本文關(guān)鍵詞：YAP1和β-catenin在人大腸癌組織中的表達(dá)及siRNA沉默YAP1基因?qū)Υ竽c癌RKO細(xì)胞系生物學(xué)特性的影響

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【摘要】：目的：(1)檢測YES相關(guān)蛋白1(YAP1)、β-鏈接素(β-catenin)在人大腸癌(CRC)組織中的表達(dá)及其與臨床病理因素間的關(guān)系。(2)觀察siRNA干擾YAP1基因?qū)Υ竽c癌細(xì)胞系RKO生物學(xué)特性的影響。方法：(1)應(yīng)用免疫組織化學(xué)Envision二步法檢測99例人大腸癌組織及30例正常腸黏膜組織中YAP1和β-catenin的表達(dá)狀況,分析其與大腸癌臨床病理參數(shù)之間的關(guān)系及它們之間的相互關(guān)系。(2)以脂質(zhì)體lip-2000為載體,用針對YAP1特異靶點(diǎn)的siRNA轉(zhuǎn)染RKO人大腸癌細(xì)胞系后,應(yīng)用RT-PCR檢測YAP1mRNA表達(dá)變化,Western Blot檢測YAP1蛋白表達(dá)變化,CCK8實(shí)驗(yàn)檢測對細(xì)胞增殖的影響,流式細(xì)胞技術(shù)檢測細(xì)胞凋亡情況。結(jié)果：(1)YAP1蛋白在大腸癌組織中的陽性表達(dá)率為56.57%(56/99),顯著高于大腸正常黏膜組織16.67%(5/30)(p0.01)；β-catenin蛋白在大腸癌組織中的異位(細(xì)胞質(zhì)/核)表達(dá)率為51.52%(51/99),明顯高于大腸正常黏膜組織0%(0/30)(p0.01)。(2)YAP1蛋白的表達(dá)水平與患者性別,年齡,淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移,浸潤深度,腫瘤的分化程度及臨床Duke's分期均無關(guān)；β-catenin蛋白的細(xì)胞核表達(dá)水平與大腸癌的浸潤深度及分化程度相關(guān)(p0.05),與其它臨床病理因素?zé)o關(guān)(p0.05)；β-catenin蛋白的細(xì)胞質(zhì)表達(dá)水平與大腸癌的分化程度相關(guān)(p0.05),與其它臨床病理因素?zé)o關(guān)(p0.05); β-catenin蛋白的細(xì)胞膜表達(dá)水平與臨床病理因素均無關(guān)(p0.05)。(3)β-catenin蛋白細(xì)胞質(zhì)、細(xì)胞核的表達(dá)與YAP1細(xì)胞核、細(xì)胞質(zhì)/核的表達(dá)呈正相關(guān)(p0.05)；β-catenin蛋白細(xì)胞核表達(dá)與YAP1細(xì)胞質(zhì)的表達(dá)呈正相關(guān)(p0.05)。(4)YAP 1-siRNA轉(zhuǎn)染RKO細(xì)胞后,RT-PCR結(jié)果顯示轉(zhuǎn)染組條帶亮度明顯低于陰性對照組,轉(zhuǎn)染組RKO細(xì)胞中YAP1 mRNA的表達(dá)量受到明顯抑制。Western Blot結(jié)果顯示轉(zhuǎn)染組條帶亮度明顯低于陰性對照組,YAP1轉(zhuǎn)染組中YAP1蛋白表達(dá)量較陰性對照組明顯下降。(5)CCK8實(shí)驗(yàn)結(jié)果：與陰性對照組相比,YAP1-siRNA組細(xì)胞的生長出現(xiàn)明顯抑制(p0.05)。(6)流式細(xì)胞技術(shù)檢測結(jié)果：與陰性對照組相比,YAP1-siRNA組的凋亡率顯著增高,兩者比較差異有顯著性(p0.05)。結(jié)論：YAP1和β-catenin在大腸癌的發(fā)生發(fā)展中均具有重要作用。同時(shí)兩者具有協(xié)同作用,提示聯(lián)合檢測較單一檢測更有意義。siRNA干擾YAP1基因能有效抑制人大腸癌細(xì)胞系YAP1 mRNA及蛋白表達(dá),細(xì)胞增殖能力減弱,并促進(jìn)細(xì)胞凋亡。提示以YAP1基因?yàn)榘悬c(diǎn),利用siRNA技術(shù)進(jìn)行基因治療有可能成為一種新的治療手段。
【關(guān)鍵詞】：大腸癌 YAP1 β-catenin 免疫組織化學(xué) 逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng) siRNA
【學(xué)位授予單位】：安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R735.34
【目錄】：

• 英文縮略詞表5-7
• 中文摘要7-9
• Abstract9-11
• 1 前言11-13
• 2 材料與方法13-26
• 3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果26-34
• 4 討論34-39
• 5 結(jié)論39-40
• 參考文獻(xiàn)40-46
• 附錄46-47
• 致謝47-48
• 綜述48-58
• 參考文獻(xiàn)54-58

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本文編號：537509