本文關(guān)鍵詞：基底樣型乳腺癌BT549細(xì)胞體外干性異質(zhì)性及其亞群細(xì)胞生物學(xué)性狀研究

  更多相關(guān)文章： 腫瘤異質(zhì)性 BT549 流式分選 失巢凋亡 藥物敏感性

【摘要】：腫瘤異質(zhì)性研究已是近期工作的熱點(diǎn),影響涉及腫瘤的生長(zhǎng)速度、侵襲能力、對(duì)藥物的敏感性、預(yù)后等各個(gè)方面。乳腺癌組織內(nèi)細(xì)胞的異質(zhì)性已被實(shí)驗(yàn)確認(rèn),多數(shù)研究指向腫瘤組織微環(huán)境和藥物干預(yù)的壓力。本研究通過分析體外培養(yǎng)的人乳腺癌細(xì)胞系的干性表型差異,驗(yàn)證腫瘤細(xì)胞存在著固有異質(zhì)性特征這一假設(shè),為我們提出的腫瘤細(xì)胞固有異質(zhì)性是腫瘤組織細(xì)胞異質(zhì)多樣性的根源提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。論文以篩選獲得CD44(+)/CD24(-/low)亞群細(xì)胞占總細(xì)胞比例接近50%的人乳腺癌BT549細(xì)胞系為研究材料,分別從乳腺癌干性抗原CD44/CD24和基底細(xì)胞樣型乳腺癌干性抗原CD49f的表達(dá)量進(jìn)行分析,將BT549細(xì)胞劃分成多種細(xì)胞亞群;每種細(xì)胞亞群對(duì)于通用干性抗原CD133的表達(dá)也具有明顯的差異性,而且CD133表達(dá)陽性的細(xì)胞在BT549細(xì)胞中所占比例很少,說明BT549細(xì)胞在干性抗原表達(dá)方面具有明顯的異質(zhì)性。對(duì)多種亞群細(xì)胞分別研究發(fā)現(xiàn),肌上皮細(xì)胞分化抗原CK14和α-SMA具有顯著的表達(dá)量差異,且CK14表達(dá)陽性細(xì)胞占BT549細(xì)胞的比例很少,提示BT549細(xì)胞具有分化不完全的性狀,同一亞群細(xì)胞分化程度的差異形成了各種異質(zhì)性細(xì)胞群之間的分化差異。流式分選獲得純度大于90%的CD44(+)/CD24(-)亞群細(xì)胞以及CD44(+)/CD24(+)亞群細(xì)胞,兩種亞群細(xì)胞在含有10%胎牛血清的完全培養(yǎng)基中可以穩(wěn)定生長(zhǎng),并且可以獨(dú)立長(zhǎng)期維持其干性表型,說明BT549細(xì)胞中的干性表型差異不受培養(yǎng)條件的影響,沒有出現(xiàn)干性表型的轉(zhuǎn)化。在完全培養(yǎng)基、貼壁培養(yǎng)條件下,CD44(+)/CD24(-)亞群細(xì)胞和CD44(+)/CD24(+)亞群細(xì)胞的增殖速度、凋亡水平與野生出發(fā)細(xì)胞沒有明確的差異,說明BT549細(xì)胞具有遺傳穩(wěn)定性。但是,野生出發(fā)細(xì)胞對(duì)低營養(yǎng)條件的耐受能力較CD44(+)/CD24(-)亞群細(xì)胞和CD44(+)/CD24(+)亞群細(xì)胞為優(yōu),CD44(+)/CD24(+)亞群細(xì)胞抵抗失巢凋亡能力較野生出發(fā)細(xì)胞和CD44(+)/CD24(-)亞群細(xì)胞更強(qiáng),且對(duì)紫杉醇的敏感性更低,說明BT549細(xì)胞存在生物學(xué)性狀的異質(zhì)性。這些結(jié)果說明BT549細(xì)胞在體外既存在干性抗原表達(dá)和分化抗原表達(dá)的異質(zhì)性,也存在相關(guān)生物學(xué)性狀如血清依賴度、抵抗失巢凋亡能力以及藥物敏感性的異質(zhì)性,說明乳腺癌細(xì)胞的固有異質(zhì)特性是乳腺癌異質(zhì)性的來源之一。
【關(guān)鍵詞】：腫瘤異質(zhì)性 BT549 流式分選 失巢凋亡 藥物敏感性
【學(xué)位授予單位】：江南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R737.9
【目錄】：

• 摘要3-4
• Abstract4-7
• 第一章 緒論7-14
• 1.1 課題研究背景7-13
• 1.1.1 腫瘤異質(zhì)性7-8
• 1.1.2 腫瘤異質(zhì)性與腫瘤耐藥之間的相關(guān)性8-10
• 1.1.3 腫瘤異質(zhì)性與腫瘤轉(zhuǎn)移之間的相關(guān)性10-11
• 1.1.4 乳腺癌干細(xì)胞的發(fā)現(xiàn)及其常用的分選方式11-12
• 1.1.5 乳腺癌分子分型與分化譜系12-13
• 1.2 課題研究?jī)?nèi)容13
• 1.3 課題研究意義13-14
• 第二章 人乳腺癌細(xì)胞干性抗原與分化抗原表型分析14-25
• 2.1 引言14
• 2.2 實(shí)驗(yàn)材料14-16
• 2.2.1 細(xì)胞系14
• 2.2.2 實(shí)驗(yàn)試劑14-15
• 2.2.3 實(shí)驗(yàn)儀器15-16
• 2.3 實(shí)驗(yàn)方法16-18
• 2.3.1 細(xì)胞培養(yǎng)方法16-17
• 2.3.2 流式細(xì)胞術(shù)17-18
• 2.4 結(jié)果與討論18-23
• 2.4.1 六株人乳腺癌細(xì)胞CD44/CD24的表達(dá)水平18-19
• 2.4.2 人乳腺癌BT549細(xì)胞系干性及分化抗原關(guān)系的分析19-20
• 2.4.3 人乳腺癌BT549細(xì)胞系中CD44~(+)/CD24~(low)和CD44~(+)/CD24~(high)亞群的分析20-22
• 2.4.4 人乳腺癌BT549細(xì)胞系中CD44~(high)和CD44~(low)亞群的分析22
• 2.4.5 人乳腺癌BT549細(xì)胞系中CD49f~(high)和CD49~(f~(-))亞群的分析22-23
• 2.5 本章小結(jié)23-25
• 第三章 人乳腺癌BT549細(xì)胞CD44/CD24表型異質(zhì)性及亞群細(xì)胞生物學(xué)性狀的研究25-39
• 3.1 引言25
• 3.2 實(shí)驗(yàn)材料25-26
• 3.2.1 細(xì)胞系25
• 3.2.2 實(shí)驗(yàn)試劑25-26
• 3.2.3 實(shí)驗(yàn)儀器26
• 3.3 實(shí)驗(yàn)方法26-30
• 3.3.1 細(xì)胞培養(yǎng)方法26-27
• 3.3.2 流式細(xì)胞術(shù)27-28
• 3.3.3 分選純度分析28
• 3.3.4 CFSE示蹤檢測(cè)細(xì)胞增殖能力[110]28
• 3.3.5 貼壁細(xì)胞凋亡檢測(cè)[111]28-29
• 3.3.6 CCK-8 法檢測(cè)不同濃度血清培養(yǎng)條件下的細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)[112]29
• 3.3.7 檢測(cè)細(xì)胞失巢凋亡抗性[113]29
• 3.3.8 CCK-8 法檢測(cè)細(xì)胞的藥物敏感性[112]29-30
• 3.4 結(jié)果與討論30-38
• 3.4.1 人乳腺癌BT549細(xì)胞系CD44~(+)/CD24~(-)及CD44~(+)/CD24~(+)亞群細(xì)胞在培養(yǎng)過程中干性表型的變化30-33
• 3.4.2 野生型BT549細(xì)胞與CD44~(+)/CD24~(-)亞群細(xì)胞、CD44~(+)/CD24~(+)亞群細(xì)胞三者間血清依賴度、抗失巢凋亡能力及藥物敏感性的差異33-38
• 3.5 本章小結(jié)38-39
• 主要結(jié)論與展望39-40
• 主要結(jié)論39
• 展望39-40
• 致謝40-41
• 參考文獻(xiàn)41-48
• 附錄: 作者在攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的論文48

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：561202