本文關(guān)鍵詞：過表達(dá)miR-101調(diào)節(jié)腦膠質(zhì)瘤增殖、遷移的機(jī)制研究

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【摘要】：膠質(zhì)瘤為顱內(nèi)最常見的惡性腫瘤,其發(fā)病率約占顱內(nèi)腫瘤的46%左右,根據(jù)世界衛(wèi)生組織(WHO)可分為I-IV級(jí),其中IV級(jí)中預(yù)后最差的病理分型的是膠質(zhì)母細(xì)胞瘤(Glioblastoma multiforme,GBM)�；颊咦匀徊〕潭嘣诎肽暌詢�(nèi)。且經(jīng)過手術(shù)、放化療以及免疫靶向治療,患者中位生存期沒有明顯延長(zhǎng)。MicroRNA(miRNA)分子作為一種可以通過靶向作用于多個(gè)靶基因而又同時(shí)被多個(gè)基因作為共同的靶標(biāo)的分子,普遍存在于動(dòng)植物體內(nèi)的內(nèi)源性非編碼的小分子RNA,其在生命活動(dòng)中起到了多種作用。MiRNA通過特異的互補(bǔ)識(shí)別位點(diǎn)在轉(zhuǎn)錄后一直靶基因的翻譯,或者降解調(diào)節(jié)下游基因的表達(dá)水平。膠質(zhì)瘤作為最致命的顱內(nèi)惡性腫瘤之一,其中也存在microRNA表達(dá)譜異常。以往研究表明多種microRNA亞型與已知的膠質(zhì)瘤主要的相關(guān)信號(hào)通路相關(guān),即microRNA的異常表達(dá)參與了膠質(zhì)瘤的生長(zhǎng)和侵襲。同時(shí),外源性的把microRNA分子人為導(dǎo)入膠質(zhì)瘤細(xì)胞,可以有效糾正相關(guān)microRNA亞型表達(dá)下調(diào)的相關(guān)表型,為利用microRNA進(jìn)行外源性導(dǎo)入治療腦膠質(zhì)提供了重要依據(jù)。Mi R-101在以往文獻(xiàn)的研究中表明:miR-101低表達(dá)與膠質(zhì)瘤的發(fā)生、發(fā)展呈正相關(guān)關(guān)系,并且低表達(dá)mi R-101的肝癌患者的生存率較低。有報(bào)道表明,miR-101能夠直接抑制EZH2和c-Myc的表達(dá),進(jìn)而抑制膠質(zhì)瘤細(xì)胞的增殖于侵襲。在臨床患者,膠質(zhì)瘤的術(shù)后差和復(fù)發(fā)率高于腫瘤其本身的高侵襲性有關(guān),miR-101在以往的研究中參與影響膠質(zhì)瘤的侵襲和和增殖性,但具體的下游作用分子到目前還沒有完全弄清楚,所以在膠質(zhì)瘤中研究miR-101與其腫瘤的高侵襲性的關(guān)系的具體機(jī)制變得十分重要。本研究中,我們通過文獻(xiàn)回顧和相關(guān)軟件的生物信息學(xué)分析,我們將研究放在miR-101與膠質(zhì)瘤細(xì)胞的增殖、侵襲肝癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移的關(guān)系上。首先,為研究miR-101與膠質(zhì)瘤細(xì)胞增殖、侵襲的關(guān)系,我們通過qRT-PCR檢測(cè)臨床腫瘤和正常腦組織標(biāo)本中miR-101的表達(dá)水平;同時(shí)利用過表達(dá)miR-101的慢病毒感染U87、U251膠質(zhì)瘤細(xì)胞系,構(gòu)建過表達(dá)miR-101的穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞系。通過MTT實(shí)驗(yàn)、劃痕實(shí)驗(yàn)、Transwell實(shí)驗(yàn)、裸鼠成瘤實(shí)驗(yàn)分析了miR-101對(duì)于膠質(zhì)瘤的體內(nèi)、外的影響;其次,為明確miR-101抑制膠質(zhì)瘤增殖、遷移的分子機(jī)制,運(yùn)用分子克隆技術(shù)檢測(cè)結(jié)合文獻(xiàn)和靶基因預(yù)測(cè)軟件分析的靶基因的3’UTR區(qū)域,并將其連接到pGL3-Control的報(bào)告載體上。同時(shí)利用熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)、Western blot及qRT-PCR等多種方法證實(shí)SOX9在膠質(zhì)瘤中是miR-101調(diào)控的直接靶基因進(jìn)行驗(yàn)證。同時(shí)應(yīng)用慢病毒技術(shù)構(gòu)建了干涉轉(zhuǎn)錄因子SOX9表達(dá)的穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞系。應(yīng)用通過MTT實(shí)驗(yàn)、劃痕實(shí)驗(yàn)、Transwell實(shí)驗(yàn)等分析SOX9對(duì)于膠質(zhì)瘤細(xì)胞表型影響;通過結(jié)果分析發(fā)現(xiàn),qRT-PCR分析結(jié)果證明膠質(zhì)瘤標(biāo)本中的miR-101的表達(dá)水平較正常腦組織明顯降低;慢病毒感染U87、U251膠質(zhì)瘤細(xì)胞后miR-101的表達(dá)水平明顯升高;MTT實(shí)驗(yàn)顯示過表達(dá)miR-101促進(jìn)膠質(zhì)瘤細(xì)胞增殖、遷移的能力;裸鼠皮下成瘤實(shí)驗(yàn)證明過表達(dá)miR-101可以有效抑制裸鼠皮下成瘤的能力;熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)、Western blot及qRT-PCR實(shí)驗(yàn)證明SOX9確實(shí)為miR-101的下游調(diào)控的直接靶基因;利用慢病毒技術(shù)構(gòu)建干涉轉(zhuǎn)錄因子SOX9的穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞系,Western blot及qRT-PCR實(shí)驗(yàn)證明了干涉SOX9可以有效降低膠質(zhì)瘤細(xì)胞的增殖和侵襲。綜上所述,我們認(rèn)為在膠質(zhì)瘤中存在如下的調(diào)控關(guān)系,即miR-10可以直接作用于SOX9進(jìn)而抑制膠質(zhì)瘤的增殖、遷移的能力。
【關(guān)鍵詞】：膠質(zhì)瘤 miR-101 SOX9 增殖 侵襲
【學(xué)位授予單位】：第四軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R739.41
【目錄】：

• 縮略語表5-7
• 中文摘要7-9
• 英文摘要9-12
• 前言12-14
• 文獻(xiàn)回顧14-22
• 實(shí)驗(yàn)一 miR-101在膠質(zhì)瘤細(xì)胞系和組織中的表達(dá)22-28
• 1 實(shí)驗(yàn)材料22-23
• 2 實(shí)驗(yàn)方法23-25
• 3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果25-27
• 4 討論27-28
• 實(shí)驗(yàn)二 miR-101抑制膠質(zhì)瘤細(xì)胞中的惡性表型28-34
• 1 實(shí)驗(yàn)材料28-29
• 2 實(shí)驗(yàn)方法29-31
• 3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果31-33
• 4 討論33-34
• 實(shí)驗(yàn)三 過表達(dá)miR-101對(duì)于裸鼠皮下成瘤的影響34-38
• 1 實(shí)驗(yàn)材料34-35
• 2 實(shí)驗(yàn)方法35-37
• 3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果37
• 4 討論37-38
• 實(shí)驗(yàn)四 miR-101靶向調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)錄因子SOX938-48
• 1 實(shí)驗(yàn)材料38-39
• 2 實(shí)驗(yàn)方法39-46
• 3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果46-47
• 4 討論47-48
• 實(shí)驗(yàn)五 SOX9在膠質(zhì)瘤細(xì)胞中的生物學(xué)功能48-55
• 1 實(shí)驗(yàn)材料48-49
• 2 實(shí)驗(yàn)方法49-50
• 3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果50-53
• 4 討論53-55
• 小結(jié)55-57
• 參考文獻(xiàn)57-70
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷及研究成果70-71
• 致謝71-72

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