發(fā)布時間：2017-07-18 00:31

  本文關(guān)鍵詞：EML4-ALK基因融合位點的結(jié)構(gòu)分析和TNF-α基因-308位點單核苷酸多態(tài)性與肺癌相關(guān)性進(jìn)行研究

  更多相關(guān)文章： 非小細(xì)胞肺癌 EML4-ALK 融合基因 ALU 重復(fù)序列 單核苷酸多態(tài)性腫瘤壞死因子-α基因

【摘要】：研究目的:目前肺癌是人類常見的惡性腫瘤之一,在中國因肺癌死亡人數(shù)已經(jīng)居于癌癥死亡率首位。非小細(xì)胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)約占所有肺癌的80%~85%,其中約25%~30%就診時已是疾病晚期,約40%~50%已有遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移,因而失去最佳手術(shù)切除機會,全身化療及放療是其主要的治療手段。目前,以鉑類為基礎(chǔ)聯(lián)合第三代抗腫瘤藥物(吉西他濱、長春瑞濱、紫杉類藥物等)的化療方案是晚期NSCLC的標(biāo)準(zhǔn)治療方案,但化療有效率也僅為30%~40%,并且很多患者出現(xiàn)嘔吐,脫發(fā)等嚴(yán)重副反應(yīng),難以耐受。近年針對EGFR和K-ras等突變靶點研究一直火熱,并涌現(xiàn)出許多針對EGFR靶點的藥物,療效顯著。2007年日本學(xué)者Soda等首次發(fā)現(xiàn)EML4-ALK(棘皮動物微管相關(guān)蛋白樣4-間變性淋巴瘤激酶)融合基因,研究發(fā)現(xiàn)其與EGFR和K-ras的突變可能存在不共存現(xiàn)象,提示該基因可能是非小細(xì)胞肺癌特異性較高的又一分子靶點。目前針對EML4-ALK基因的融合位點結(jié)構(gòu)研究較少,而其融合機制仍不清楚。本課題的研究目的在于通過對H2228細(xì)胞株中EML4-ALK融合基因的融合位點的結(jié)構(gòu)分析,初步探討EML4-ALK基因的融合方式和可能的融合機制。同時,我們亦通過對正常人群和原發(fā)性肺癌患者人群中腫瘤壞死因子-α(TNF-α)基因-308位點單核苷酸多態(tài)性的檢查,初步對TNF-α基因-308位點單核苷酸的多態(tài)性與原發(fā)性肺癌相關(guān)性進(jìn)行研究。方法:本課題分為兩部分:第一部分采用巢式PCR擴增EML4-ALK融合基因并對擴增產(chǎn)物進(jìn)行測序,然后進(jìn)行序列拼接,進(jìn)一步應(yīng)用NCBI-BIAST(National Center for Biotechnology Information)及CENSOR系統(tǒng)分析該基因融合位點的序列結(jié)構(gòu)和發(fā)生融合的可能機制。第二部分應(yīng)用高通量Taq Man-MGB探針技術(shù)對TNF-α-308G/A位點,即rs1800629位點進(jìn)行基因分型,分析比較447例健康對照者和250例原發(fā)性肺癌患者的基因類型。采用SPSS 18.0軟件對數(shù)據(jù)資料進(jìn)行統(tǒng)計分析。結(jié)果:1.通過對融合基因的分析,發(fā)現(xiàn)在斷裂點附近存在三個Alu重復(fù)序列,并發(fā)現(xiàn)ALK序列斷裂點附近存在MIR序列。斷裂點周圍存在大量正向重復(fù)序列CTGT,及X元件的互補序列CCAGC,這些序列有可能促進(jìn)DNA斷裂和末端接合,并激發(fā)附近ALU序列的重組,并發(fā)現(xiàn)兩個SNP位點。2.分析結(jié)果顯示TNF-α-308位點基因多態(tài)性在病例組和對照組中的分布頻率具有統(tǒng)計學(xué)意義,(P0.05)。其中,A/G基因型在男性、吸煙/非吸煙、小細(xì)胞或非小細(xì)胞肺癌患者中相對于GG型均為危險因素。結(jié)論:1.H2228細(xì)胞系融合基因EML4-ALK融合序列中存在ALU重復(fù)序列及MIR序列和大量熱點序列CTGT和CCAGC,均可能與其融合機制相關(guān),有待進(jìn)一步探討。2.TNF-α-308G/A位點基因多態(tài)性與中國原發(fā)性肺癌發(fā)病易感性顯著相關(guān)。
【關(guān)鍵詞】：非小細(xì)胞肺癌 EML4-ALK 融合基因 ALU 重復(fù)序列 單核苷酸多態(tài)性腫瘤壞死因子-α基因
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R734.2
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-10
• 縮略語/符號說明10-12
• 前言12-19
• 研究現(xiàn)狀、成果12-17
• 研究目的、方法17-19
• 一、EML4-ALK 融合基因融合機制分析19-29
• 1.1 對象和方法19-23
• 1.1.1 細(xì)胞及DNA19
• 1.1.2 主要試劑19
• 1.1.3 主要儀器、設(shè)備19-20
• 1.1.4 實驗方法及流程20-23
• 1.2 結(jié)果23-27
• 1.3 討論27-28
• 1.4 小結(jié)28-29
• 二、TNF-α基因-308位點單核苷酸多態(tài)性與中國原發(fā)性肺癌相關(guān)性研究29-35
• 2.1 材料和方法29-30
• 2.1.1 研究對象29-30
• 2.1.2 研究所需DNA30
• 2.1.3 基因多態(tài)性分析30
• 2.1.4 統(tǒng)計學(xué)方法30
• 2.2 結(jié)果30-33
• 2.2.1TNF-α-308G/A位點各基因型的頻率分布以及與肺癌發(fā)病危險關(guān)系分析30-31
• 2.2.2 TNF-α基因-308G/A位點各基因型不同分層后與肺癌發(fā)病危險關(guān)系分析31-33
• 2.3 討論33-34
• 2.4 小結(jié)34-35
• 結(jié)論35-37
• 1、本課題結(jié)論35
• 2、課題展望35-37
• 參考文獻(xiàn)37-39
• 發(fā)表論文和參加科研情況說明39-40
• 附錄40-44
• 綜述44-51
• 綜述參考文獻(xiàn)50-51
• 致謝51

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本文編號：555307