發(fā)布時間：2017-07-15 16:29

  本文關(guān)鍵詞：Urocortin抑制饑餓誘導(dǎo)的乳腺癌細胞自噬及其機制研究

  更多相關(guān)文章： ucn 饑餓 自噬

【摘要】：促腎上腺皮質(zhì)激素釋放因子(corticotropin-releasing factor, CRF)家族肽包括4個成員,即CRF, Urocortin (Ucn), Urocortin2 (Ucn2)和Urocortin3 (Ucn3)。 CRF家族肽廣泛地分布于中樞神經(jīng)系統(tǒng)和外周系統(tǒng)。CRF家族肽通過CRF1型受體(CRF receptor type 1, CRFR1)和CRF2型受體(CRF receptor type 2, CRFR2)調(diào)節(jié)多種類型細胞的遷移、增殖和凋亡,這兩種亞型受體都屬于G蛋白偶聯(lián)受體。Ucn是一個由40個氨基酸組成的多肽。有研究表明,在缺血再灌注的心肌細胞中,Ucn通過抑制Beclinl的表達從而抑制自噬。然而,Ucn對人乳腺癌細胞自噬的作用及其機制尚無報道。在正常情況下細胞的基礎(chǔ)自噬水平很低,因此本部分使用Earle's平衡鹽緩沖液(Earle's balanced salt solution, EBSS)饑餓誘導(dǎo)細胞發(fā)生自噬。然后,通過透射電子顯微鏡(TEM)觀察自噬體從而檢測細胞的自噬活性。TEM結(jié)果顯示,EBSS饑餓的細胞中形成了雙層膜的自噬性囊泡,表明EBSS能誘導(dǎo)細胞發(fā)生自噬。此外,通過檢測構(gòu)成自噬體的重要成分P62 (P62/sequestosome-1,一種泛素樣結(jié)合蛋白)和微管相關(guān)輕鏈蛋白3 (microtubule-associated protein 1 light chain 3, LC3)的表達水平從而衡量細胞的自噬活性。本實驗的研究對象為人乳腺癌細胞系(MDA-MB-231和MCF-7細胞)。本部分主要研究了Ucn對饑餓誘導(dǎo)的乳腺癌細胞自噬的作用及其相關(guān)機制。蛋白免疫印跡和慢病毒GFP-LC3轉(zhuǎn)染的結(jié)果表明,在饑餓誘導(dǎo)的乳腺癌細胞自噬中,Ucn升高了P62蛋白的水平,然而降低了LC3B-Ⅱ/LC3B-Ⅰ的比值和GFP-LC3斑點的數(shù)量。為了明確Ucn是否通過CRF受體影響自噬,本實驗使用了非選擇性CRF受體阻斷劑Astressin (Ast),結(jié)果發(fā)現(xiàn)Ast阻斷了Ucn對饑餓誘導(dǎo)自噬的作用,這表明Ucn是通過CRF受體發(fā)揮對細胞自噬的抑制作用。接下來,本部分進一步探究Ucn降低LC3B-Ⅱ/LC3B-Ⅰ比值的原因,眾所周知,自噬體的形成和溶酶體的降解都能影響LC3B-Ⅱ水平的變化。因此有必要弄清Ucn降低LC3B-Ⅱ/LC3B-Ⅰ比值是由于Ucn減少了自噬體的形成,還是由于Ucn增加了自噬體的降解。實驗中使用了自噬溶酶體抑制劑巴弗洛霉素A1(BafilomycinA1, BafA1),單獨給予BafAl明顯地增加了GFP-LC3斑點的數(shù)量；與單獨給予BafAl相比,聯(lián)合給予Ucn和BafAl則顯著地減少了GFP-LC3斑點的數(shù)量。這些結(jié)果表明：Ucn是通過減少自噬體的形成從而降低LC3B-Ⅱ /LC3B-Ⅰ的比值。此外,由于哺乳動物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin, mTOR)激酶是自噬過程中的一個重要的調(diào)控因子,因此,本部分進一步研究了Ucn對mTOR磷酸化水平的影響,結(jié)果發(fā)現(xiàn)Ucn幾乎不影響兩種乳腺癌細胞的mTOR磷酸化水平,這表明mTOR通路可能不參與Ucn對饑餓誘導(dǎo)的自噬的作用。綜上所述,Ucn通過與CRF受體結(jié)合從而減少自噬體的形成,最終抑制饑餓誘導(dǎo)的乳腺癌細胞自噬。此外,mTOR通路可能不參與Ucn對饑餓誘導(dǎo)的乳腺癌細胞的自噬作用。
【關(guān)鍵詞】：ucn 饑餓 自噬
【學(xué)位授予單位】：南京醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R737.9
【目錄】：

• 縮寫詞表5-7
• 中文摘要7-9
• ABSTRACT9-11
• 前言11-13
• —、實驗材料13-14
• 二、實驗方法14-24
• 三、實驗結(jié)果24-34
• 四、討論34-37
• 結(jié)論37-38
• 參考文獻38-42
• 綜述42-54
• 參考文獻49-54
• 附錄：CRF受體在血管平滑肌細胞遷移中的作用及其機制研究54-89
• 前言58-59
• 一、實驗材料59-61
• 二、實驗方法61-68
• 三、實驗結(jié)果68-81
• 四、討論81-84
• 結(jié)論84
• 參考文獻84-89
• 攻讀碩士學(xué)位期間獲獎情況89-90
• 攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表論文90-91
• 致謝91

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