本文關(guān)鍵詞：胃癌中miR-148a通過DNMT1調(diào)控E-cadherin表達(dá)的研究

  更多相關(guān)文章： 胃癌 DNA甲基化轉(zhuǎn)移酶1 miR-148a E-cadherin

【摘要】：背景:MicroRNAs(miRNAs)是一類高度保守的內(nèi)源性單鏈非編碼小RNA,它們通過與目的基因的3’端非編碼區(qū)域完全或不完全互補(bǔ)結(jié)合,從而調(diào)控目的基因的表達(dá)。目前,許多研究已經(jīng)發(fā)現(xiàn)miRNAs通過影響靶基因的表達(dá)從而進(jìn)一步影響腫瘤的增殖、凋亡、轉(zhuǎn)移和侵襲生物行為,繼而在各種腫瘤的發(fā)生發(fā)展過程中發(fā)揮著重要的作用。一些miRNAs也已經(jīng)被證實(shí)正在胃癌中表達(dá)失調(diào),并且參與胃癌的發(fā)生和發(fā)展。MicroRNA-148a(miR-148a)是其中一個(gè)關(guān)鍵的miRNA,它在胃癌組織中表達(dá)顯著下調(diào),并能抑制胃癌細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲。抑癌基因CDH1編碼的E-鈣黏蛋白(E-cadherin)是一種經(jīng)典的黏附連接蛋白,其表達(dá)缺失能導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移侵襲能力增強(qiáng)。研究已經(jīng)證實(shí)在胃癌中,E-cadherin的表達(dá)顯著下調(diào),且其低表達(dá)與基因啟動子區(qū)的異常超甲基化密切相關(guān)。并且,有研究表明miR-148a能通過調(diào)控E-cadherin的表達(dá)抑制胃癌的轉(zhuǎn)移。然而,miR-148a調(diào)控E-cadherin的具體機(jī)制目前仍不清楚。目的:研究胃癌中miR-148a與E-cadherin的表達(dá)相關(guān)性,并進(jìn)一步探索miR-148a對E-cadherin的內(nèi)在調(diào)控機(jī)制。方法:通過實(shí)時(shí)定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(qRT-PCR)或免疫印跡(Western blot)檢測胃癌組織中E-cadherin及miR-148a的表達(dá),使用Pearson相關(guān)分析檢測E-cadherin與miR-148a表達(dá)的相關(guān)性;通過去甲基化藥物處理,研究啟動子異常甲基化與E-cadherin表達(dá)的關(guān)系;通過轉(zhuǎn)染miR-148a mimics提高miR-148a的表達(dá)水平,轉(zhuǎn)染DNMT1 siRNA干擾DNMT1的表達(dá)水平,進(jìn)一步研究miR-148a對E-cadherin的調(diào)控機(jī)制。結(jié)果:1.qRT-PCR及western blot結(jié)果表明75%(15/20)的胃癌組織中E-cadherin的表達(dá)較正常胃黏膜組織低。另外,miR-148a及E-cadherin mRNA的表達(dá)水平呈顯著的正相關(guān);2.miR-148a mimics轉(zhuǎn)染入胃癌細(xì)胞系后,細(xì)胞系中miR-148a的表達(dá)水平顯著升高,而E-cadherin蛋白的表達(dá)水平顯著升高;3.胃癌細(xì)胞系MGC-803及SGC-7901接受去甲基化藥物5-aza-dC處理后,兩種胃癌細(xì)胞中E-cadherin的mRNA及蛋白表達(dá)水平顯著上升;4.DNMT1 siRNA轉(zhuǎn)染入胃癌細(xì)胞系MGC-803及SGC-7901后,通過qRT-PCR及western blot測定DNMT1及E-cadherin的蛋白水平。結(jié)果顯示轉(zhuǎn)染后DNMT1的表達(dá)顯著降低,而E-cadherin的表達(dá)顯著上調(diào)。結(jié)論:miR-148a通過下調(diào)DNMT1的表達(dá)進(jìn)一步上調(diào)E-cadherin的表達(dá)水平,從而影響胃癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移和侵襲。
【關(guān)鍵詞】：胃癌 DNA甲基化轉(zhuǎn)移酶1 miR-148a E-cadherin
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R735.2
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-10
• 前言10-12
• 材料和方法12-24
• 1、實(shí)驗(yàn)材料12-16
• 1.1 主要實(shí)驗(yàn)儀器和耗材12-13
• 1.2 主要試劑13-14
• 1.3 抗體14
• 1.4 主要試劑配置14-16
• 2、實(shí)驗(yàn)方法16-23
• 2.1 臨床病理標(biāo)本采集及細(xì)胞系來源16
• 2.2 細(xì)胞培養(yǎng)16-18
• 2.3 組織及細(xì)胞總RNA的提取（Trizol法）18
• 2.4 實(shí)時(shí)熒光定量PCR和逆轉(zhuǎn)錄PCR18-22
• 2.5 組織與細(xì)胞系中總蛋白的提取22
• 2.6 蛋白免疫印跡法22-23
• 3、統(tǒng)計(jì)學(xué)分析23-24
• 結(jié)果24-27
• 1、E-CADHERIN在胃癌組織低表達(dá)，，且其表達(dá)與MIR-148A的表達(dá)呈正相關(guān)24
• 2、MIR-148A的過表達(dá)導(dǎo)致E-CADHERIN蛋白的表達(dá)上調(diào)24
• 3、去甲基化藥物導(dǎo)致E-CADHERIN的表達(dá)上調(diào)24
• 4、DNMT1沉默導(dǎo)致E-CADHERIN表達(dá)上調(diào)24-27
• 討論27-29
• 結(jié)論29-30
• 參考文獻(xiàn)30-32
• 綜述32-43
• 1 背景32-33
• 2 DNA甲基化33-34
• 2.1 DNA甲基化和甲基化轉(zhuǎn)移酶33
• 2.2 DNA甲基化與胃癌33-34
• 3.MICRORNA和腫瘤34-35
• 4.胃癌中MIRNAS的表達(dá)失調(diào)35-36
• 5.胃癌MIRNAS的異常甲基化36-37
• miR-124a36
• miR-34b/miR-34c36-37
• miR-148a37
• 6 結(jié)論和展望37-38
• 參考文獻(xiàn)38-43
• 附錄43-44
• 攻讀碩士期間發(fā)表文章情況44-45
• 致謝45-46

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