發(fā)布時間：2017-07-15 17:23

  本文關(guān)鍵詞：Cereblon在慢性骨髓增殖性腫瘤中表達(dá)的臨床意義

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【摘要】：目的:慢性骨髓增殖性腫瘤(c MPN)是一類造血干細(xì)胞起源的骨髓克隆性疾病,是一種惡性血液系統(tǒng)疾病。2008年,WHO論述的c MPN詳細(xì)列表中包括慢性粒細(xì)胞白血病(CML)、原發(fā)性骨髓纖維化(PMF)、真性紅細(xì)胞增多癥(PV)、原發(fā)性血小板增多癥(ET)、慢性中性粒細(xì)胞白血病(CNL)、慢性嗜酸性粒細(xì)胞白血病/高嗜酸性粒細(xì)胞綜合征(CEL/HES)、肥大細(xì)胞病(MCD)以及未分類型MPN(c MPN-U)。而PV、ET和PMF患者中存在JAK2基因V617F突變,此類疾病主要特點是骨髓一系或多系的髓細(xì)胞過度增殖而導(dǎo)致外周血中粒細(xì)胞、紅細(xì)胞及血小板的增多。共同臨床表現(xiàn)為血栓形成及出血、脾臟腫大、可轉(zhuǎn)化為髓系白血病,PV、ET患者亦有骨髓纖維化的傾向。免疫調(diào)節(jié)藥物(IMi Ds)是多種惡性疾病治療方案的重要組成部分[1],沙利度胺為IMi Ds的代表性藥物,早期研究認(rèn)為其誘導(dǎo)的氧化應(yīng)激及抗血管生成可能是致畸作用的機制[2,3]。近年來一項具有里程碑意義的研究發(fā)現(xiàn)cereblon(CRBN)為沙利度胺致畸作用的重要靶點[4]。E3蛋白酶復(fù)合體由CRBN、DDB1、ROC1、CUL4等構(gòu)成,為一種泛素化連接酶。此復(fù)合物在體內(nèi)能夠調(diào)節(jié)DNA的復(fù)制、修復(fù)和轉(zhuǎn)錄[5、6、7]。CRBN為E3蛋白酶復(fù)合體的相關(guān)因子,其在體內(nèi)外均能發(fā)生泛素化作用[4]。有研究表明,沙利度胺的致畸作用是通過阻斷CRBN的泛素化實現(xiàn)的[8],當(dāng)沙利度胺或者來那度胺發(fā)揮作用時,CRBN就不能形成E3復(fù)合物。沙利度胺及一些類似藥物,如來那度胺和帕米磷酸鹽類藥物被廣泛應(yīng)用于慢性骨髓增殖性腫瘤、多發(fā)性骨髓瘤及骨髓增生異常綜合征等惡性疾病的治療中[9]。有關(guān)于多發(fā)性骨髓瘤(MM)的研究表明CRBN為免疫調(diào)節(jié)藥物治療所必須,CRBN表達(dá)水平低的MM患者原發(fā)抗來那度胺[8、10]。且患者對沙利度胺維持治療的反應(yīng)與CRBN表達(dá)水平呈正相關(guān)性[11、12]。然而目前有關(guān)CRBN的表達(dá)對于免疫調(diào)節(jié)劑治療慢性骨髓增殖性腫瘤的研究尚少。本實驗通過檢測慢性骨髓增殖性腫瘤(PMF、PV、ET)患者骨髓液單個核細(xì)胞(BM-MNCs)中CRBN m RNA表達(dá)水平,及外周血MNCs中CRBN蛋白表達(dá)水平,分析CRBN與慢性骨髓增殖性腫瘤與沙利度胺臨床療效的關(guān)系。方法:本實驗收集了河北醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院首診c MPNs患者的骨髓液24例(其中MF5例、PV7例、ET12例),以及外周血7例(其中MF2例、PV2例、ET3例)設(shè)為初治組。經(jīng)口服沙利度胺50mg/d治療后的c MPNs患者的外周血11例設(shè)為治療組,其中連續(xù)口服6個月以內(nèi)者為3例,6個月至12個月4例,口服時間超過12個月4例,并收集10例血液系統(tǒng)非惡性疾病患者骨髓液及外周血設(shè)為對照組。通過應(yīng)用實時熒光定量PCR及Western Blot的方法,檢測骨髓液單個核細(xì)胞(BM-MNCs)中cereblon m RNA、外周血MNCs中cereblon蛋白的表達(dá)水平。結(jié)果:1 cereblon m RNA的表達(dá)情況RT-PCR結(jié)果顯示:初治組的24例c MPN患者單個核細(xì)胞中CRBN m RNA的相對表達(dá)量為(1.0333±0.2723),其中初治MF、PV、ET患者CRBN m RNA的相對表達(dá)量分別為(1.1814±0.2257)、(0.9943±0.3377)、(0.9943±0.2484),對照組CRBN m RNA的相對表達(dá)量為(0.5699±0.9474)(見Fig.1、Tabel 1)。所有c MPN患者的CRBN m RNA的相對表達(dá)水平均升高,24例患者總表達(dá)量、MF患者表達(dá)量、PV患者表達(dá)量及ET患者表達(dá)量與對照組相比均具有統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.000);初治MF患者與初治PV患者CRBN m RNA的相對表達(dá)量相比無統(tǒng)計學(xué)差異(P=0.183),初治MF患者與初治ET患者CRBN m RNA的相對表達(dá)量相比無統(tǒng)計學(xué)差異(P=0.144),初治PV患者與初治ET患者CRBN m RNA的相對表達(dá)量相比無統(tǒng)計學(xué)差異(P=0.100)(見Tabel 1);初治組24例患者中JAK2V617F突變陽性13例,突變陰性11例,JAK2V617F突變陽性患者的CRBN m RNA相對表達(dá)量為(0.9743±0.2912),陰性為(1.1031±0.2427),兩組相比無統(tǒng)計學(xué)差異(P=0.259),兩組與對照組相比具有統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.000)(見Fig.2、Tabel 2)。2 cereblon蛋白表達(dá)情況Western Blot結(jié)果顯示:初治組7例、治療組11例、對照組10例的cereblon蛋白表達(dá)量分別為(1.550±0.223)pg/ml、(1.028±0.182)pg/ml、(0.911±0.161)pg/ml(見Fig.3、Tabel 3)。其中治療組中口服沙利度胺50mg/d連續(xù)6個月以內(nèi)者、6個月至12個月者,及大于12個月者的CRBN蛋白表達(dá)量分別為(1.181±0.133)pg/ml、(0.996±0.571)pg/ml、(0.945±0.248)pg/ml,隨著持續(xù)口服沙利度胺時間的增長,CRBN蛋白表達(dá)量呈下降趨勢(見Fig.4、Tabel 4)。所有c MPN患者CRBN蛋白的表達(dá)量均升高,初治組與治療組相比差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.000),初治組與對照組相比差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.000),治療組CRBN蛋白的表達(dá)水平較對照組有升高趨勢,但其差異不具有統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.160)(見Tabel 3)。將未服用沙利度胺治療的初治組患者7例設(shè)為1組,持續(xù)口服沙利度胺50mg/d治療6個月以內(nèi)的患者3例設(shè)為2組,持續(xù)治療6-12個月的患者4例設(shè)為3組,持續(xù)治療時間超過12個月的患者4例設(shè)為4組,正常對照組10例設(shè)為5組,則1-5組的cereblon蛋白表達(dá)量分別為(1.550±0.223)pg/ml、(1.181±0.133)pg/ml、(0.996±0.571)pg/ml、(0.945±0.248)pg/ml、(0.911±0.161)pg/ml,各組之間CRBN蛋白的表達(dá)量呈下降趨勢,其中1組與2組相比差異具有統(tǒng)計學(xué)差異(P=0.007);與3、4、5組相比差異亦具有統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.000),2組與3、4組相比差異不具有統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.197、P=0.104),與5組相比差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.034);3組與4、5組相比均不具有統(tǒng)計學(xué)差異(P=0.697、P=0.435);4、5組間相比差異不具有統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.749)(見Tabel 4)。3 cereblon m RNA與cereblon蛋白表達(dá)的相關(guān)性初治組中7例患者的cereblon m RNA的相對表達(dá)量分別為1.0000、1.1617、0.5428、1.1327、1.1759、1.4321、0.8564,cereblon蛋白的表達(dá)水平分別為1.566 pg/ml、1.431 pg/ml、1.164 pg/ml、1.632 pg/ml、1.732 pg/ml、1.849 pg/ml、1.479 pg/ml。Cereblon m RNA表達(dá)與cereblon蛋白表達(dá)呈正相關(guān)性,相關(guān)系數(shù)為0.714,具有統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.024)(見Fig.5)。結(jié)論:1新診斷的慢性骨髓增殖性腫瘤(c MPN)患者的CRBN m RNA及蛋白的表達(dá)水平高于正常人及經(jīng)沙利度胺治療后的c MPN患者。2新診斷的c MPN患者中JAK2V617F突變陽性和陰性患者的CRBN基因表達(dá)情況無統(tǒng)計學(xué)差異,證明兩者之間不具有相關(guān)性。3隨著口服沙利度胺治療時間的延長,CRBN蛋白表達(dá)水平呈逐漸下降趨勢。4 CRBN基因與蛋白的表達(dá)可能具有一定相關(guān)性。
【關(guān)鍵詞】：慢性骨髓增殖性腫瘤 cereblon IMIDs JAK2V617F突變 沙利度胺
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R733.3
【目錄】：

• 中文摘要4-8
• 英文摘要8-13
• 英文縮寫13-14
• 前言14-15
• 材料與方法15-24
• 結(jié)果24-27
• 附圖27-31
• 附表31-33
• 討論33-35
• 結(jié)論35
• 參考文獻(xiàn)35-37
• 綜述 慢性骨髓增殖性腫瘤研究進(jìn)展37-50
• 參考文獻(xiàn)45-50
• 致謝50-51
• 個人簡歷51

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 ;Delayed hepatocarcinogenesis through antiangiogenic intervention in the nuclear factor-kappa B activation pathway in rats[J];Hepatobiliary & Pancreatic Diseases International;2010年02期

2 周瑋;張育;;沙利度胺的作用機制及抗類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎作用研究進(jìn)展[J];醫(yī)藥導(dǎo)報;2007年04期

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本文編號：544942