本文關(guān)鍵詞：外源性PDCD4轉(zhuǎn)染食管癌Eca109細胞系對其生長和凋亡的影響

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【摘要】：目的將外源性PDCD4導(dǎo)入食管癌Eca109細胞系,通過與空載體轉(zhuǎn)染細胞及未轉(zhuǎn)染細胞作對照,研究PDCD4對食管癌細胞的形態(tài)、生長增殖以及凋亡的影響,為實驗研究及臨床基因治療提供實驗依據(jù)。方法1.用空載體或PDCD4重組表達載體轉(zhuǎn)染食管癌Eca109細胞系,并用熒光定量PCR和Western blot方法檢測轉(zhuǎn)染后PDCD4在食管癌細胞系中的表達。2.通過顯微鏡觀察PDCD4轉(zhuǎn)染前后食管癌Eca109細胞系的生長分化及形態(tài)學(xué)變化。3.轉(zhuǎn)染48小時后,通過顯微鏡對三組食管癌Eca109細胞進行計數(shù)對照,分析PDCD4轉(zhuǎn)染對細胞生長增殖的影響。4.通過流式細胞術(shù)分析比較三組食管癌Eca109細胞的凋亡情況。結(jié)果1. PDCD4基因成功轉(zhuǎn)染食管癌Eca109細胞并穩(wěn)定表達。熒光顯微鏡下,轉(zhuǎn)染PDCD4重組表達載體組及轉(zhuǎn)染空載體組的食管癌Eca109細胞可看到綠色熒光,而未轉(zhuǎn)染組的食管癌Eca109細胞無熒光。通過熒光定量PCR及Western blot方法檢測到PDCD4mRNA及PDCD4蛋白在轉(zhuǎn)染PDCD4重組表達載體的細胞中高表達,說明PDCD4基因成功轉(zhuǎn)染食管癌Eca109細胞并穩(wěn)定表達。2. PDCD4能夠使食管癌Eca109細胞形態(tài)發(fā)生改變。未轉(zhuǎn)染組及轉(zhuǎn)染空載體組的食管癌Eca109細胞生長均良好,形態(tài)均正常,而轉(zhuǎn)染PDCD4重組表達載體組的食管癌Eca109細胞,數(shù)量和形態(tài)均發(fā)生明顯的變化,細胞變圓,萎縮,甚至有部分細胞已經(jīng)死亡脫落。3. PDCD4的表達對食管癌Eca109細胞的生長及細胞數(shù)目有明顯的影響。PDCD4表達載體轉(zhuǎn)染的Eca109細胞計數(shù)為(5.02±0.29)×105,明顯少于未轉(zhuǎn)染組Eca109細胞計數(shù)(7.67±0.44)×105,差異有顯著性(P0.05)；明顯少于轉(zhuǎn)染空載體組細胞計數(shù)(6.81±0.33)×105,差異有顯著性(P0.05)。而未轉(zhuǎn)染組細胞計數(shù)與空載體轉(zhuǎn)染組細胞計數(shù)差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。4. PDCD4的表達可以促進食管癌Eca1 09細胞的凋亡。轉(zhuǎn)染PDCD4重組表達載體組的Eca109細胞凋亡率(38.07-%-1.08%)明顯高于未轉(zhuǎn)染組Eca109細胞的凋亡率(19.57%±2.6%),差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)；另外,轉(zhuǎn)染PDCD4重組表達載體組的Eca109細胞凋亡率明顯高于轉(zhuǎn)染空載體組的Eca109細胞凋亡率(26.9%±0.61%),差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論1. PDCD4在食管癌Eca109細胞中成功轉(zhuǎn)染并穩(wěn)定表達。2. PDCD4轉(zhuǎn)染食管癌Eca109細胞并穩(wěn)定表達后,細胞的生長和增殖受到抑制,表明PDCD4可以抑制食管癌Eca109細胞的生長。3. PDCD4在食管癌Eca109細胞穩(wěn)定表達后可以促進細胞的凋亡,表明促進細胞凋亡可能為PDCD4的一個抑癌機制。
【關(guān)鍵詞】：PDCD4 食管癌 PCR Western blot
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R735.1
【目錄】：

• 中文摘要8-10
• ABSTRACT10-12
• 符號說明12-13
• 第一章 前言13-15
• 1 研究背景13-14
• 2 研究目的和意義14-15
• 第二章 文獻綜述15-23
• 1 食管癌15-19
• 1.1 食管癌一般情況概述15
• 1.2 食管癌發(fā)病的主要危險因素15-17
• 1.3 食管癌的治療概述17-19
• 2 程序性細胞死亡因子419-23
• 2.1 PDCD4的發(fā)現(xiàn)19-20
• 2.2 PDCD4在腫瘤中的表達和調(diào)節(jié)機制20-21
• 2.3 PDCD4的抑癌作用21-23
• 第三章 實驗材料與方法23-36
• 1 細胞23
• 2 實驗試劑及儀器23-25
• 2.1 轉(zhuǎn)染及培養(yǎng)細胞所用的主要實驗試劑23
• 2.2 蛋白提取及Western blot所用試劑23-24
• 2.3 PCR實驗試劑24
• 2.4 流式細胞術(shù)實驗試劑24
• 2.5 實驗儀器24-25
• 3 實驗步驟25-36
• 3.1 細胞處理25-26
• 3.2 脂質(zhì)體介導(dǎo)PDCD4真核表達載體轉(zhuǎn)染26-27
• 3.3 Western blot實驗方法27-31
• 3.4 PCR試驗方法31-34
• 3.5 流式細胞術(shù)實驗方法34-35
• 3.6 統(tǒng)計方法35-36
• 第四章 結(jié)果36-39
• 1 外源性PDCD4基因在食管癌Eca109細胞的表達36-37
• 1.1 外源性PDCD4蛋白在細胞系內(nèi)的表達36-37
• 1.2 外源性PDCD4mRNA在細胞系內(nèi)的表達37
• 2 PDCD4表達對食管癌細胞形態(tài)產(chǎn)生的影響37-38
• 3 PDCD4表達對食管癌細胞生長產(chǎn)生的影響38
• 4 PDCD4表達對食管癌Eca109細胞凋亡產(chǎn)生的影響38-39
• 第五章 討論39-42
• 第六章 結(jié)論42-44
• 1 小結(jié)42
• 2 創(chuàng)新性和不足之處42
• 3 研究感悟42-44
• 參考文獻44-50
• 致謝50-51
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表的論文目錄51-52
• 學(xué)位論文評閱及答辯情況表52

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