本文關(guān)鍵詞：淫羊藿苷對(duì)胃癌SGC-7901細(xì)胞內(nèi)CaSR及Survivin、Runx3基因表達(dá)的影響

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【摘要】：目的:通過觀察淫羊藿苷(ICA)聯(lián)合鈣敏感受體(CaSR)活性改變對(duì)胃癌SGC-7901細(xì)胞增殖的影響,及其對(duì)細(xì)胞內(nèi)CaSR及Survivin、Runx3基因表達(dá)的影響,探討ICA抗腫瘤的相關(guān)機(jī)制,為臨床應(yīng)用ICA治療胃癌提供實(shí)驗(yàn)依據(jù),促進(jìn)胃癌的有效治療,并促進(jìn)中藥有效成分在抗腫瘤治療方面更好地發(fā)揮優(yōu)勢(shì)。方法:體外培養(yǎng)人胃癌SGC-7901細(xì)胞1.ICA及ICA聯(lián)合CaSR活性改變對(duì)SGC-7901細(xì)胞增殖的影響:采用噻唑藍(lán)比色法(MTT)測(cè)定經(jīng)遞增劑量ICA(25 mg/L、50 mg/L、100 mg/L、200 mg/L、400 mg/L)、ICA聯(lián)合CaSR激動(dòng)劑(Calindol)和抑制劑(Calhex231),作用24 h、48 h及72 h后的SGC-7901細(xì)胞增殖抑制率。2.ICA聯(lián)合Calindol對(duì)SGC-7901細(xì)胞凋亡的影響:Hoechst染色法檢測(cè)ICA及ICA聯(lián)合Calindol對(duì)SGC-7901細(xì)胞作用48 h后的細(xì)胞凋亡情況。3.ICA聯(lián)合CaSR活性改變對(duì)SGC-7901細(xì)胞內(nèi)CaSR、Survivin、Runx3基因蛋白和mRNA表達(dá)的影響:ICA聯(lián)合Calindol、Calhex231對(duì)SGC-7901細(xì)胞作用48 h后,Western blot技術(shù)檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)CaSR、Survivin及Runx3基因蛋白的表達(dá)情況;RT-PCR技術(shù)檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)CaSR、Survivin及Runx3基因mRNA的表達(dá)情況。4.統(tǒng)計(jì)學(xué)方法:全部實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)均采用SPSS17.0軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,計(jì)量資料服從正態(tài)分布用均值(x±S)表達(dá),多組間比較采用方差分析,兩組間用SNK做兩兩比較;不服從正態(tài)分布采用中位數(shù)和四分位間距表達(dá),組間比較采用秩和檢驗(yàn)。計(jì)數(shù)資料用率表達(dá),組間比較采用卡方檢驗(yàn),以P0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果:1.MTT結(jié)果顯示不同濃度的ICA分別作用于SGC-7901細(xì)胞24 h、48 h及72 h后,均有明顯的抑制增殖的作用,與對(duì)照組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05),隨著藥物濃度的增加及作用時(shí)間的延長(zhǎng),其作用效果越強(qiáng),呈時(shí)間、劑量依賴性。2.不論作用24 h,48 h還是72 h,ICA聯(lián)合Calindol對(duì)SGC-7901細(xì)胞的抑制增殖作用明顯高于相同濃度的ICA或Calindol單獨(dú)作用于SGC-7901細(xì)胞的效果,與對(duì)照組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05),且呈時(shí)間依賴性。3.經(jīng)Hoechst33342染色后,ICA聯(lián)合Calindol對(duì)SGC-7901細(xì)胞的誘導(dǎo)凋亡的作用明顯高于相同濃度的ICA或Calindol單獨(dú)作用于SGC-7901細(xì)胞的效果。4.ICA和Calindol均能促進(jìn)SGC-7901細(xì)胞內(nèi)CaSR、Runx3蛋白和mRNA表達(dá)上調(diào),Survivin蛋白和mRNA表達(dá)下調(diào);二者聯(lián)合后促進(jìn)CaSR、Runx3表達(dá)上調(diào)和Survivin表達(dá)下調(diào)的作用效果明顯高于單獨(dú)作用,與對(duì)照組相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。結(jié)論:1.ICA能夠明顯抑制SGC-7901細(xì)胞的增殖,且呈時(shí)間和劑量依賴性。2.ICA與Calindol聯(lián)合作用于SGC-7901細(xì)胞,其抑制增殖的效應(yīng)明顯大于二者單獨(dú)作用于SGC-7901細(xì)胞,且呈時(shí)間依賴性。3.ICA能夠明顯誘導(dǎo)SGC-7901細(xì)胞的凋亡,且ICA與Calindol聯(lián)合作用于SGC-7901細(xì)胞后,誘導(dǎo)凋亡的作用明顯大于二者單獨(dú)作用的效果。4.ICA和Calindol對(duì)SGC-7901細(xì)胞的抑制增殖并誘導(dǎo)凋亡的作用與其上調(diào)Runx3的表達(dá)并下調(diào)Survivin的表達(dá)有關(guān)。
【關(guān)鍵詞】：淫羊藿苷 胃癌SGC-7901細(xì)胞 CaSR Runx3 Survivin
【學(xué)位授予單位】：甘肅中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R735.2
【目錄】：

• 摘要5-7
• ABSTRACT7-10
• 符號(hào)說明10-11
• 前言11-18
• 實(shí)驗(yàn)研究18-49
• 1 材料18-21
• 1.1 細(xì)胞18
• 1.2 實(shí)驗(yàn)藥品及試劑18-19
• 1.3 實(shí)驗(yàn)設(shè)備及儀器19-20
• 1.4 主要試劑和藥品的配制20-21
• 2 實(shí)驗(yàn)方法21-34
• 2.1 技術(shù)路線21-22
• 2.2 細(xì)胞培養(yǎng)22-23
• 2.3 MTT法檢測(cè)ICA對(duì)SGC-7901細(xì)胞增殖作用的影響23
• 2.4 MTT法檢測(cè)有效濃度ICA聯(lián)合Calindol對(duì)SGC-7901細(xì)胞增殖作用的影響23-24
• 2.5 Hoechst染色檢測(cè)細(xì)胞凋亡24-25
• 2.6 Western blot技術(shù)檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)CaSR、Survivin及Runx3基因的蛋白表達(dá)情況25-30
• 2.7 RT-PCR技術(shù)檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)CaSR、Survivin及Runx3基因的mRNA表達(dá)情況30-34
• 3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果34-45
• 3.1 ICA聯(lián)合Calindol對(duì)SGC-7901細(xì)胞增殖的影響35-37
• 3.2 ICA聯(lián)合Calindol對(duì)SGC-7901細(xì)胞凋亡的影響37-39
• 3.3 Western blot檢測(cè)CaSR、Survivin、Runx3蛋白表達(dá)39-42
• 3.4 RT-PCR檢測(cè)CaSR、Survivin、Runx3基因mRNA的表達(dá)42-45
• 4 分析與討論45-49
• 4.1 ICA聯(lián)合CaSR活性改變對(duì)SGC-7901細(xì)胞增殖的影響46
• 4.2 ICA聯(lián)合Calindol對(duì)SGC-7901細(xì)胞凋亡的影響46-47
• 4.3 ICA聯(lián)合CaSR活性改變對(duì)SGC-7901細(xì)胞內(nèi)CaSR、Survivin、Runx3蛋白和mRNA表達(dá)的影響47
• 4.4 ICA抗腫瘤的中醫(yī)藥理論基礎(chǔ)47-49
• 結(jié)語49-51
• 參考文獻(xiàn)51-56
• 文獻(xiàn)綜述56-61
• 參考文獻(xiàn)59-61
• 致謝61-62
• 在學(xué)期間主要研究成果62

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：561524