本文關(guān)鍵詞：URI抑制重鉻酸鉀誘導(dǎo)的SGC-7901細胞氧化應(yīng)激、DNA損傷及其機制

  更多相關(guān)文章： URI 胃癌細胞SGC-7901 重鉻酸鉀 活性氧自由基 DNA損傷與修復(fù) 細胞死亡

【摘要】：研究背景:鉻(chromium,Cr)是一種天然的元素,在大氣,土壤,巖石,微生物,植物以及動物體內(nèi)都有發(fā)現(xiàn)。它主要以三價鉻[Cr(III)]和六價鉻[Cr(VI)]這兩種價態(tài)的形式存在于自然界。其中Cr(VI)是已知的致癌劑。工業(yè)生產(chǎn)過程中的Cr(VI)是導(dǎo)致工人職業(yè)性肺癌的重要原因。長期暴露在污染的Cr(VI)環(huán)境中會對人體健康產(chǎn)生嚴重的危害,如肝腎器官損害、接觸性皮炎、皮膚癌等。Cr(VI)導(dǎo)致的細胞氧化應(yīng)激和DNA損傷是腫瘤形成的主要原因。除肺癌外,Cr(VI)還可導(dǎo)致消化道腫瘤等,但其具體機制還有待研究。URI(unconventional prefoldin RPB5 interactor,URI)屬于前折疊素家族,可以與RNA聚合酶的亞基RPB5蛋白結(jié)合,主要參與多種基因轉(zhuǎn)錄水平的調(diào)控。研究結(jié)果表明,URI對維護線蟲和果蠅基因組的穩(wěn)定性發(fā)揮重要的作用,URI沉默后,會導(dǎo)致DNA損傷的累積從而導(dǎo)致細胞凋亡。URI也被認為是一個促癌蛋白,能夠促進多種腫瘤細胞的增殖,并抵抗細胞凋亡。研究還發(fā)現(xiàn)URI是一種放射敏感蛋白。而重鉻酸鉀是一種常見的Cr(VI)鹽,已被證實是一種化學(xué)致癌劑,但對其致癌機制目前尚不清楚。研究目的:對正常細胞而言,重鉻酸鉀具有細胞毒性和致瘤性。但腫瘤細胞對重鉻酸鉀處理后會有什么反應(yīng)?面對細胞毒性,加強DNA損傷的修復(fù)和逃避死亡是腫瘤細胞的特性,而URI是一個癌蛋白,URI在重鉻酸鉀誘導(dǎo)的腫瘤細胞氧化應(yīng)激DNA損傷等過程中是否具有保護作用?本研究通過敲低SGC-7901細胞中URI的表達,研究在重鉻酸鉀誘導(dǎo)SGC-7901細胞ROS產(chǎn)生,DNA損傷及修復(fù),細胞死亡過程中URI的作用,進一步豐富對URI功能的理解,也為URI在重鉻酸鉀誘導(dǎo)腫瘤的形成過程提供新的思路。研究方法:(1)應(yīng)用si RNA沉默技術(shù)在人胃癌細胞SGC-7901中敲低URI,設(shè)置si RNA-A干擾組,Scrambled無關(guān)序列組和Blank空白組。并采用免疫印跡方法檢測其表達水平,驗證URI敲低效果。(2)用DCH-DA試劑盒分別用流式以及熒光方法檢測上述各組細胞在重鉻酸鉀作用后細胞內(nèi)DCF的熒光強度,以此反映細胞ROS水平。(3)用彗星實驗檢測各組細胞在相應(yīng)重鉻酸鉀處理后的OTM值,設(shè)置重鉻酸鉀的濃度(1μM,10μM),用OTM值反映細胞DNA損傷程度及修復(fù)效率。(4)用Annexin V/PI染色試劑盒通過流式細胞術(shù)檢測各組細胞在重鉻酸鉀處理后的細胞凋亡及壞死。(5)免疫印跡和免疫熒光方法檢測各組細胞在重鉻酸鉀處理后相應(yīng)蛋白的表達,包括抗凋亡蛋白Bcl-2,Mcl-1和促凋亡蛋白Bax以及凋亡誘導(dǎo)因子AIF等。(6)NAD+測定試劑盒檢測各組細胞在相應(yīng)重鉻酸鉀處理后細胞中NAD+的含量。研究結(jié)果:(1)URI干擾后,重鉻酸鉀誘導(dǎo)SGC-7901細胞的ROS產(chǎn)生明顯增加。(2)URI干擾后,重鉻酸鉀誘導(dǎo)SGC-7901細胞的DNA損傷明顯增加,且在相對高濃度的重鉻酸鉀作用SGC-7901細胞后,URI干擾后抑制了細胞對DNA損傷修復(fù)的能力。(3)相對低濃度的重鉻酸鉀導(dǎo)致SGC-7901細胞的死亡主要是依賴線粒體途徑的凋亡,而相對高濃度重鉻酸鉀作用SGC-7901細胞主要是依賴PARP1途徑的壞死。并且URI干擾后,這兩種細胞的死亡都明顯增加。結(jié)論:(1)URI能夠抑制重鉻酸鉀誘導(dǎo)的細胞ROS產(chǎn)生,說明URI參與了重鉻酸鉀誘導(dǎo)細胞氧化應(yīng)激的調(diào)節(jié)。(2)URI能降低重鉻酸鉀誘導(dǎo)的細胞DNA損傷,URI干擾后顯著抑制了細胞在10μM濃度重鉻酸鉀作用后DNA損傷的修復(fù)效率。提示URI能影響重鉻酸鉀誘導(dǎo)的細胞DNA損傷及其修復(fù)。(3)URI對重鉻酸鉀作用下的細胞存活發(fā)揮作用,URI能抵抗重鉻酸鉀誘導(dǎo)的細胞死亡。
【關(guān)鍵詞】：URI 胃癌細胞SGC-7901 重鉻酸鉀 活性氧自由基 DNA損傷與修復(fù) 細胞死亡
【學(xué)位授予單位】：江蘇大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R730.2
【目錄】：

• 摘要5-9
• ABSTRACT9-13
• 主要英文縮略詞索引13-17
• 第一章 緒論17-31
• 1.1 URI蛋白的功能研究17-18
• 1.2 鉻的細胞毒性18-23
• 1.2.1 鉻的代謝18-19
• 1.2.2 Cr(VI)與細胞氧化應(yīng)激19-21
• 1.2.3 Cr(VI)的基因毒性21-23
• 1.3 DNA損傷與修復(fù)23-25
• 1.3.1 Cr(VI)導(dǎo)致的DNA損傷修復(fù)23
• 1.3.2 彗星實驗檢測DNA的損傷及修復(fù)23-25
• 1.4 細胞死亡25-29
• 1.4.1 細胞凋亡(apoptosis)25-27
• 1.4.2 凋亡調(diào)節(jié)蛋白27-28
• 1.4.3 細胞壞死(necrosis)28-29
• 1.4.4 PARP1與Parthanatos29
• 1.5 總結(jié)29-31
• 第二章 URI對重鉻酸鉀誘導(dǎo)SGC-7901細胞ROS產(chǎn)生的影響31-41
• 2.1 材料31-33
• 2.1.1 主要材料31-32
• 2.1.2 主要試劑32
• 2.1.3 主要儀器32-33
• 2.2 方法33-36
• 2.2.1 SGC-7901細胞培養(yǎng)33
• 2.2.2 轉(zhuǎn)染URI siRNA干擾片段A33-34
• 2.2.3 蛋白印跡分析（Western blot）34-36
• 2.2.4 細胞內(nèi)ROS水平的檢測36
• 2.2.5 統(tǒng)計學(xué)分析36
• 2.3 結(jié)果36-39
• 2.3.1 Western blot檢測SGC-7901細胞轉(zhuǎn)染后URI的表達36-37
• 2.3.2 URI干擾后促進重鉻酸鉀誘導(dǎo)SGC-7901細胞ROS的產(chǎn)生37-39
• 2.4 討論39-41
• 第三章 URI在重鉻酸鉀誘導(dǎo)SGC-7901細胞的DNA損傷及修復(fù)中的作用41-52
• 3.1 材料41-42
• 3.1.1 主要材料41
• 3.1.2 主要試劑41-42
• 3.1.3 主要儀器42
• 3.2 方法42-45
• 3.2.1 Western blot檢測 γH2AX42
• 3.2.2 免疫熒光檢測 γH2AX42-43
• 3.2.3 彗星實驗檢測DNA損傷及修復(fù)43-44
• 3.2.4 統(tǒng)計學(xué)分析44-45
• 3.3 結(jié)果45-50
• 3.3.1 重鉻酸鉀濃度的選取45-46
• 3.3.2 URI能夠減低重鉻酸鉀造成的SGC-7901細胞DNA損傷46-48
• 3.3.3 URI能促進SGC-7901細胞對重鉻酸鉀導(dǎo)致的DNA損傷修復(fù)48-50
• 3.4 討論50-52
• 第四章 URI在重鉻酸鉀導(dǎo)致的SGC-7901細胞死亡中的作用52-68
• 4.1 材料52-53
• 4.1.1 主要材料52
• 4.1.2 主要試劑52
• 4.1.3 主要儀器52-53
• 4.2 方法53-56
• 4.2.1 CCK-8 試劑盒檢測細胞存活率53
• 4.2.2 JC-1 檢測線粒體膜電位53
• 4.2.3 PI染色檢測ROS導(dǎo)致的細胞死亡53-54
• 4.2.4 流式檢測細胞凋亡54
• 4.2.5 分光光度法檢測細胞NAD+的含量54
• 4.2.6 免疫熒光檢測AIF54-55
• 4.2.7 Western blot檢測凋亡調(diào)節(jié)蛋白55
• 4.2.8 統(tǒng)計學(xué)分析55-56
• 4.3 結(jié)果56-65
• 4.3.1 URI干擾抑制了重鉻酸鉀作用后SGC-7901細胞的增殖56-58
• 4.3.2 URI干擾促進重鉻酸鉀誘導(dǎo)的SGC-7901細胞的壞死與凋亡58-60
• 4.3.3 URI在重鉻酸鉀導(dǎo)致SGC-7901細胞的凋亡與壞死的依賴途徑中的作用60-65
• 4.4 討論65-68
• 結(jié)論與展望68-70
• 結(jié)論68
• 展望68-70
• 參考文獻70-83
• 致謝83-84
• 在學(xué)期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文84

【相似文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 李力;持續(xù)性DNA損傷和姊妹染色單體交換的細胞消失[J];國外醫(yī)學(xué).遺傳學(xué)分冊;1986年02期

2 張遵真,衡正昌;用單細胞凝膠電泳技術(shù)檢測鉻和砷化物的DNA損傷作用[J];中華預(yù)防醫(yī)學(xué)雜志;1997年06期

3 李志春,吳逸明,徐玉寶,陳琛;煤焦瀝青煙提取物致大鼠肺泡巨噬細胞DNA損傷作用[J];新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院學(xué)報;2001年04期

4 謝俊剛,徐永健,張珍祥,張寧,倪望,陳仕新;DNA損傷與慢性阻塞性肺疾病的關(guān)系[J];中華內(nèi)科雜志;2005年09期

5 賀錫雯;生物體姊妹染色單體互換:一種檢測DNA損傷的靈敏方法[J];國外醫(yī)學(xué)(衛(wèi)生學(xué)分冊);1979年06期

6 王民生,蔣蕓,陳炎磐;異佛爾酮二異氰酸酯誘發(fā)DNA損傷的研究[J];衛(wèi)生毒理學(xué)雜志;1990年03期

7 孟建峰,莊志雄,倪祖堯;單細胞凝膠電泳法測定鎳化物對人血細胞的DNA損傷[J];中華勞動衛(wèi)生職業(yè)病雜志;1997年06期

8 劉玉梅;張潤玲;蘇海翔;;新生兒缺氧缺血性腦病血谷胱甘肽過氧化物酶水平與DNA損傷的關(guān)系探討[J];國外醫(yī)學(xué).臨床生物化學(xué)與檢驗學(xué)分冊;2005年12期

9 所起鳳;杜文婷;楊鳴鳴;范雪嬌;劉戟;;過氧化氫誘導(dǎo)的人正常和早老細胞中DNA損傷及其修復(fù)研究[J];四川大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版);2011年05期

10 李新蘭;DNA損傷將增加黑色素的生成[J];國外醫(yī)學(xué)(分子生物學(xué)分冊);1996年06期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 朱宏翔;胡建安;武越;黃云;熊敏如;;人支氣管上皮細胞5-脂氧合酶介導(dǎo)的4-氨基聯(lián)苯活化及DNA損傷[A];湖南省預(yù)防醫(yī)學(xué)會勞動衛(wèi)生專業(yè)委員會2009年學(xué)術(shù)交流會議論文集[C];2009年

2 朱萍萍;廖惠珍;張金華;施文振;;不同食物對鎘致小鼠肝細胞DNA損傷的影響[A];中國毒理學(xué)會第四屆全國學(xué)術(shù)會議論文（摘要）集[C];2005年

3 潘虹;陳鳳秀;任思沖;王若菡;劉戟;;活性氧自由基導(dǎo)致的人類正常細胞和早老細胞中DNA損傷及其修復(fù)效率的比較(英文)[A];第九屆西南三省一市生物化學(xué)與分子生物學(xué)學(xué)術(shù)交流會論文集[C];2008年

4 吳志鴻;;彗法分析紫外線誘導(dǎo)的人晶狀體上皮細胞DNA的損傷及抗氯化劑對DNA損傷的拮抗作用[A];中華醫(yī)學(xué)會第十二屆全國眼科學(xué)術(shù)大會論文匯編[C];2007年

5 張志超;王媛媛;吳桂葉;錢旭紅;;染色質(zhì)構(gòu)像變化引起轉(zhuǎn)錄阻滯觸發(fā)p53介導(dǎo)的細胞凋亡:利用一對DNA拓撲結(jié)構(gòu)探針研究DNA損傷信號轉(zhuǎn)導(dǎo)[A];中國化學(xué)會第26屆學(xué)術(shù)年會化學(xué)生物分會場論文集[C];2008年

6 羅瓊;黃荷鳳;錢羽力;朱小明;孟慶霞;;環(huán)境電磁輻射對小鼠種植前胚胎DNA損傷及其機制的研究[A];首屆滬浙婦產(chǎn)科學(xué)術(shù)論壇暨2006年浙江省婦產(chǎn)科學(xué)學(xué)術(shù)年會論文匯編[C];2006年

7 曹毅;陳瑞;王仲文;邢曉紅;王小莉;;輻射和化學(xué)物質(zhì)誘導(dǎo)的DNA損傷研究[A];中華醫(yī)學(xué)會放射醫(yī)學(xué)與防護學(xué)分會第三次全國中青年學(xué)術(shù)交流會論文匯編[C];2001年

8 梁建成;汪春紅;;維生素C抗DNA損傷作用的研究進展[A];湖北省、武漢市營養(yǎng)學(xué)會第十屆學(xué)術(shù)會議論文摘要匯編[C];2004年

9 何蕊;江其生;;單細胞凝膠電泳技術(shù)及其在核輻射等因素誘導(dǎo)的DNA損傷評估中的應(yīng)用[A];第十屆全軍檢驗醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2005年

10 李雪竹;嚴海東;王俊;劉娜;;糖基化終產(chǎn)物對腎間質(zhì)成纖維細胞DNA損傷影響的研究[A];中華醫(yī)學(xué)會腎臟病學(xué)分會2006年學(xué)術(shù)年會論文集[C];2006年

中國重要報紙全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 黑龍江哈爾濱市疾病預(yù)防控制中心 劉曉波 李晶 樸海錦 程玉芝 李巖 薛長玲 李桂玉;核酸對鉛中毒大鼠DNA損傷的影響[N];保健時報;2009年

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 劉偉;硫丹對生物DNA損傷和土壤微生物群落多樣性的影響[D];山東農(nóng)業(yè)大學(xué);2009年

2 劉婷婷;亞硝基脲導(dǎo)致DNA損傷機理的密度泛函理論研究[D];北京工業(yè)大學(xué);2013年

3 劉金鳳;PML NBs新組分分子鑒定及其在DNA損傷反應(yīng)中的功能機制研究[D];中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院;2010年

4 吳涵;透明質(zhì)酸對滴眼液常用促滲劑誘導(dǎo)角膜上皮細胞DNA損傷保護作用的研究[D];浙江大學(xué);2011年

5 潘欣;SOX4參與了DNA損傷反應(yīng)中p53的激活[D];中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院;2008年

6 王浩彤;EGFR突變非小細胞肺癌對化療藥物引發(fā)DNA損傷敏感性篩查及臨床意義[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2014年

7 武冬梅;二氧化硫?qū)π∈蟛煌M織器官的氧化應(yīng)激、DNA損傷及細胞因子的影響[D];山西大學(xué);2004年

8 茹晉麗;甲氨蝶呤聯(lián)合環(huán)磷酰胺對大鼠毒副作用和細胞周期、DNA損傷作用機制的實驗研究[D];山西醫(yī)科大學(xué);2007年

9 張廣林;順鉑誘導(dǎo)DNA損傷的核蛋白組學(xué)研究和microRNA分析[D];浙江大學(xué);2011年

10 邢德印;DNA損傷和DNA修復(fù)基因多態(tài)與食管癌風(fēng)險[D];中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué);2002年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 朱越;FOXO3a信號在納米二氧化鈦氣管暴露致大鼠DNA損傷中的作用研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2015年

2 章艷燕;五味子乙素預(yù)防BaP致HTR-8/SV neo細胞氧化損傷及DNA損傷的研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2015年

3 董建云;DEB通過氧化應(yīng)激誘導(dǎo)雄性生殖細胞DNA損傷和周阻滯的研究[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2015年

4 陳文濤;泛素連接酶Ring2在苯并(a)芘致人支氣管上皮細胞DNA損傷及細胞周期變化中的作用研究[D];山西醫(yī)科大學(xué);2015年

5 李艷強;甲基叔丁基醚單一及與鎘復(fù)合對蚯蚓生理指標(biāo)和DNA損傷影響研究[D];山東農(nóng)業(yè)大學(xué);2015年

6 許時麗;依達拉奉對COPD患者外周血單個核細胞的DNA損傷和NF-κB水平影響的研究[D];南華大學(xué);2015年

7 駱慧惠;4E-BP1在電離輻射誘發(fā)DNA損傷應(yīng)激中的作用及其分子機制研究[D];南華大學(xué);2015年

8 李靜;TIPE2介導(dǎo)的DNA損傷反應(yīng)在HCV致癌過程中的作用[D];河南大學(xué);2015年

9 張飛;鉻、鎳、錳作業(yè)工人的DNA損傷和褪黑素的影響因素的研究[D];山西醫(yī)科大學(xué);2016年

10 凱德麗艷·阿布都外力（Kadirya abduwali）;葉酸在甲基硝基亞硝基胍致哈薩克族食管上皮永生化細胞DNA損傷中的作用[D];新疆醫(yī)科大學(xué);2016年

，

本文編號：578033