輔助化療對進展期胃癌的療效分析[J];南京醫(yī)科大學學報(自然科學版);2013年10期

3 胡汛，潘鏘榮，，鄭樹;P─糖蛋白過表達不能完全解釋MDR細胞株K562／Dox的抗藥性[J];中華腫瘤雜志;1995年02期

4 ;[J];;年期

中國碩士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 田冬冬;DOX可誘導的PENK基因在293T細胞中的表達[D];山西醫(yī)科大學;2016年

本文編號：588328