本文關(guān)鍵詞：CCDC8基因?qū)θ橄侔┘?xì)胞株MDA-MB-231的作用及與ANKRA2、LKB1、14-3-3σ之間相互關(guān)系的研究

  更多相關(guān)文章： CCDC8 乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-231 小干擾RNA 細(xì)胞增殖 細(xì)胞侵襲

【摘要】：[目的]近年來(lái)乳腺癌有年輕化的趨勢(shì),而三陰性乳腺癌中年輕患者居多。三陰性乳腺癌被認(rèn)為是多階段、多因素、多基因共同作用的結(jié)果,該實(shí)驗(yàn)選用三陰性乳腺癌細(xì)胞株MDA-MB-231,通過(guò)沉默該株細(xì)胞的CCDC8基因,觀察其對(duì)乳腺癌MDA-MB-231細(xì)胞增殖和侵襲能力的影響,并探討在該細(xì)胞系中CCDC8基因與ANKRA-2、LKB-1及14-3-3幾個(gè)基因間的相互關(guān)系。[方法]1、以CCDC8 RNA中944、1860、1979為作用靶點(diǎn)合成三條siRNA干擾片段并用脂質(zhì)體法轉(zhuǎn)染MDA-MB-231細(xì)胞,同時(shí)設(shè)NC作為陰性對(duì)照組。2、通過(guò)觀察熒光及RT-PCR篩選穩(wěn)定細(xì)胞轉(zhuǎn)染株。3、MTT檢測(cè)穩(wěn)定轉(zhuǎn)染組CCDC8-1860與陰性對(duì)照組的細(xì)胞增殖能力變化。4、用細(xì)胞劃痕的方法檢測(cè)穩(wěn)定轉(zhuǎn)染組CCDC8-1860與陰性對(duì)照組的細(xì)胞遷移能力變化。5、用流式細(xì)胞術(shù)(flow cytometry)分析穩(wěn)定轉(zhuǎn)染組CCDC8-1860對(duì)MDA-MB-231細(xì)胞周期、凋亡率變化。6、用平板細(xì)胞克隆實(shí)驗(yàn)分析穩(wěn)定轉(zhuǎn)染組CCDC8-1860細(xì)胞增殖能力和群體依賴性。7、實(shí)時(shí)熒光定量PCR和western blotting檢測(cè)CCDC8-1860作用后MDA-MB-231細(xì)胞中CCDC8、ANKRA-2、LKB-1及14-3-3σ?guī)讉�(gè)基因的RNA和蛋白的表達(dá)。[結(jié)果]1、RT-PCR檢測(cè)顯示其中1860.siRNA能有效抑制CCDC8-mRNA(p＜0.05).2.MTT檢測(cè)顯示CCDC8-1860轉(zhuǎn)染MDA-MB-231細(xì)胞后細(xì)胞增殖受到顯著抑制(p0.05)；3、細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)顯示經(jīng)CCDC8-1860轉(zhuǎn)染MDA-MB-231細(xì)胞后遷移速度明顯減慢(p0.05)；4、流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)結(jié)果顯示CCDC8-1860轉(zhuǎn)染MDA-MB-231細(xì)胞后凋亡率顯著增加且細(xì)胞周期阻滯于G1期(p0.05)；5、平板細(xì)胞克隆實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示CCDC8-1860轉(zhuǎn)染MDA-M-B231細(xì)胞克隆形成率降低,增殖能力減弱(p0.05)。6.qt-PCR及Western blotting結(jié)果顯示：a、.經(jīng)CCDC8-1860轉(zhuǎn)染后,CCDC8基因及蛋白表達(dá)均降低；b、經(jīng)CCDC8-1860轉(zhuǎn)染后,與陰性對(duì)照組對(duì)比實(shí)驗(yàn)組ANKRA2基因及蛋白表達(dá)均增強(qiáng)；c、經(jīng)CCDC8-1860轉(zhuǎn)染后,LKB1基因及蛋白表達(dá)均增強(qiáng)；d、經(jīng)CCDC8-1860轉(zhuǎn)染后,14-3-3 σ蛋白表達(dá)未見(jiàn)明顯變化。[結(jié)論]1、干擾CCDC8基因的表達(dá)可明顯抑制三陰性乳腺腫瘤細(xì)胞株MDA-MB-231的增殖,減低其遷移速度,促進(jìn)MDA-MB-231乳腺癌細(xì)胞的凋亡。2、干擾CCDC8基因在MDA-MB-231的表達(dá)使ANKRA2表達(dá)明顯增強(qiáng)；抑帶CCDC8的表達(dá)后LKB1的RNA及蛋白表達(dá)均增強(qiáng)；抑制CCDC8的表達(dá)后14-3-3σ的RNA及蛋白表達(dá)未見(jiàn)明顯變化。
【關(guān)鍵詞】：CCDC8 乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-231 小干擾RNA 細(xì)胞增殖 細(xì)胞侵襲
【學(xué)位授予單位】：昆明醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R737.9
【目錄】：

• 英文縮略詞表6-8
• 中文摘要8-10
• 英文摘要10-13
• 前言13-15
• 材料與方法15-33
• 實(shí)驗(yàn)材料15-19
• 實(shí)驗(yàn)方法19-33
• 實(shí)驗(yàn)結(jié)果33-55
• 1 細(xì)胞培養(yǎng)33
• 2 篩選最佳干擾序列33-38
• 3 MTT結(jié)果38-39
• 4 流式細(xì)胞學(xué)結(jié)果39-42
• 5 細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)結(jié)果42-44
• 6 細(xì)胞平板克隆實(shí)驗(yàn)結(jié)果44-46
• 7 si-RNA轉(zhuǎn)染MBA-MB-231細(xì)胞后mRNA變化46-52
• 8 Western blotting結(jié)果52-55
• 討論55-61
• 1 CCDC8基因討論55-56
• 2 CCDC8與ANKRA2、LKB-1、14-3-3基因相互關(guān)系討論56-61
• 結(jié)論61-62
• 參考文獻(xiàn)62-66
• 綜述66-73
• 參考文獻(xiàn)70-73
• 攻讀學(xué)位期間獲得的學(xué)術(shù)成果73-74
• 致謝74

【相似文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 賀蘭湘,張先林;家族性乳腺癌遺傳易感基因研究現(xiàn)狀[J];國(guó)外醫(yī)學(xué).遺傳學(xué)分冊(cè);2000年05期

2 裴曉華,馬秀t，

本文編號(hào)：571900