本文關(guān)鍵詞：CENPF的表達(dá)對(duì)前列腺癌臨床進(jìn)展及預(yù)后的預(yù)測(cè)意義

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【摘要】：研究背景和目的：作為男性群體中最常見的腫瘤之一,前列腺癌是西方國(guó)家中死亡率第二高的腫瘤。在世界范圍內(nèi),每年有超過(guò)90萬(wàn)人被診斷為新發(fā)的前列腺癌。2014年美國(guó)男性新發(fā)的腫瘤中有大約有24%的患者被確診為前列腺癌患者。目前中國(guó)人群中前列腺癌的發(fā)生率及死亡率也在逐步上升。前列腺癌作為一種多因素、多病灶的臨床疾病,其自然病程變化較大且難以預(yù)測(cè)。影響前列腺的進(jìn)展和預(yù)后的機(jī)制是一個(gè)多步驟的復(fù)雜過(guò)程,既包括上皮細(xì)胞的基因受損因素,也包括上皮細(xì)胞與間質(zhì)的相互作用的改變。由于外科技術(shù)的發(fā)展創(chuàng)新及手術(shù)后并發(fā)癥的發(fā)生率的減少,許多原位前列腺癌患者在接受前列腺癌根治術(shù)后仍有較長(zhǎng)期的生存率。然而,在接受前列腺癌根治術(shù)的患者中,大約有20%的患者在術(shù)后會(huì)出現(xiàn)生化復(fù)發(fā)且需要更進(jìn)一步的治療,并且目前對(duì)于手術(shù)治療、放射治療、化療和激素治療后發(fā)生生化復(fù)發(fā)及轉(zhuǎn)移的前列腺癌,仍缺乏有效的治療方法。臨床上包括PSA水平、Gleason評(píng)分、腫瘤邊緣惡性程度及對(duì)初始治療的反應(yīng)性等多個(gè)臨床指標(biāo)通過(guò)不同的組合形成不同的參數(shù),都已經(jīng)被用于預(yù)測(cè)前列腺癌的發(fā)展和預(yù)后,但仍然沒有一種公認(rèn)臨床方法能準(zhǔn)確地診斷腫瘤及預(yù)測(cè)患者術(shù)后復(fù)發(fā)、預(yù)后。因此,在腫瘤的生物基礎(chǔ)層面上找尋新穎、有效的生物學(xué)標(biāo)記為前列腺癌的進(jìn)展預(yù)測(cè)提供有價(jià)值的信息就顯得尤為重要了。盡管在探索前列腺癌高危因素及易感基因(就像BRC1/BRC2是乳腺癌及卵巢癌的易感基因)領(lǐng)域取得的成果有限,目前的研究還是找到了一批與前列腺癌發(fā)生、發(fā)展相關(guān)的基因并對(duì)之進(jìn)行了相應(yīng)的闡述,例如1號(hào)染色體及X染色體上基因的擴(kuò)增就曾被報(bào)道與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展相關(guān)。細(xì)胞周期進(jìn)展(Cell cycle progression,CCP)評(píng)分是挑選出來(lái)的31個(gè)CCP基因在臨床樣本中RNA表達(dá)水平整合而成的腫瘤預(yù)后評(píng)分,該評(píng)分已經(jīng)被證實(shí)可以有效地預(yù)測(cè)前列腺癌患者的臨床預(yù)后。而CENPF正是定位于1號(hào)染色體長(zhǎng)臂4區(qū)1帶、屬于31個(gè)CCP之一的基因,它編碼的蛋白參與構(gòu)成著絲粒并且在分裂間期的G2期中構(gòu)成核基質(zhì)的一部分,它的表達(dá)隨著細(xì)胞周期改變并且影響到染色體的分離,其表達(dá)量在細(xì)胞周期開始時(shí)逐漸增加,到G2/M期達(dá)到峰值,當(dāng)有絲分裂完成時(shí)則迅速下降。由于CENPF的功能與在細(xì)胞中的定位與細(xì)胞周期密切相關(guān),所以既往的研究都認(rèn)為該基因也許可以作為細(xì)胞分裂和惡性細(xì)胞增值、分化的指標(biāo)。越來(lái)越多的研究證實(shí)CENPF基因參與到人類癌癥的發(fā)生發(fā)展當(dāng)中,例如乳腺癌、肝細(xì)胞癌、結(jié)直腸、胃腸道間質(zhì)瘤、鼻咽癌、非霍奇金淋巴瘤、腮腺癌等等。且肝癌、乳腺癌、胃腸道間質(zhì)腫瘤、鼻咽癌等腫瘤的不良臨床預(yù)后與CENPF的過(guò)表達(dá)密切相關(guān)。然而,CENPF在前列腺癌中臨床意義還沒有無(wú)詳細(xì)報(bào)道。本研究通過(guò)應(yīng)用免疫組織化學(xué)分析前列腺癌組織及非癌組織中CENPF蛋白水平,并在基因芯片數(shù)據(jù)庫(kù)——Taylor數(shù)據(jù)庫(kù)(NCBI GEO accession:GSE21032)中對(duì)CENPF基因的RNA水平進(jìn)行進(jìn)一步分析和驗(yàn)證,進(jìn)而對(duì)CENPF表達(dá)水平與前列腺癌患者的臨床病理特征之間的關(guān)聯(lián)進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析,最終探索CENPF與前列腺癌患者腫瘤進(jìn)展、預(yù)后之間的聯(lián)系。實(shí)驗(yàn)材料：為了在前列腺癌患者中找到確定與腫瘤進(jìn)展及診斷有關(guān)的候選基因,我們?cè)诎琺icroRNA和蛋白編碼基因mRNAs的基因表達(dá)數(shù)據(jù)庫(kù)(NCBI GEO accession no:GSE21032;該數(shù)據(jù)庫(kù)包括185例臨床樣本和細(xì)胞株相應(yīng)的microRNA及mRNA的表達(dá)譜芯片數(shù)據(jù))中利用統(tǒng)計(jì)學(xué)方法分析、評(píng)估生化復(fù)發(fā)密切相關(guān)的31個(gè)CCP基因?qū)η傲邢侔┥瘡?fù)發(fā)的診斷價(jià)值,從統(tǒng)計(jì)結(jié)果中挑選研究的目標(biāo)基因。同時(shí)收集數(shù)據(jù)庫(kù)中150名前列腺原位癌和29名前列腺癌旁組織的臨床相關(guān)信息,用于后續(xù)的統(tǒng)計(jì)分析。免疫組化分析使用組織芯片購(gòu)自上海(Shanghai Outdo Biotech Co, LTD (Cat No:HPro-Ade180PG-01),該芯片包含99例前列腺原位癌組織及81例前列腺癌旁組織,附帶患者相應(yīng)的臨床信息,且所有患者術(shù)前均沒有接受過(guò)化療及放療。實(shí)驗(yàn)方法：免疫組化分析：臨床標(biāo)本保存在在10%中性福爾馬林中,隨即石蠟塊包埋,然后組織被切成厚度為4um的切片,二甲苯脫蠟后水化使之能夠進(jìn)行免疫組化DAB染色(染色使用DAKO EnVision System (Dako Diagnostics, Switzerland).簡(jiǎn)短地進(jìn)行蛋白酶消化和過(guò)氧化物酶阻斷后,按1：200的比例稀釋一抗(rabbit polyclonal antibody, bs-7839R, BEIJING BIOSYNTHESIS BIOTECHNOLOGY Co. Ltd., China),將稀釋后的一抗孵育切片,4℃C過(guò)夜。次日,洗凈切片,用過(guò)氧化物標(biāo)記的多聚物及色原體基質(zhì)處理以發(fā)現(xiàn)目標(biāo)蛋白的染色情況,在整個(gè)免疫組化實(shí)驗(yàn)中,空白對(duì)照不加一抗處理。在蘇木素復(fù)染后,兩位有經(jīng)驗(yàn)的病理實(shí)驗(yàn)工作者各自獨(dú)立對(duì)組織的免疫染色進(jìn)行評(píng)分,且這兩位工作者對(duì)患者的臨床病理報(bào)告及預(yù)后完全不知情。隨后對(duì)兩組評(píng)分?jǐn)?shù)據(jù)進(jìn)行比較,任何有差異評(píng)分的切片都要進(jìn)行重新評(píng)估,當(dāng)兩位工作人員的評(píng)分一致時(shí),癌細(xì)胞的免疫標(biāo)記評(píng)估才完成。具體評(píng)分方法如下：(取十個(gè)典型的顯微鏡下視野并數(shù)出陽(yáng)性染色細(xì)胞數(shù),計(jì)算出陽(yáng)性細(xì)胞比例,根據(jù)抗體說(shuō)明書,細(xì)胞質(zhì)染色即為陽(yáng)性(由于目標(biāo)蛋白染色的異質(zhì)性,對(duì)腫瘤切片評(píng)分采取半定量的方式。根據(jù)染色細(xì)胞的比例(0-100%)及染色的深度(0-陰性、1-弱陽(yáng)性、2-中等陽(yáng)性、3-強(qiáng)陽(yáng)性)來(lái)評(píng)定每一個(gè)腫瘤組織切片目的蛋白表達(dá)水平。染色細(xì)胞比例評(píng)分及染色深度評(píng)分相乘構(gòu)成了最終的免疫組化評(píng)分(immunoreactivity score, IRS).統(tǒng)計(jì)學(xué)處理：所有實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)均用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示,數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)軟件包(SPSS Inc, IL, USA)處理。獨(dú)立樣本T檢驗(yàn)結(jié)果用X±s表示,所有2×2表格進(jìn)行Fisher精確檢驗(yàn),對(duì)非2×2進(jìn)行Pearson卡方檢驗(yàn),使用Kaplan-Meier方法和Log-rank檢驗(yàn)進(jìn)行生存分析,Cox危險(xiǎn)因素回歸模型用于分析單因素和多因素的生存分析,當(dāng)P值小于0.05時(shí)認(rèn)為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果：1.從CCP基因群中挑選出CENPF由于31個(gè)CCP基因的表達(dá)量是基于RNA水平,因此這一批基因可能代表著前列腺癌基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)方面,也能夠?yàn)榕R床預(yù)后提供有價(jià)值的信息。我們?cè)赥aylor數(shù)據(jù)庫(kù)中用Kaplan-Meier plots分析了這31個(gè)CCP基因,結(jié)果顯示其中10個(gè)表達(dá)上調(diào)的基因和生化復(fù)發(fā)相關(guān)。在這10個(gè)基因中,CENPF可能可以作為惡性腫瘤細(xì)胞分化的指標(biāo),而與此同時(shí),既往研究也報(bào)道了該基因也與人類多種癌癥的不良預(yù)后密切相關(guān)。2. CENPF蛋白在前列腺癌臨床標(biāo)本中表達(dá)上調(diào)我們首先分析了實(shí)驗(yàn)所用的組織芯片(TMA)數(shù)據(jù)來(lái)明確CENPF是否與臨床切片有關(guān)聯(lián),我們用免疫組化分析了CENPF蛋白在TMA中的表達(dá)量及其在99例前列腺癌和癌旁組織中的定位。結(jié)果顯示CENPF蛋白主要表達(dá)在癌組織的胞質(zhì),而在癌旁組織不表達(dá)或只是中等表達(dá),并且CENPF蛋白在前列腺癌組織中的表達(dá)量明顯高于非癌組織(免疫組化評(píng)分(IRS):PCa=177.98±94.096,Benign=121.30±89.596,P0.001),值得一提的是,在進(jìn)行免疫組化評(píng)分時(shí),我們發(fā)現(xiàn)CENPF蛋白也在癌細(xì)胞間質(zhì)中強(qiáng)表達(dá),而在良性前列腺組織的間質(zhì)中則為中等表達(dá),對(duì)組織芯片中的間質(zhì)中的CENPF的免疫染色也進(jìn)行分析發(fā)現(xiàn)間質(zhì)中的CENPF表達(dá)量與臨床信息沒有相關(guān)性。3. CENPF的mRNA表達(dá)量與前列腺癌臨床病理特征之間的聯(lián)系在我們的組織芯片中,盡管在蛋白水平CENPF的表達(dá)增加與臨床臨床病理特征無(wú)明顯相關(guān)性,我們想進(jìn)一步探索CENPF在mRNA水平的表達(dá)。與蛋白水平相似,CENPF在前列腺癌組織中的mRNA表達(dá)量也明顯高于非癌組織(PCa=5.67 ±0.47 vs. Benign=5.40±0.11, P0.001。更重要的是,Taylor數(shù)據(jù)庫(kù)表明CENPF的表達(dá)量增加與高Gleason評(píng)分(P=0.005),高病理等級(jí)(P=0.008),腫瘤轉(zhuǎn)移的出現(xiàn)(P0.001),更短的生存時(shí)間(P=0.003),生化復(fù)發(fā)(P0.001)都密切相關(guān),這些基本信息都指向CENPF和前列腺癌的臨床預(yù)后存在緊密的聯(lián)系。且與中等Gleason評(píng)分(GS=7)及低Gleason評(píng)分(GS=6)的組織相較,Gleason評(píng)分≥8分的組織中CENPF的表達(dá)量明顯增高(P值分別為0.02、0.013),但是中等Gleason評(píng)分組與低Gleason評(píng)分組中的CENPF表達(dá)無(wú)明顯差異。4. CENPF表達(dá)量對(duì)于前列腺診斷價(jià)值的描述在Taylor數(shù)據(jù)庫(kù)中我們使用Kaplan-Meier圖表分析前列腺癌患者總體生存率及生化復(fù)發(fā)時(shí)間與CENPF表達(dá)量之間的聯(lián)系。以CENPF表達(dá)量的中位數(shù)為分割點(diǎn)將前列腺癌組織分為高表達(dá)組(65例)和低表達(dá)組(75例),CENPF高表達(dá)組和低表達(dá)組在前列腺癌總體生存率上沒有明顯區(qū)別,但在生化復(fù)發(fā)時(shí)間上,高表達(dá)組明顯比低表達(dá)組更早地出現(xiàn)了生化復(fù)發(fā)。在單因素分析中高表達(dá)組與低表達(dá)組在生化復(fù)發(fā)時(shí)間上也表現(xiàn)出明顯差異(HR 3.384,95% CI 2.066-5.541; P0.001)。此外,在多因素分析結(jié)果中,表達(dá)上調(diào)的CENPF (HR 4.251,95% CI 1.372-13.167; P=0.012)、高Gleason評(píng)分(HR 2.624,95% CI1.671-4.119：P0.001)、術(shù)前高PSA水平(HR 1.005,95% CI 1.001-1.01; P=0.02)都是生化復(fù)發(fā)獨(dú)立的預(yù)測(cè)因子。結(jié)論：1. CENPF可能起著促癌的作用,根據(jù)其mRNA和蛋白表達(dá)的差異,可鑒別前列腺癌及前列腺良性組織。2. CENPF的表達(dá)上調(diào)與前列腺癌的疾病進(jìn)展密切相關(guān),可以通過(guò)檢測(cè)它在前列腺組織的水平高低,初步預(yù)測(cè)前列腺癌的惡性程度及判斷前列腺癌的術(shù)后預(yù)后。3.前列腺組織間質(zhì)中CENPF表達(dá)上調(diào)越明顯,則前列腺癌患者臨床預(yù)后越差。CENPF在前列腺癌組織中的上調(diào)表達(dá)可作為預(yù)測(cè)人類前列腺癌患者的不良臨床預(yù)后的指標(biāo)提供了證據(jù)。4. CENPF可能通過(guò)調(diào)節(jié)腫瘤細(xì)胞的染色體分裂穩(wěn)定性及細(xì)胞周期蛋白等而影響前列腺癌的發(fā)展及預(yù)后。5.通過(guò)分析前列腺癌患者CENPF的表達(dá)情況,可預(yù)測(cè)早期生化復(fù)發(fā)的概率,為臨床醫(yī)生提供有效信息,幫助制定個(gè)性化的治療方案
【關(guān)鍵詞】：前列腺癌 centromere protein F 臨床病理特征 生化復(fù)發(fā) 預(yù)后
【學(xué)位授予單位】：南方醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R737.25
【目錄】：

• 摘要3-9
• ABSTRACT9-18
• 第1章 前言18-44
• 1.1 前列腺癌的流行病學(xué)概述18-20
• 1.2 前列腺癌的發(fā)病機(jī)理20-23
• 1.2.1 腫瘤的分子生物學(xué)基礎(chǔ)及其特征20-21
• 1.2.2 前列腺癌發(fā)生、發(fā)展的分子機(jī)制21-23
• 1.3 前列腺癌的臨床診療進(jìn)展23-32
• 1.3.1 前列腺癌的臨床診斷23-26
• 1.3.2 前列腺癌的臨床分期26-28
• 1.3.3 前列腺癌的臨床治療進(jìn)展28-30
• 1.3.4 前列腺癌術(shù)后的生化復(fù)發(fā)30-32
• 1.4 細(xì)胞周期進(jìn)展(Cell cycle progression,CCP)基因研究進(jìn)展32-39
• 1.4.1 CCP的發(fā)現(xiàn)32-33
• 1.4.2 CCP與人類腫瘤的關(guān)系33-34
• 1.4.3 CCP在前列腺癌中的研究34-39
• 1.5 CCP中著絲粒蛋白(centromere protein F,CENPF)的研究39-43
• 1.5.1 CENPF的發(fā)現(xiàn)39-41
• 1.5.2 CENPF與人類腫瘤的研究進(jìn)展41-43
• 1.6 本研究擬解決的問題43-44
• 第2章 實(shí)驗(yàn)材料與方法44-50
• 2.1 實(shí)驗(yàn)材料44-46
• 2.1.1 免疫組化組織標(biāo)本收集44
• 2.1.2 統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)庫(kù)組織標(biāo)本收集44-45
• 2.1.3 臨床病例納入標(biāo)準(zhǔn)、排除標(biāo)準(zhǔn)45
• 2.1.4 臨床樣本病理資料及隨訪45-46
• 2.1.5 實(shí)驗(yàn)主要試劑46
• 2.1.6 實(shí)驗(yàn)主要儀器46
• 2.2 實(shí)驗(yàn)方法46-48
• 2.3 前列腺癌基因芯片數(shù)據(jù)庫(kù)(Taylor數(shù)據(jù)庫(kù))48-49
• 2.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理49-50
• 第3章 結(jié)果50-55
• 3.1 從CCP基因群中挑選出CENPF50
• 3.2 CENPF蛋白在前列腺癌臨床標(biāo)本中表達(dá)上調(diào)50-52
• 3.3 CENPF的mRNA表達(dá)量與前列腺癌臨床病理特征之間的聯(lián)系52-53
• 3.4 CENPF表達(dá)量對(duì)于前列腺癌預(yù)后診斷價(jià)值53-55
• 第4章 討論55-60
• 4.1 CENPF在前列腺癌診療中的臨床意義55-56
• 4.2 CENPF在腫瘤及前列腺癌中的異常表達(dá)56-57
• 4.3 CENPF對(duì)前列腺癌腫瘤的潛在調(diào)節(jié)作用57-60
• 第5章 結(jié)論60-61
• 本研究的不足之處61-62
• 參考文獻(xiàn)62-70
• 縮略詞表70-72
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表的論文72-73
• 致謝73-74

【共引文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 王永潮;彭安;梁，

本文編號(hào)：537627