本文關(guān)鍵詞：外源性PDCD4轉(zhuǎn)染食管癌Eca109細(xì)胞系對(duì)其生長(zhǎng)和凋亡的影響

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【摘要】：目的將外源性PDCD4導(dǎo)入食管癌Eca109細(xì)胞系,通過(guò)與空載體轉(zhuǎn)染細(xì)胞及未轉(zhuǎn)染細(xì)胞作對(duì)照,研究PDCD4對(duì)食管癌細(xì)胞的形態(tài)、生長(zhǎng)增殖以及凋亡的影響,為實(shí)驗(yàn)研究及臨床基因治療提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。方法1.用空載體或PDCD4重組表達(dá)載體轉(zhuǎn)染食管癌Eca109細(xì)胞系,并用熒光定量PCR和Western blot方法檢測(cè)轉(zhuǎn)染后PDCD4在食管癌細(xì)胞系中的表達(dá)。2.通過(guò)顯微鏡觀察PDCD4轉(zhuǎn)染前后食管癌Eca109細(xì)胞系的生長(zhǎng)分化及形態(tài)學(xué)變化。3.轉(zhuǎn)染48小時(shí)后,通過(guò)顯微鏡對(duì)三組食管癌Eca109細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)對(duì)照,分析PDCD4轉(zhuǎn)染對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)增殖的影響。4.通過(guò)流式細(xì)胞術(shù)分析比較三組食管癌Eca109細(xì)胞的凋亡情況。結(jié)果1. PDCD4基因成功轉(zhuǎn)染食管癌Eca109細(xì)胞并穩(wěn)定表達(dá)。熒光顯微鏡下,轉(zhuǎn)染PDCD4重組表達(dá)載體組及轉(zhuǎn)染空載體組的食管癌Eca109細(xì)胞可看到綠色熒光,而未轉(zhuǎn)染組的食管癌Eca109細(xì)胞無(wú)熒光。通過(guò)熒光定量PCR及Western blot方法檢測(cè)到PDCD4mRNA及PDCD4蛋白在轉(zhuǎn)染PDCD4重組表達(dá)載體的細(xì)胞中高表達(dá),說(shuō)明PDCD4基因成功轉(zhuǎn)染食管癌Eca109細(xì)胞并穩(wěn)定表達(dá)。2. PDCD4能夠使食管癌Eca109細(xì)胞形態(tài)發(fā)生改變。未轉(zhuǎn)染組及轉(zhuǎn)染空載體組的食管癌Eca109細(xì)胞生長(zhǎng)均良好,形態(tài)均正常,而轉(zhuǎn)染PDCD4重組表達(dá)載體組的食管癌Eca109細(xì)胞,數(shù)量和形態(tài)均發(fā)生明顯的變化,細(xì)胞變圓,萎縮,甚至有部分細(xì)胞已經(jīng)死亡脫落。3. PDCD4的表達(dá)對(duì)食管癌Eca109細(xì)胞的生長(zhǎng)及細(xì)胞數(shù)目有明顯的影響。PDCD4表達(dá)載體轉(zhuǎn)染的Eca109細(xì)胞計(jì)數(shù)為(5.02±0.29)×105,明顯少于未轉(zhuǎn)染組Eca109細(xì)胞計(jì)數(shù)(7.67±0.44)×105,差異有顯著性(P0.05)；明顯少于轉(zhuǎn)染空載體組細(xì)胞計(jì)數(shù)(6.81±0.33)×105,差異有顯著性(P0.05)。而未轉(zhuǎn)染組細(xì)胞計(jì)數(shù)與空載體轉(zhuǎn)染組細(xì)胞計(jì)數(shù)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。4. PDCD4的表達(dá)可以促進(jìn)食管癌Eca1 09細(xì)胞的凋亡。轉(zhuǎn)染PDCD4重組表達(dá)載體組的Eca109細(xì)胞凋亡率(38.07-%-1.08%)明顯高于未轉(zhuǎn)染組Eca109細(xì)胞的凋亡率(19.57%±2.6%),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)；另外,轉(zhuǎn)染PDCD4重組表達(dá)載體組的Eca109細(xì)胞凋亡率明顯高于轉(zhuǎn)染空載體組的Eca109細(xì)胞凋亡率(26.9%±0.61%),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論1. PDCD4在食管癌Eca109細(xì)胞中成功轉(zhuǎn)染并穩(wěn)定表達(dá)。2. PDCD4轉(zhuǎn)染食管癌Eca109細(xì)胞并穩(wěn)定表達(dá)后,細(xì)胞的生長(zhǎng)和增殖受到抑制,表明PDCD4可以抑制食管癌Eca109細(xì)胞的生長(zhǎng)。3. PDCD4在食管癌Eca109細(xì)胞穩(wěn)定表達(dá)后可以促進(jìn)細(xì)胞的凋亡,表明促進(jìn)細(xì)胞凋亡可能為PDCD4的一個(gè)抑癌機(jī)制。
【關(guān)鍵詞】：PDCD4 食管癌 PCR Western blot
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R735.1
【目錄】：

• 中文摘要8-10
• ABSTRACT10-12
• 符號(hào)說(shuō)明12-13
• 第一章 前言13-15
• 1 研究背景13-14
• 2 研究目的和意義14-15
• 第二章 文獻(xiàn)綜述15-23
• 1 食管癌15-19
• 1.1 食管癌一般情況概述15
• 1.2 食管癌發(fā)病的主要危險(xiǎn)因素15-17
• 1.3 食管癌的治療概述17-19
• 2 程序性細(xì)胞死亡因子419-23
• 2.1 PDCD4的發(fā)現(xiàn)19-20
• 2.2 PDCD4在腫瘤中的表達(dá)和調(diào)節(jié)機(jī)制20-21
• 2.3 PDCD4的抑癌作用21-23
• 第三章 實(shí)驗(yàn)材料與方法23-36
• 1 細(xì)胞23
• 2 實(shí)驗(yàn)試劑及儀器23-25
• 2.1 轉(zhuǎn)染及培養(yǎng)細(xì)胞所用的主要實(shí)驗(yàn)試劑23
• 2.2 蛋白提取及Western blot所用試劑23-24
• 2.3 PCR實(shí)驗(yàn)試劑24
• 2.4 流式細(xì)胞術(shù)實(shí)驗(yàn)試劑24
• 2.5 實(shí)驗(yàn)儀器24-25
• 3 實(shí)驗(yàn)步驟25-36
• 3.1 細(xì)胞處理25-26
• 3.2 脂質(zhì)體介導(dǎo)PDCD4真核表達(dá)載體轉(zhuǎn)染26-27
• 3.3 Western blot實(shí)驗(yàn)方法27-31
• 3.4 PCR試驗(yàn)方法31-34
• 3.5 流式細(xì)胞術(shù)實(shí)驗(yàn)方法34-35
• 3.6 統(tǒng)計(jì)方法35-36
• 第四章 結(jié)果36-39
• 1 外源性PDCD4基因在食管癌Eca109細(xì)胞的表達(dá)36-37
• 1.1 外源性PDCD4蛋白在細(xì)胞系內(nèi)的表達(dá)36-37
• 1.2 外源性PDCD4mRNA在細(xì)胞系內(nèi)的表達(dá)37
• 2 PDCD4表達(dá)對(duì)食管癌細(xì)胞形態(tài)產(chǎn)生的影響37-38
• 3 PDCD4表達(dá)對(duì)食管癌細(xì)胞生長(zhǎng)產(chǎn)生的影響38
• 4 PDCD4表達(dá)對(duì)食管癌Eca109細(xì)胞凋亡產(chǎn)生的影響38-39
• 第五章 討論39-42
• 第六章 結(jié)論42-44
• 1 小結(jié)42
• 2 創(chuàng)新性和不足之處42
• 3 研究感悟42-44
• 參考文獻(xiàn)44-50
• 致謝50-51
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表的論文目錄51-52
• 學(xué)位論文評(píng)閱及答辯情況表52

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